Meni kadın üreme sistemi ve meni الرسالة farelerde ölçümü sonrası çiftleşme koleksiyonu
Summary
Meni الرسالة sperm seminal jel–dan özgür olmak için gereklidir. Bu çalışma yordamları kadın üreme sistemi sonrası cinsel birleşme sperm toplama ve meni الرسالة Süre ölçümünü sağlar.
Abstract
Farelerde, boşalmış sperm rahim içinde yatırılır. Boşalma sonra meni değiştirir tutarlılık jel benzeri için sulu, adı verilen işlem الرسالة. Bu çalışmada, kadın üreme sistemi bir fare modeli sonrası ejaculated meni toplamak için nasıl gösterir. İlk, yetişkin dişi fareler içinde estrus sahne bir erkeğin kafeste gecede yer. Ertesi sabah, birleşme vajinal açılışında çiftleşme fiş varlığı tarafından doğrulandı. Çiftleşme tıkacı ile dişi fareler euthanized ve üreme her yolu (vajina, rahim, oviducts, yumurtalık), bir bütün olarak toplanan meni içerecek şekilde kapalı bir sistem sağlamak. Vajina meni tüpün içine serbest bırakmak için kesilmiş ve üreme yolu bir 1.5 mL microcentrifuge tüp yerleştirildi. En fazla sperm cilt analizi için emin olmak için dişsiz forseps vajinal sona kalan meni kovma yumurtalık ucundan boynuzları rahim sıkmak için kullanılmıştır. Tüm üreme yolu sonra atıldı. Meni içeren tüp kısaca aşağı bükülmüş. 25 μL kapiller pipet 180 ° açıyla (tüp duvara paralel) tüp içine yerleştirilmiştir. Kılcal Boru 25 μL hattına doldurmak için kullanılan süreyi kaydedildi. Meni–dan a kanıtlanmış erkek doğurmak genellikle yaklaşık 60-180 s 25 μL kılcal tüp doldurmak için alır. Bu sperm toplama tekniği de sperm görüntüleme ve motilite analizi gibi aşağı akım diğer uygulamalarda kullanılabilir.
Introduction
Kadın üreme yolu alt ve üst yolları oluşur. Üst üreme yolu fallop tüpleri, rahim ve endocerviks içerir. Alt üreme sistem ectocervix ve vajina içerir. İnsanlarda, vajina, ectocervix1‘ e komşu ön duvara ejaculated meni yatırılır. Farelerde, ancak, sperm rahim içine2çiftleşme sonra dakika içinde süpürüldü.
Sperm boşalma, sperm entrapped neden zarfında katılaşmış ve3immobilize seminal jel içerir. الرسالة immobilize sperm meni bir jel gibi sulu bir tutarlılık değiştirerek serbest bırakır. Sperm motilitesi ve memeli üreme için gerekli bir süreçtir. Meni الرسالة bilgisine nerede meni bir kültür tabak içinde sıvılaştırılmış olur vitro çalışmalar çoğunlukla dayanmaktadır. İnsanlarda, enzimatik aktivite Prostat spesifik antijen veya PSA (olarak da bilinen kallikrein ilgili peptidaz 3 veya KLK3) semenogelins (meni mevcut proteinler jel şekillendirme)4 hidroliz ile الرسالة için büyük katkıda bulunuyor. ,5,6. Semenogelins bozulma sperm sperm hareketliliği artan seminal coagulum, dan özgür kılar. Sperm yüzmek fallop tüpü yumurtayı döllemek için doğru serbest. الرسالة (ya da meni viskozite) bir erkek üreme7değerlendirmek için doğurganlık klinikleri semen analizi için standart ilk gösterimleri testlerdir.
Kısa bir süre önce bir makale dişi fare üreme yolu sonrası çiftleşme üzerinden toplanan meni analizi daha sonra doğurganlık kusurları8neden olabilir الرسالة bir eksikliği göstermek için kullanılabileceğini gösterir. Meni hiperviskozite gibi arızalı الرسالة infertil erkek9normal الرسالة memeli üreme için vazgeçilmez olduğunu düşündüren, durumlarda 11,8 32.3 oranında katkıda bulunur. Ancak, çalışmalar ve الرسالة kusur tedavisinde sadece erkek7üzerinde odaklanmıştır. Kadın üreme sistemi meni الرسالة içinde bir rol oynar olasılığını araştırdı değil. Bu nedenle, sperm toplama ve الرسالة zaman ölçme yöntemleri araştırmacılar الرسالة ilgi model organizma olarak infertilite nedenlerinden biri olabilir olup olmadığını belirlemek için yeni bir tanı aracı sağlar.
