بروتوكول لاستخراج كوصي بيريبلاسميك انتقال المعدن في سياق شركائها الربط الأصلية، وتوصيف البيوفيزيائية محتوياته الركيزة بالاقبال على الأسفار وراديوميتال ويرد بالأشعة السينية.
ونحن تثبت أسلوب قابلة للفصل بين بيريبلاسم البكتيرية من السيتوبلازم. يتم استخدام هذا الأسلوب لتنقية البروتين بيريبلاسميك غرض توصيف الفيزيائية، وتدبير الركازة نقل بين الأقسام بيريبلاسميك وحشوية. عن طريق الحد من الوقت الذي يفصل في بيريبلاسم من السيتوبلازم بعناية، يمكن استخراج بروتين اهتمام المجرب والاعتداء كل حجرة منفردة للركيزة دون تلوث المرحل بين الأقسام. ثم يمكن أن تحلل البروتين المستخرج من تجزئة لتصميم هيكل ثلاثي الأبعاد أو ملامح الركازة ملزمة كذلك. وبدلاً من ذلك، يمكن تنفيذ هذا الأسلوب بعد الحضانة مع راديوتراسير تحديد إجمالي نسبة الإقبال، فضلا عن التوزيع للتتبع (والمعادن ومن ثم النقل) عبر الأقسام البكتيرية المختلفة. يمكن أن يساعد التجريب مع راديوتراسير التفريق بين الركيزة الفسيولوجية والركيزة أرتيفاكتوال، مثل تلك التي تسببها ميسميتاليشن.
يمكن استخدام الأشعة الفلورية اكتشاف وجود أو غياب التأسيس معدنية في عينة، فضلا عن قياس التغيرات التي قد تحدث في إدراج معدنية كمنتج ظروف النمو وظروف تنقية، و/أو ظروف التبلور. كما يوفر fluorescence الأشعة السينية قياس نسبي لوفرة لكل معدن، التي يمكن استخدامها لتحديد أفضل ذروة امتصاص الطاقة المعدنية لاستخدامها لجمع البيانات تبعثر الأشعة السينية الشاذة. امتصاص راديوميتال يمكن استخدامها كوسيلة للتحقق من طبيعة الركازة الكشف عنها بواسطة الأشعة السينية fluorescence الفسيولوجية، فضلا عن دعم اكتشاف ركائز الرواية.
في بكتيريا سلبية الغرام، زادت هيولى تجمعات من ذرات المعادن الانتقالية وتتجدد المستوردين (ATP ملزم كاسيت) ABC الغشاء الداخلي التي تخفف من إزفاء معدنية عبر الغشاء الداخلي. بيريبلاسميك الكتلة A-1 الركازة ملزم البروتينات (سببس) إنشاء مجموعة من مرافقين التي تربط ذرات المعدن مباشرة والعبارات لهم عن طريق بيريبلاسم تسليمها ل المستوردين ABC المشابهة1. مجموعات أخرى “من سببس” مخصصة لنقل ركائز، مثل المعادن الكلاب (الكتلة A-2) والكربوهيدرات (ب الكتل و D-1)، والأحماض الأمينية (مجموعات ب وج F-2 و F-4)؛ ومع ذلك، بغض النظر عن الركازة، اتبع سببس المحافظة تقحم إضعاف المشبك ج2. ويشمل المعمم الآلية المقترحة لنقل الركيزة الاستراتيجية والخطة الاستشرافية تمر بسلسلة من الالتواءات التي تشبه فينوس صائدة الذباب3ج-المشبك. عموما، تنقية سببس A-1 الكتلة في نموذج (معادن-منضم) هولو، على الرغم من أن دراسة هذه سببس محدود بالصعوبة في توليد من البروتين للتجريب4أشكال apo (الخالية من المعدن). وحتى الآن، استراتيجيات لدراسة الاشتقاق الكتلة سببس A-1 اقتصرت على الطفرات والغسيل الكلوي وتمسخ الجزئي مع الإيثيلين حمض (يدتا) تشيلاتور5،6،،من78 , 9 , 10 , 11-تشير البيانات الهيكلية الناشئة من هذه التجارب أن الكتلة A-1 سببس قد لا تتبع التحديد إليه فينوس صائدة الذباب. حاليا في عداد المفقودين من الأدب أسلوب إنتاج apo سببس A-1 الكتلة في فيفو استخدام الشركاء ملزمة الفسيولوجية.
