がんバイオ マーカーを評価するサンプル貯蔵のための便利なツールとして血液や血清スポットを乾燥
Summary
このプロトコルでは、末梢血および単一ヌクレオチド多型 (SNP) の評価や ELISA アッセイなどの下流解析の血清/血漿を格納する簡単で便利な方法について説明します。
Abstract
血液サンプルの品質は、リアルタイム PCR や ELISA など正確な下流解析のために重要です。生物学的材料の適切な保管は、再現性と信頼性の高い結果を達成するための開始点です。すべてのサンプルは、ストレージに採血から同じ方法で扱われるべき。によって実行される解析、全血、血清使用まで-80 ° C または-20 ° C で保存される必要があります。血液/血清サンプルは、複数の凍結を避けるために検体もあります。もう一つの重要な問題は 1 つの研究所からの出荷時にサンプル条件です。ドライアイスは出荷が数日以上かかる場合、代替的なアプローチが必要です。1 つのオプションは、採血用ろ紙を使用することです。ここでの血のための手法を提案、血清サンプル コレクションを利用した乾燥血液スポット (DBS) 血清スポット (DSS) を乾燥します。リアルタイム PCR によるいくつかの単一のヌクレオチドの多形 (SNPs) の下流の評価のための DBS から DNA を抽出するプロシージャを開発しました。我々 は、DSS から溶出蛋白質から ELISA アッセイも最適化。このメソッドは、他の ELISA アッセイまたは蛋白質の評価の手順で使用できます。
Introduction
がんバイオ マーカーを研究の主な目的は、診断、予後予測、および患者が特定の治療に応答するかどうかを決定するために使用できる新しい生物学的パラメーターの id です。本研究領域は、革新的ながん治療法の発見のための基礎で合わせた治療で重要な役割を果たしています。
バイオ マーカーの同定と検証の各段階を実施は、信頼性と再現性のある必要があります。トランスレーショナル ・ リサーチの成功の礎は、血液や血清などの生体サンプルの適切なストレージです。これは、分子生物学実験や蛋白質の試金の実行するために使用できる高品質の生物材料の取得への第一歩です。
多施設共同研究が堅牢なデータを取得する十分な患者を募集する必要多くの場合です。すべての機関は-80 ° c のサンプルを格納するまたはドライアイスの他の国際センターにサンプルを送信することができます。採血用ろ紙を血液や血清を保存する簡単な方法し、サンプル1,2の即時凍結を必要としません。血液や血清のドロップは、一晩乾燥して左右の部屋の温度1,2では、14 日間保存されます紙の上に発見できます。これは研究者に他の研究室にサンプルを送信する時間を与えます。乾燥血液の使用スポット (DBS) と乾燥血清スポット (DSS) したがって先進国と発展途上国の機関間のコラボレーションを単純化します。
その使いやすさを考えると、DBS サンプリングを試金のいくつかの種類の血清学的または遺伝的下流解析の使用広く。たとえば、過去には、DBS 頻繁 HIV 発展途上国1,2,3,4、5のスクリーニングの使用されました。このストレージ メソッドのもう一つの利点は指呵責、新生児スクリーニング テスト6,7,8での使用ができ採取血液サンプルすることができます。簡単な検体の取扱い、輸送、さらにリモート サイトに収集されたサンプルのために特に DBS の利点実験装置がないです。前の文書で白人とアフリカの患者9一連のビタミン D とビタミン D 結合タンパク質 (DBP) をテストする DBS と DSS を使いました。アフリカの仲間たちは、ドライアイスを取得することができませんでした。ビタミン D 経路の 2 つの民族集団の間の違いを理解する生物学的マーカーを比較して一致したサンプルを標準的な条件の下で、フィルター紙の上を格納を使用してプロシージャをさらにアップ。DBS/DSS 手順を最適化した後 DBP と両方のコホートで患者血清中のビタミン D 分析することができました。また白人の全血およびアフリカ人9DB からの DNA の抽出後単一のヌクレオチドの多形 (SNPs) の数を調べた。この議定書は、ELISA の試金に分子生物学に至る下流解析の種類に影響を与えることがなく室温で保存する高品質な血液サンプルを許可します。通常の保管状態の施設を持っていないセンター、多施設共同研究で生体を管理するために使用をお勧めします。次のプロトコルの最適化手順の集大成を表します。
Protocol
Representative Results
Discussion
このプロトコルは、ラボ スタッフや血液サンプルの適切な処理に必要なインフラストラクチャを持たないときろ紙上血液及び血清を保存するための可能性を追究します。特に、このメソッドを使用して、全血または血清標準管または指刺すによって収集を格納できるし、採血後すぐに-20 ° C または-80 ° C でサンプルを凍結する必要はありません。DBS/DSS は、血液/血清整合性の変更なしに 14 ?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我々 は編集者の支援のため Gráinne ティアニーを感謝したいです。
Materials
| Whatman protein saver cards 903 Protein saver card, 100/pk | Sigma | Z761575 | Useful to store samples at room temperature for downstream analyses |
| Falcon Serological Pipettes, 5 mL | Stem cell | #38003 | |
| 50-200 µL tips | Star-Lab | S1120-8810 | |
| 1.5 mL centrifuge tube | Eppendorf | 4036-3204 | |
| QIAamp DNA microkit | Qiagen | 56304 | This is a DNA extraction kit designed to isolate small quantities of DNA |
| Buffer ATL (included in QIAamp DNA microkit) | Qiagen | This is reported as Lysis Buffer 1 in the text | |
| Buffer AL (included in QIAamp DNA microkit) | Qiagen | This is reported as Lysis Buffer 2 in the text | |
| QIAamp mini elute column | Qiagen | This is reported as column in the text | |
| AW1 (included in QIAamp DNA microkit) | Qiagen | This is reported as Wash Buffer 1 IN THE TEXT | |
| AW2 (included in QIAamp DNA microkit) | Qiagen | This is reported as Wash Buffer 2 in the text | |
| Human Vitamin D BP Quantikine ELISA Kit | R&D systems | DVDBP0 |
References
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