Sang et sérum taches séchées comme un outil utile pour la conservation de l’échantillon afin d’évaluer les biomarqueurs du Cancer

Résumé

Ce protocole décrit une méthode simple et utile pour stocker le sang périphérique et le sérum/plasma pour des analyses en aval comme single nucleotide polymorphisme (SNP) évaluation et analyse d’ELISA.

Résumé

Qualité d’échantillon de sang est essentielle pour assurer des analyses précises en aval comme la PCR en temps réel ou de ELISA. Un stockage correct des matériaux biologiques est le point de départ pour obtenir des résultats fiables et reproductibles. Tous les échantillons doivent être traités de la même manière de collecte de sang au stockage. Selon les analyses à effectuer, le sang et les échantillons de sérum doivent être conservées à-20 ° C ou à-80 ° C jusqu'à l’utilisation. Des échantillons de sérum sanguin/devraient également être aliquotés pour éviter les multiples de gel-dégel. Une autre question importante est les conditions de l’échantillon lors de l’expédition d’un laboratoire à l’autre. Si la glace sèche n’est pas disponible ou l’expédition prend plue que quelques jours, autres approches sont nécessaires. Une option consiste à utiliser le papier filtre pour la collecte de sang. Ici, nous proposons une méthode pour le sang et le prélèvement d’échantillons de sérum qui profite du sang séché (DBS) et séché de sérum (DSS). Nous avons développé la procédure pour extraire l’ADN de DBS pour l’évaluation en aval de quelques simples de nucléotide simple (SNP) par PCR en temps réel. Nous avons également optimisé un test ELISA à partir de protéines éluées de DSS. Cette méthode peut être utilisée avec d’autres tests ELISA ou les procédures d’évaluation des protéines.

Introduction

L’objectif principal de la recherche sur les biomarqueurs du cancer est l’identification de nouveaux paramètres biologiques qui peut être utilisé pour le diagnostic, pour prédire pronostic patient et pour déterminer si un patient va réagir à un traitement spécifique. Ce domaine de recherche est fondamental pour la découverte de traitements novateurs contre le cancer et joue un rôle clé dans le traitement sur mesure.

Les procédures effectuées au cours de chaque étape de l’identification de biomarqueurs et de validation doivent être fiables et reproductibles. Des pierres angulaires du succès de la recherche translationnelle sont le stockage c....

Protocole

Sérum et le sang périphérique ont été recueillies et stockées de donneurs sains et de patients qui ont donné le consentement éclairé pour participer à l’étude. Le protocole de l’étude a été approuvé par le Comité d’éthique local conformément aux normes éthiques fixés dans la déclaration d’Helsinki de 1964.

1. sang entreposage à DBS

1. Prélèvement d’échantillons de sang
   1. Collecter 3 mL d’échantillon de sang périphérique dans un tube de 3 mL avec 5,4 mg d’acide tétraacétique (EDTA).
      NOTE : Stocker le sang périphérique comme DBS dès que possible et dans les 8 h.
   2. Écrire le numéro de code du patien....

Résultats

Nous avons profité des DBS et DSS procédures pour stocker le sang et le sérum à la température ambiante sans affecter la qualité de la matière biologique. La figure 1 montre un exemple de l’épargnant de carte de protéines sans sang et après prélèvement sanguin. Afin de confirmer que le stockage sur un papier filtre et la procédure pour éluer sang n’interfèrent pas avec la qualité de l’échantillon, nous avons effectué une comparaison avec les méthodes de stock.......

Discussion

Le présent protocole examine le potentiel pour le stockage de sérum et sang sur un papier filtre lorsque les laboratoires n’ont pas le personnel ou les infrastructures nécessaires pour la manipulation correcte des échantillons de sang. En particulier, le sang ou le sérum recueillis dans des tubes standards ou par piqûre doigt peut être stockée à l’aide de cette méthode et il n’y a pas besoin de congeler les échantillons à-20 ° C ou à-80 ° C immédiatement après le prélèvement de sang. DBS/DSS peut rester à température amb.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Whatman protein saver cards 903 Carte d’économie de protéines, 100/pk&lrm ;	Sigma	Z761575	Utile pour stocker les échantillons à température ambiante pour les analyses en aval
Pipettes sérologiques Falcon, 5 mL	Cellule souche	#38003
50-200 µ ; L tips	Star-Lab	S1120-8810
Tube à centrifuger de 1,5 mL	Eppendorf	4036-3204
Microkit d’ADN QIAamp	Qiagen	56304	Il s’agit d’un kit d’extraction d’ADN conçu pour isoler de petites quantités d’ADN.   ;
Tampon ATL (inclus dans le microkit QIAamp DNA)	Qiagen		Ceci est signalé comme Tampon de lyse 1 dans le texte
Tampon AL (inclus dans le microkit QIAamp DNA)	Qiagen		Ceci est signalé comme Tampon de lyse 2 dans le texte
QIAamp mini élu colonne	Qiagen		Ceci est signalé comme colonne dans le texte
AW1  ; (inclus dans le microkit QIAamp DNA)	Qiagen		Ceci est signalé comme Tampon de lavage 1 DANS LE TEXTE
AW2  ; (inclus dans le microkit QIAamp DNA)	Qiagen		Ceci est signalé comme Wash Buffer 2 dans le texte
Vitamine D humaine BP Quantikine ELISA Kit	R& D systems	DVDBP0