نظهر للمرة الأولى باستخدام تجزئة الخلية إلى تنقية إيفا، الكتلة A-1 الاستراتيجية والخطة الاستشرافية من واليرسينيا بيستيس، وكيل المسببة للطاعون، التي تم تحويلها إلى شكل الاشتقاق من خلال التفاعل مع المستورد “يفيبكدي أي بي سي” عن فسيولوجية المشابهة في الخلية. وتبين أننا إيفا في شكل الاشتقاق بالطاقة المشتتة مطيافية الأشعة السينية (EDS)، يعرف أيضا باسم الأشعة الفلورية. كما نبدي وظيفة يفيبكدي عن طريق الجمع بين وجود خلية مع دراسات امتصاص المعادن المشعة شديدة الحساسية للتمييز بين امتصاص المعادن عبر الغشاء الخارجي واستيراد المعادن عبر الغشاء الداخلي. يسمح استخدام الراسم المشعة للكشف عن كميات المعادن، أقل بكثير من الحد الأقصى للكشف عن جزء من الغرام/لتر لتقنيات هذه مقرونة الحث البلازما الكتلي (برنامج المقارنات الدولية–مرض التصلب العصبي المتعدد) أو مطيافية الامتصاص الذري (العاص). وهذا يسمح للحد الأدنى من اضطراب النظام قيد الدراسة. بالإضافة إلى ذلك، الأساليب التقليدية المذكورة غالباً ما تتطلب زيادة حجم العينة وتجهيز إضافية وأوقات أطول في الدوران، التي ليست نموذجية لفحوصات radiotracer. وهكذا، يوفر استخدام راديوتراسير طريقة مريحة وواضحة لرصد توزيع المعادن وامتصاص داخل خلية. أنه ما زال يتعين تحديد إذا كان الاشتقاق “الاستراتيجية والخطة الاستشرافية A-1 الكتلة” المنتجة باستخدام هذا الأسلوب أن اردد ملاحظات الهيكلية من الممارسات الحالية المستخدمة لتوليد البروتين الاشتقاق.
تجزئة الخلية الطريقة المتبعة لفصل المكونات الخلوية لغرض ضمني على وجه التحديد سبر محتوياتها في معزل عن12. وجود خلية يستخدم عادة لتأكيد موقع جزيء خلال دورة الخلية أو قياس نشاط حجرة خاصة13. على سبيل المثال، يمكن جزيئي نشاط النقل معدنية بسبر مقصورات الهاتف الخلوي للركيزة المعدنية. ويتيح إدماج تجزئة الخلية التمييز والمقارنة بين امتصاص المعادن عبر الغشاء الخارجي ونقل المعادن عبر الغشاء الداخلي. ثم يمكن بدوره قياس هذه العمليات على مر الزمن. في حالة تنقية البروتين، الأساليب الأكثر شيوعاً لتحلل الخلية وفصل المكونات القابلة للذوبان من مكونات غير قابلة للذوبان تعطل الميكانيكية (أي طحن، ومزج)، تجانس عالي الضغط (أي الصحافة الفرنسية الضغط الخلية، الخلية ديسروبتير)، وترددات الموجات فوق الصوتية (أي.، سونيكيشن)14. استخدام ترددات الموجات فوق الصوتية الخلايا عموما الأنسب لكميات صغيرة؛ ومع ذلك، المعروف سونيكيشن لتوليد الحرارة المفرطة التي يمكن أن تؤذي البروتين. لتجنب توليد الحرارة المفرطة، وترددات الموجات فوق الصوتية تطبق عادة في رشقات نارية قصيرة متتابعة، التي يمكن أن تكون مضيعة للوقت ودون قصد تتحلل جزيئات الحمض النووي إلى أجزاء أصغر. بالإضافة إلى ذلك، متعددة sonication مكلفة المسابير قد يكون مطلوباً للتجارب التحضيرية والتحليلية، كما كل التحقيق على نطاق محدود لحجم العينة التي يمكن معالجتها. ويتجنب استخدام الضغط العالي خلايا توليد الحرارة المفرطة أثناء تحلل الخلية التي تقشعر لها اﻷبدان مكونات الصحافة خلية الضغط الفرنسي قبل تفسخ أو تعمل