Protocol
Representative Results
Discussion
Meni ve kadın üreme yolu. salgılar arasındaki fizyolojik etkileşimler eski gösterdiği gibi fare uteri sperm toplama semen analizi vitro avantajları sağlayabilir Bu çalışmada sunulan teknikleri araştırmacılar sperm kalitesi hem de sperm canlılığı ve motilite ideal fizyolojik koşullarda belirlemek için izin verir. Ayrıca, uteri toplanan sperm kullanılarak gerçekleştirilen çeşitli aşağı akım analizleri, örneğin, sperm rahim ve sperm girme gerçek sperm sayısı ayrıca hare…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu eser WW veteriner tıp Koleji (WSU) başlangıç fon tarafından desteklenmektedir. Yazarlar Sierra Olsen (WSU) bu el yazması eleştirel okuma için teşekkür ederiz.
Materials
| Toothpick | Diamond | 750-Flat | Autoclaved sterile, use blunted toothpick. Do not use point-ended |
| Dissecting scissors | Fisher | 08-940 | |
| Spring scissors | Roboz | RS-5600 | |
| Fine forceps | Roboz | RS-5045 | |
| 25-μL glass capillary tube | VWR | 53432-761 | |
| Leibovitz’s L-15 media | Life Technologies | 11415064 | Supplement with 1% FBS |
| Fetal bovine serum (FBS) | Gemini Bio-Products | 100-106 | |
| 1.5-mL microcentrifuge tube | Axygen | MCT-150-C | |
| 2-mL microcentrifuge tube | Axygen | MCT-200-A | |
| Digital dry block heater | VWR | 13259-052 | For warming the microcentrifuge tube prior to semen collection |
| Minicentrifuge | Corning | LSE 6765 | |
| 35-mm culture dish | VWR | 10861-656 | |
| 15-mL polypropylene centrifuge tube | VWR | 10025-686 | |
| Waterbath | Precision | TSGP05 | |
| Heated stage stereomicroscope | Leica Microsystems | MZ10F | To keep the tissue warm prior to semen collection |
| Brightfield microscope | Leica Microsystems | DMi8 | Optional. For video imaging of the sperm motility |
| Camera | Leica Microsystems | DMC2900 | Optional. For video imaging of the sperm motility |
| Glass slides | Fisher | 12-552-3 | Optional. For video imaging of the sperm motility |
| Coverslip | VWR | 48393-059 | Optional. For video imaging of the sperm motility |
| Bleach | Dilute in dH2O to 10% concentration |
References
- Suarez, S. S., Pacey, A. A. Sperm transport in the female reproductive tract. Hum Reprod Update. 12 (1), 23-37 (2006).
- Bedford, J. M., Yanagimachi, R. Initiation of sperm motility after mating in the rat and hamster. J Androl. 13 (5), 444-449 (1992).
- Lilja, H. Cell biology of semenogelin. Andrologia. 22 Suppl 1, 132-141 (1990).
- Lilja, H., Abrahamsson, P. A., Lundwall, A. Semenogelin, the predominant protein in human semen. Primary structure and identification of closely related proteins in the male accessory sex glands and on the spermatozoa. J Biol Chem. 264 (3), 1894-1900 (1989).
- Veveris-Lowe, T. L., Kruger, S. J., Walsh, T., Gardiner, R. A., Clements, J. A. Seminal fluid characterization for male fertility and prostate cancer: kallikrein-related serine proteases and whole proteome approaches. Semin Thromb Hemost. (33), 87-99 (2007).
- Emami, N., Deperthes, D., Malm, J., Diamandis, E. P. Major role of human KLK14 in seminal clot liquefaction. J Biol Chem. 283 (28), 19561-19569 (2008).
- Gerhard, I., Roth, B., Eggert-Kruse, W., Runnebaum, B. Effects of kallikrein on sperm motility, capillary tube test, and pregnancy rate in an AIH program. Arch Androl. 24 (2), 129-145 (1990).
- Li, S., Garcia, M., Gewiss, R. L., Winuthayanon, W. Crucial role of estrogen for the mammalian female in regulating semen coagulation and liquefaction in vivo. PLoS Genet. 13 (4), e1006743 (2017).
- Elia, J., et al. Human semen hyperviscosity: prevalence, pathogenesis and therapeutic aspects. Asian J Androl. 11 (5), 609-615 (2009).
- Winuthayanon, W., Hewitt, S. C., Orvis, G. D., Behringer, R. R., Korach, K. S. Uterine epithelial estrogen receptor alpha is dispensable for proliferation but essential for complete biological and biochemical responses. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (45), 19272-19277 (2010).
- McLean, A. C., Valenzuela, N., Fai, S., Bennett, S. A. Performing vaginal lavage, crystal violet staining, and vaginal cytological evaluation for mouse estrous cycle staging identification. J Vis Exp. (67), e4389 (2012).
- JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Fundamentals of Breeding and Weaning. JoVE. , (2017).
- Prassas, I., Eissa, A., Poda, G., Diamandis, E. P. Unleashing the therapeutic potential of human kallikrein-related serine proteases. Nat Rev Drug Discov. 14 (3), 183-202 (2015).
- Muytjens, C. M., Vasiliou, S. K., Oikonomopoulou, K., Prassas, I., Diamandis, E. P. Putative functions of tissue kallikrein-related peptidases in vaginal fluid. Nat Rev Urol. 13 (10), 596-607 (2016).
