Здесь мы представляем частичное желчных протоков лигирование как модель хирургической травмы печени и регенерации в грызунов.
Грызунов полный желчных протоков перевязки (cBDL) общего желчного протока является установленным хирургическая техника для изучения обструктивного холестаза и желчных путей распространения. Однако долгосрочные эксперименты могут привести к увеличению заболеваемости и смертности. В выберите мышь штаммы с основной болезни печени значимые сопоставления могут проводиться даже с перевязкой один лепесток печени, которые могут уменьшить животных потери и расходы. Здесь мы описываем перевязки (pBDL) частично желчных протоков в мыши, в котором перевязано только левой печени желчных протоков, вызывая непроходимость желчных в левой доле, но не остальных долей. С осторожным микрохирургической техники pBDL эксперименты могут быть экономически эффективными, поскольку unligated мочку служит в качестве внутреннего управления для перевязаны лопастями, при тех же условиях, в то же самое животное. В отличие от cBDL отдельный Шам-управления группа не является необходимым. pBDL очень полезна для непосредственно сравнить локализованные против системные эффекты холестаза и других компонентов, сохраненных желчи. pBDL может также использоваться как новый метод для изучения механизмов, связанных с лекарства и миграции клеток.
Хирургическое модели острого повреждения печени и ремонт, как частичной гепатектомии или общего желчного протока перевязки (cBDL), использовали на протяжении десятилетий в грызунов для изучения регенерации печени и pathobiology1,2. В cBDL перевязано общего желчного протока (который истощает все желчи в печени), приводит к обструктивной холестаза, воспаление и фиброза в первые 2-3 недели после операции, с возможного прогрессирования цирроз3. Распространения желчных протоков, transdifferentiation и индукции-резидентов печени прогениторных клеток являются также особенности cBDL4,5. Хотя cBDL разъясняются конкретные механизмы хронической cholangiopathy, которые хорошо изученных с воспроизводимость результатов в мышах одичал типа и тех штаммов с нормальной печень6,7,8, процедура может технически сложных в некоторых моделях трансгенные мыши заболеваний печени, требующих более животных, чем ожидалось, из-за более высокой заболеваемости и смертности желчных препятствий с течением времени. Этот метод также полезен для изучения трансгенных мышей с лежащим в основе печени заболевания, которые могут в противном случае не терпеть стресс длительное время экспериментов курс после cBDL.
pBDL может обеспечить разумную альтернативу помочь преодолеть некоторые из этих проблем. Первоначальный pBDL исследований в мышах одичал тип стремились различать локально действуя и системных медиаторов воспаления9. В pBDL основной желчных слияния правой и левой печени желчных протоков выше общего желчного протока тщательно визуализируется в рубчик, и только левая печеночная желчных протоков перевязано для создания локализованных обструктивного холестаза. pBDL предлагает ряд преимуществ для cBDL. В pBDL unligated правой доли служит одинаково соответствием внутреннего контроля для перевязаны левой доли, подвергается же системные эффекты, такие как состояние питания или циркулирующим факторов. Хотя присутствовали системные Провоспалительных медиаторов, Осава et al. наблюдается меньше фиброз и некроз в unligated лопастями, но более воспалительных клеток и преобразование фактор роста β выражение в перевязаны доли9.
Совсем недавно pBDL была пересмотрена для изучения печени Паренхиматозный эффекты нераспределенной желчь10. С помощью же животное для внутреннего контроля (unligated «Шам») и экспериментальных групп, pBDL эффективно половинки количество животных, необходимых на эксперимент, который в свою очередь является более экономически эффективным. Мышей терпеть последствия pBDL гораздо лучше, так что идеальное время, курс эксперимент (≥2 недель) может быть достигнуто в перевязаны доле. Самое главное pBDL можно выделить прямые последствия внутрипеченочных обструктивного холестаза и сохранил желчи компоненты в перевязаны доле, по сравнению с unligated управления мочку. В целом pBDL-привлекательный метод для изучения воздействия доли конкретных локализованных холестаза в печени.
Хотя cBDL является наиболее распространенным Экспериментальная техника для обструктивного холестаза, он может представлять множество проблем в грызунов. В зависимости от количество послеоперационных дней, необходимых для достижения конечной точки животных может испытать значительны…
The authors have nothing to disclose.
Д-р Хан признает поддержке гранта NIH/NICHD K12HD052892, альфа-1 фонд, Фонд Хиллман и исследовательский центр в Питтсбурге печени. Д-р Михалопулос признает Грантовая поддержка от NIH/NIDDK P01DK096990. Мы высоко ценим прекрасный и щедрый технической помощи Anne Орр. Мы признательны также д-р Дэвид а. Геллер для предоставления доступа к лаборатории трансплантации/грызунов микрохирургии.
Microscope-Leica Wild M650, 6–40× magnification | Leica Microsystems | n/a | |
Tec 3 isoflurane funnel fill vaporizer | General Anesthetic Services | n/a | |
Stevens Tenotomy Scissors | Accurate Surgical & Scientific Instruments Corporation | ASSI.9193 | |
Adson Forceps | Fine science tools | 11006-12 | |
Mosquito classic delicate hemostatic forceps | Codman | 30-4472 | |
Micro-retractor | Murdock; Roboz Surgical Instrument | RS-6550 | |
Nonwoven gauze sponges | Fisherband | 870-PC-DBL | |
Puritan 6” Small Cotton Swab w/Wooden Handle | Puritan Medical Products Company | 868-WCS | |
Dumont SS Forceps – Standard Tips/Straight/Inox/13.5cm | Fine science tools | 11203-23 | |
Dumont SS Forceps – Standard Tips/Angled 45°/Inox/13.5cm | Fine science tools | 11203-25 | |
Vannas Spring Scissors – 3mm Cutting Edge | Fine science tools | 15000-00 | |
Microneedle holder | Aesculap Surgical Instruments | FD231R | |
Micro AROSuture, sterile 10-0 nylon suture, 70 µm, TAP points | AROSurgical Instruments Corporation | T4A10N07 | |
4-0 Vicryl | Ethicon | J662H | |
5-ml Syringe | BD | 309646 | |
Falcon tissue culture dish, 60 × 15 mm | Corning | 353002 | |
Isoflurane, United States Pharmacopeia (USP) liquid for inhalation, 250 ml | Piramal Healthcare | NDC 66794-017-25 | |
Buprenex injectable (buprenorphine hydrochloride) | Reckitt Benckiser Pharmaceuticals | NDC 12496-0757-1 | |
Cefazolin for injection , USP | APP Pharmaceuticals | NDC 63323-238-61 | |
PVP scrub solution (povidone–iodine 7.5%) | Medline | NDC 12496-0757-1 | |
70% Ethanol | Decon Labs | 2716 | |
Phosphate Buffered Saline Without Calcium or Magnesium | LONZA | 17-516F | |
Sirius Red | Sigma | 365548 | |
Hematolxylin | Fisher (Richard-Allan Scientific) | 22-050-111 (7211) | |
Eosin | Anatech (Fisher) | 832 (NC9686037) | |
Formalin | Fisher | SF100-20 |