disruptor خلية في بيئة باردة مثل غرفة باردة. مثل المجسات سونيكاتيون، قد تحتاج مجموعات متعددة من الضغط الفرنسي خلية الصحافة المكونات التي سيتم شراؤها لمعالجة مجموعة واسعة من أحجام العينة. الضغط الفرنسي خلية الصحافة التجميعات سهلة للاتصال ولكن محرجا لتشغيل والنظيفة، ويمكن أن تكون ثقيلة لنقل وعرضه لانسداد من عينات كثيفة. وتشمل مزايا لاستخدام ترددات الموجات فوق الصوتية ونظم ذات الضغط العالي إلى الخلايا الانتعاش عينة عالية، والقدرة على معالجة عينات متعددة مع الحد الأدنى من التلوث المتبادل، وقابل للتعديل القص القوة، التي يمكن تكييفها لتحلل الأمثل من مجموعة واسعة من أنواع العينات. يمكن أن يحدث التحسين عن طريق ضبط تردد الموجات فوق الصوتية، مدة رشقات نارية، ومكبس الضغط جنيه لكل بوصة مربعة (psi)، وعدد من يمر من خلال الصحافة. قد يكون استخدام تعطل الميكانيكية الخلايا الاستراتيجية تافهة من الناحية التقنية الأكثر والأقل تكلفة لتحلل الخلية. يمكن أن تشكل تحديات في استعادة عينة اختلال ميكانيكية وليست مثالية لتجهيز عينات متعددة. اختلال ميكانيكية الطف لعينات من ارتفاع الضغط أو ترددات الموجات فوق الصوتية، ولكن ليست عالية الإنتاجية ومعرضة لتحلل عدم كفاءة. حد تجريبية هامة تعطل الميكانيكية وتجانس الضغط العالي وترددات الموجات فوق الصوتية، هو تعطل البنية الخلوية كامل لا يمكن السيطرة عليها مثل أن يتم خلط جميع مكونات الخلية مائي بعد تحلل، معا. وعلاوة على ذلك، عدم تعطيل كل خلية المقصورات في نفس الوقت؛ ولذلك، محتويات مقصورات التي ليس في وقت مبكر يمكن أن تخضع القوات الهدامة الجارية أطول من محتويات مقصورات التي ليس في وقت متأخر. تجزئة الخلية يسمح لغير مكلفة، من الناحية الفنية مباشرة، كفاءة المستندة إلى حجرة فصل محتويات الخلية مع تجنب الحاجة إلى معدات غالية الثمن وعينه التعرض لقوى قاسية ومدمرة.
في حالة الاستراتيجية والخطة الاستشرافية، الركيزة المستوردة مجددا إلى احتمال apo البروتين وتجدد هولو البروتين خلال تحلل، قبل المصب اللوني أو غيرها من تقنيات تنقية. إدراج chelator يدتا أثناء تحلل يعرض عقبة إضافية، حيث تقارب معدنية كخطوة أولى لتنقية البروتين غير ممكن لأن يدتا سوف قطاع المعادن من الراتنج اللوني ومنع البروتين ملزمة15. حل بسيط وغير مكلف تجزئة الخلية بصدمة ناضح، فيها الطرد المركزي التفاضلي والكواشف المختبرية المشتركة تمكين المحقق لاستخراج البروتين الكافي للتحليل الوظيفي بعناية. ويستخدم تجزئة الصدمة ناضح تغيير خطوتين في الضغط الاسموزي لفصل المكونات الخلوية. أولاً، يؤدي المخزن مؤقت مكثف الخلايا كريناتي إلى الماء يترك كل خلية، وثانيا، مخزن مؤقت ناقص التوتر يسبب الخلايا إلى تضخم كما تدخل المياه إعادة كل خلية. عن طريق التحكم بدقة متى تضخم الخلايا، الأغشية الخارجي يمكن أن يكون انتقائيا تفكيك (بسبب تراكم الضغط الاسموزي من المياه الواردة)، وبالتالي إفراغ محتوياتها في المخزن المؤقت. وتكفل الحفاظ على الأغشية الداخلية التي يتم الاحتفاظ في جدارها محتويات هيولى، ومفصولة بسهولة من محتويات بيريبلاسميك بالطرد المركزي.
