Une méthode Simple et efficace pour la Manipulation de gène spécifique cardiaque In Vivo par intramyocardique Injection chez la souris

Yanan Fu; Wenlong Jiang; Yichao Zhao; Yuli Huang; Heng Zhang; Hongju Wang; Jun Pu

doi:10.3791/57074

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Article de méthode

Une méthode Simple et efficace pour la Manipulation de gène spécifique cardiaque In Vivo par intramyocardique Injection chez la souris

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DOI :

10.3791/57074

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16 avril 2018

Yanan Fu^*¹^,² , Wenlong Jiang^*² , Yichao Zhao^*² , Yuli Huang¹ , Heng Zhang¹ , Hongju Wang¹ , Jun Pu¹^,²

¹Department of Cardiology, The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College, ²Department of Cardiology, Ren Ji Hospital, School of Medicine, Shanghai Jiao Tong University

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Nous présentons ici un protocole pour manipulation spécifique cardiaque génétique chez la souris. Sous anesthésie, le coeur de souris ont été externalisé par le quatrième espace intercostal. Par la suite, adénovirus, codage de gènes spécifiques ont été injectés avec une seringue dans le myocarde, suivi par mesure d’expression de protéines via l’imagerie in vivo et Western blot analyse.

Résumé

Manipulation génétique spécifiquement au coeur potentialisent considérablement l’enquête de cardiopathie pathomécanismes et leur potentiel thérapeutique. In vivo la livraison gène spécifique cardiaque est généralement obtenue par livraison locale ou systémique. L’injection systémique via la veine caudale est simple et efficace pour manipuler l’expression des gènes cardiaques à l’aide de virus recombinant adéno-associés 9 (AAV9). Toutefois, cette méthode requiert une quantité relativement élevée de vecteur pour la transduction efficace et peut entraîner dans la transduction du gène orgue non ciblés. Nous décrivons ici une méthode simple, efficace et gagner du temps d’injection intramyocardique pour la manipulation spécifique cardiaque gène in vivo chez la souris. Sous anesthésie (sans ventilation), les muscles pectoraux de majeurs et mineurs ont été disséqués sans ménagement, et le coeur de souris a été rapidement exposé par externalisation manuelle par une petite incision à la quatrième espace intercostal. Par la suite, adénovirus encodage luciférase (Luc) et récepteur de la vitamine D (VDR) ou l’ARN en épingle à cheveux courts (shARN) ciblant les VDR, a été injecté avec une seringue de Hamilton dans le myocarde. Subséquent en vivo imagerie démontré que luciférase a été avec succès surexprimée spécifiquement au cœur. En outre, analyse par Western blot a confirmé la surexpression réussie ou silencieux du VDR dans le coeur de souris. Une fois maîtrisé, cette technique peut servir pour les manipulations génétiques, ainsi que l’injection de cellules ou d’autres matériaux tels que nanogels dans le coeur de souris.

Introduction

La maladie cardiaque est la principale cause de morbidité et mortalité dans le monde¹^,². L’absence de stratégies thérapeutiques efficaces pour troubles cardiaques mortelles, y compris l’infarctus du myocarde et insuffisance cardiaque attire une exploration intensive des pathomécanismes sous-jacente et l’identification de nouvelles options thérapeutiques³. Pour ces explorations scientifiques, manipulation génétique spécifique cardiaque est largement utilisé⁴^,⁵. Manipulation génétique cardiaque peut être réalisée par génome éditio....