يفيا بوليسبيسيفيك قادرة على ربط الحديد والمنغنيز والزنك ذرات16الاستراتيجية والخطة الاستشرافية. الارتفاع النسبي للمعادن مدمجة يمكن تعديلها وفقا لمكملات المعادن في النمو، وجزيئي بالأشعة السينية الأسفار مثل يتوفر في مختبر أرغون الوطني المصدر فوتون متقدمة16. الأسفار الأشعة السينية تمكن المحقق للشخصية بسرعة جمعية واسعة من المعادن دون الحاجة إلى كبيرة أو بلورات نوعية الحيود، وحتى يمكن استخلاص البيانات من البروتين حل متعجل أو البروتينية.
Fluorescence الأشعة السينية يمكن بسرعة تكشف عن نتائج غير متوقعة، في هذه الحالة، إيفا الركيزة الأساسية يجري الزنك وغير موثقة من ركائز الفسيولوجية الحديد أو المنجنيز16. إذا تم استخدامها قبل جمع البيانات تبعثر الأشعة السينية، الأشعة الفلورية يمكن إبلاغ المحقق في التصميم التجريبي، مثل الذي edge(s) الطاقة المعدنية لاستخدامها لجمع البيانات تبعثر الأشعة السينية الشاذة. فقط مفيدة مثل تحديد الوفرة النسبية للأسفار الأشعة السينية معدنية، يمكن أيضا تحديد ما إذا كان معدن غائبة في عينة، توفر طريقة سريعة لفصل بلورات معدنية تحتوي على بروتين الاشتقاق من البروتين هولو، وتقدير قوة الإشارة دون الحاجة إلى تجهيز البيانات وقتاً طويلاً. عند تحديد عينة مع إشارة قوية بمعادن، يمكن تحديد الطول الموجي دقيقة لاستخدامها لجمع البيانات تبعثر الأشعة السينية الشاذ بواسطة المسح الضوئي المتعددة-الطول الموجي التشتت الشاذ (جنون).
هذا البروتوكول مفصلاً يهدف إلى مساعدة المجربون جديدة بنجاح تنفيذ تجزئة الخلية والاستخدام الفعال للأجهزة بيمليني السنكروتروني الشخصية مجموع المحتوى المعدني والنهوض بدراسة البروتينات المعدنية ملزم.
وجود خلية هو أداة مفيدة لاستكشاف محتويات حجرة الخلوية على وجه التحديد، ويمكن أن تكون بمثابة أداة مفيدة لاستخراج الجزيئات الصغيرة مثل الذرات المعدنية، وكذلك الجزيئات الكبيرة مثل البروتينات. تجدر الإشارة إلى أن وجود الخلية ليس أسلوب مطلق، ويمكن أن تكون دون عناية فائقة لخلط استثارة ودرجة حرارة الحضانة والحضانة وقت عرضه للخطأ. خلط غير مكتملة يمكن أن ينتج تحلل الغشائي الحد الأدنى وتجزئة ومن ثم لا يعتد بها، يمكن أن يسبب تجزئة في درجة حرارة الغرفة تحلل السريع الأغشية على حد سواء أدى إلى تلوث الكسر بيريبلاسميك مع محتويات هيولى، و يمكن أن يؤدي أوقات الاحتضان الموسعة أيضا تحلل المفرط، وبالتالي تلوث الكسر. هو حل وسط معقول لتحقيق تحلل الغشاء الخارجي الفعال والكامل نسبيا (مع الحفاظ على الغشاء الداخلي) الحضانة 20 دقيقة فوق الجليد في المخزن المؤقت لتجزئة ناقص التوتر. هناك اعتبار آخر هو طريقة الاستخراج، حيث استخراج قاسية بالهز أو دوامة يمكن أن تهدد نوعية استخراج مثل التسبب في تجميع البروتين. من المستحسن أن تخلط بلطف مثل ملعقة أو انعكاس أو يسفط ماصة للحفاظ على جودة عالية من المواد لتحليل المتلقين للمعلومات. يمكن أن يحدث تنقية من وجود خلية محضرة مع متغير الكفاءة كما يتضح من الشكل 1. في تجربة واحدة، بدأ يفيا بنسبة 8% المحتوى بيريبلاسميك المستخرج (الشكل 1)، بينما في تجربة أخرى، بدأت يفيا بنسبة 17 في المائة المحتوى بيريبلاسميك (الشكل 1). هذه الاختلافات يمكن أن تنشأ من عدة أسباب مثل شروط التعبير المتغير (إضافة أدتا إلى وسائط النمو يمكن زيادة التعبير عن الجينات وينظم آليات المجاعة مثل تنظيم الفراء المروج يف)، الاستخدام المتكرر لتجميد الأرصدة الدائمة، والأخطاء البشرية. بدلاً من تعديل أوقات الاحتضان، من المستحسن للارتقاء بالإعداد. تنقية من الكسر periplasm يوصي بأن تدرج شطف تدرج خطي من الخطوة الكروماتوغرافي تبادل شاردة. شطف تدرج خطوة هو استراتيجية شطف التغييرات الاستخدامات المنفصلة والمفاجئ في تشكيل المرحلة المتنقلة (أي., 0 ملم كلوريد الصوديوم، 50 مم كلوريد الصوديوم، كلوريد الصوديوم 150 مم، إلخ.). شطف تدرج خطي هو استراتيجية شطف يستخدم تغير تدريجي في موبايل المرحلة تكوين (أي، 0 ملم كلوريد الصوديوم، كلوريد الصوديوم، 5 ملم 10 ملم كلوريد الصوديوم، إلخ.). تدرج خطوة مفيدة لفصل الجزيئات التي لها الانتماءات المختلفة للمرحلة ثابتة، وشطف تدرج خطي مفيد لفصل الجزيئات التي لها الانتماءات مماثلة للمرحلة ثابتة. في حالة تنقية البروتين مع أي علامة تنقية الاصطناعية (لتعزيز التقارب للمرحلة ثابتة) من حجرة خلية الغنية بالبروتين فريدة الأنواع، ينصح شطف تدرج خطي لفصل بروتينات نونينتيريست التي قد وقد الانتماءات مماثلة إلى مرحلة ثابتة بروتين الفائدة. عموما، من المتوقع أن عائد من 1-2 مغ الاشتقاق المنقي إيفا من كل لتر من الثقافة معربا عن إيفا من الذاتية في المروج بيستيس يوسف .
الأسفار بالأشعة السينية هي تقنية تمكن المحقق لسرعة تحديد المحتوى المعدني في عينة، وإبلاغ المحقق بإدراج معدنية غير متوقع التي يمكن لولا ذلك غير معروف. على الرغم من أن يتم تضمين يدتا في المخزن المؤقت لوجود مكثف لإزالة المعادن المرتبطة بشكل فضفاض أو مجاناً، إيفا المستمدة من الكسر بيريبلاسم يمكن أن تحتوي على بعض البروتين هولو. نظراً لأن المعادن النقل عملية دينامية، وربما محتوى البروتين هولو تنبع من إيفا التي ما زالت تبرعت لا شحنتها إلى يفيبكدي. تجدر الإشارة إلى أن الأسفار الأشعة السينية فقط يقيس إجمالي المحتوى المعدني، ولا تشير إلى إذا كان المعدن أمرت في شعرية كريستال أو ملزمة على وجه التحديد لبروتين. لتحديد إذا كان المعدن هو أمر في شعرية كريستال و/أو ملزمة على وجه التحديد لجزيء بروتين، مطلوب بالأشعة السينية ونثر جمع البيانات وتجهيزها. ومع ذلك، يسمح fluorescence الأشعة السينية لتقييم عينة سريعة من تلوث المعادن و/أو التكامل البروتين هولو المتبقية. الإشعاع السنكروتروني الوقت محدود وليس هناك دائماً الوقت لوضع استراتيجية لجمع البيانات تشتت الأشعة السينية في كل عينة، وهكذا fluorescence الأشعة السينية تقنية قيمة لفحص بلورات كثيرة، وإعطاء الأولوية لأي عينات بالأشعة السينية وينبغي جمع البيانات ونثر. وعلاوة على ذلك، تمكن fluorescence الأشعة السينية لجمع البيانات من النماذج التي قد لا ديفراكت الأشعة السينية. حين جمع البيانات fluorescence الأشعة السينية، في بعض الأحيان الإشارة يمكن أن تكون ضعيفة جداً والأطياف الناتجة مبهمة. لزيادة قوة الإشارة، أما للأسفار الأشعة السينية أو المسح الضوئي جنون، النظر في زيادة وقت التعرض و/أو تقليل توهين شعاع الأشعة السينية. وعندما يتم تحديد نموذج لجمع البيانات تبعثر الأشعة السينية، من المستحسن لجمع البيانات تشتت الأشعة السينية في جزء مختلف من العينة من ما استخدمت للأسفار بالأشعة السينية وجنون المسح الضوئي لتقليل الضرر الإشعاعي، وتحسين نوعية البيانات جمع، والتقليل إلى أدنى حد من أي إمكانية للحد إشارات الشاذة.
يتطلب الكشف عن مواد مشعة استشفاف nanomolar كميات المواد أو أقل، واستخدام هذه تتبع كوكلاء تتبع الجزيئية يوفر طريقة بسيطة وحساسة للغاية للتحقيق في العمليات الخلوية. يمكن استخدام الإنزيم راديوميتال المبين أعلاه لتحديد مجموع امتصاص المعادن، التوزيع عبر مقصورات الهاتف الخلوي، فضلا عن معدلات الإقبال. وفي الواقع، يتطلب كل نقطة بيانات الوقت وجود 40 دقيقة؛ ومع ذلك، يتم التوصل إلى كل نقطة من الزمن، لهي القريبون الخلايا فورا والمحتضنة في المخزن المؤقت الملح عالية (الشكل 5، الخطوة 1). تبين القياسات راديوميتال وسائل الإعلام وتجاهل المخزن الملح عالية (الشكل 5، 1 خطوة)، والكسور بيريبلاسميك وهيولي بعد (الشكل 5، 3 خطوة) الحضانة العازلة الملح عالية بنجاح إزالة كافة المتبقية غير مقترنة المعدن الحرة التي بقيت بعد الطرد المركزي الأولى بعد بلوغ نقطة الوقت. الطرد المركزي الأولى يزيل معظم (ما يصل إلى 80 في المائة) من المعدن الحر غير مقترنة، والطرد المركزي بعد حضانة في المخزن المؤقت للملح عالية كما يزيل الإضافية المتبقية المعادن الحرة غير مقترنة. لا يتوقع أي معدن الحرة غير مقترنة العالقة تؤثر تأثيراً كبيرا على النقل معدنية أثناء وجود 40 دقيقة. تأثير وجود 40 دقيقة في نقل المعادن داخل الخلية اعتبار آخر لتفسير البيانات الحكيمة. تقريبا يحدث بروتوكول وجود أسرة فوق الجليد، وبصرف النظر عن الطرد المركزي 30 ثانية بين الخطوات. المعادن وقت النقل بينت التجارب بالطبع الحفاظ على الخلايا في 4 درجات مئوية وأن يلغي النقل معدنية20،،من2122؛ ولذلك، لأن التجارب التي تحدث فوق الجليد، تجزئة 40 دقيقة لا يتوقع إلى حد كبير زيادة مستويات المعادن في بيريبلاسم السيتوبلازم ومستويات المعادن يتوقع أن تكون ممثلة النقاط الزمنية التي كانت الخلايا في البداية سينتريفوجاليزيد.
تحديد امتصاص نسبي في مقصورات خلوية مختلفة يمكن المساعدة في إبلاغ البيانات XFS، وتثبت طبيعة الفسيولوجية من الركازة، فضلا عن تمكين المحقق لمزيد التحقيق تفاصيل الآلية الجزيئية. على سبيل المثال، إضافة للطفرات الوراثية لتجارب امتصاص راديوميتال يوفر طريقة مباشرة لتدعيم بقايا الوظيفية الرئيسية أو جزيئات تشارك في نقل الركازة. وتشمل المزايا راديوميتال استيعاب التجارب والتحليلات التداول السريع وإنتاجية عالية وإمكانية تكرار نتائج عالية والموازاة لتجارب مقارنة ظروف النمو والبنيات الوراثية.
The authors have nothing to disclose.
كما تم جمع البيانات في GM/CA@APS، التي تم تمويلها كلياً أو جزئيا مع الأموال الفيدرالية من المعهد الوطني للسرطان (ACB-12002)، وفي المعهد الوطني للعلوم الطبية العامة (AGM-12006). هذا البحث استخدام الموارد من مصدر فوتون متقدمة (الجزائرية)، إدارة الولايات المتحدة للطاقة (DOE) مكتب للعلم المستخدم تشغيل مرفق لمكتب وزارة الطاقة “بالعلم” “مختبر أرغون الوطني” تحت “رقم العقد” دي-AC02-06CH11357. استخدام مصدر فوتون متقدمة بتأييد من وزارة الطاقة في الولايات المتحدة، ومكتب العلوم، مكتب علوم الطاقة الأساسية، تحت “رقم العقد” ث-31-109-إنكلترا-38.
نود أن نعترف مركز السرطان الشامل لاتحاد المصارف العربية-وسائل قياس الطيف الكتلي/البروتيوميات “المشتركة مرفق” (P30CA13148-38) لمساعدتها في تحليل الطيف الكتلي.
وأيد C.D.R. بمنحه من جامعة ألاباما في مكتب برمنغهام للتنوع، والإنصاف، وإدراج. وأيد L.L.R. قسم الأشعة من جامعة ألاباما في برمنغهام. وأيد “البرنامج النظائر” وزارة الطاقة، “مكتب العلم”، 52إنتاج المنغنيز ومنح A.V.F.M. تحت DESC0015773.
Chemicals | |||
Polyethylene glycol 4000, EMD Millipore | Fisher | M1097270100 | |
Ampicillin Sodium Salt (Crystalline Powder) | Fisher | BP1760-5 | |
AMRESCO M9 Medium Broth | Fisher | NC9688886 | |
Bis-Tris, Fisher BioReagents | Fisher | BP301-100 | |
Calcium Chloride Dihydrate (Certified ACS) | Fisher | C79-500 | |
Dextrose (D-Glucose) Anhydrous (Granular Powder/Certified ACS) | Fisher | D16-500 | |
Ethylenediaminetetraacetic Acid, Disodium Salt Dihydrate (Crystalline/Certified ACS) | Fisher | S311-100 | |
Fisher BioReagents Microbiology Media: LB Broth, Miller | Fisher | BP1426-500 | |
Magnesium Sulfate Heptahydrate (Crystalline/Certified ACS) | Fisher | M63-500 | |
Sodium Azide, White Powder | Fisher | BP922I-500 | |
Sodium Chloride (Crystalline/Certified ACS) | Fisher | S271-500 | |
Sodium Phosphate Dibasic Anhydrous (Granular or Powder/Certified ACS) | Fisher | S374-500 | |
Tris Hydrochloride (Small White Flakes/Molecular Biology) | Fisher | BP153-500 | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Equipment | |||
Cryschem Plate | Hampton | HR3-158 | |
EMD Millipore Amicon Ultra-15 Centrifugal Filter Units | Fisher | UFC903024 | |
EMD Millipore Millex Sterile Syringe Filters: Durapore PVFD Membrane | Fisher | SLHV013SL | |
GE Healthcare HiLoad 26/600 Superdex 200 pg | Fisher | 28-9893-36 | |
GE Healthcare HiTrap IEX HP Prepacked Columns | Fisher | 17-1154-01 | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Cells | |||
Agilent Technologies BL21-CODON PLUS RIPL CELLS | Fisher | 230280 |