פרוטוקול על החילוץ של מלווה מתכות מעבר periplasmic בהקשר של שותפיה כריכה מקורית, אפיון ביופיזיקלי של התוכן המצע שלה על ידי צילום רנטגן ספיגת קרינה פלואורסצנטית ו radiometal מוצג.
נדגים שיטה מדרגי הפרדת periplasm חיידקי של הציטופלסמה. שיטה זו משמשת לטהר את החלבון periplasmic לצורך אפיון biophysical, מידה העברת סובסטרט בין תאים periplasmic, cytoplasmic. על ידי הגבלת בזהירות הפעם שבה מופרד periplasm הציטופלסמה, הנסיין ניתן לחלץ את החלבון עניין, assay כל תא בנפרד עבור המצע ללא זיהום carry-over בין התאים. החלבון שחולצו מן fractionation ניתן אז עוד יותר לנתח עבור קביעת המבנה התלת-ממדי או פרופילים של המצע מחייב. לחלופין, ניתן לבצע בשיטה זו לאחר דגירה עם radiotracer כדי לקבוע ספיגת אחוז הכולל, וכן חלוקת רכיב המעקב (ואת ומכאן מתכת תחבורה) על פני תאי חיידקים שונים. ניסויים radiotracer יכול לעזור להבדיל בין המצע פיזיולוגיים לבין המצע artefactual, כגון אלה נגרם על-ידי mismetallation.
פלואורסצנציה רנטגן יכול לשמש כדי לגלות נוכחות או היעדרות של התאגדות מתכת במדגם, וכן למדוד שינויים שעלולות להתרחש תוך שילוב מתכת כמוצר של תנאי הגידול, טיהור תנאים, ו/או תנאים התגבשות. פלואורסצנציה רנטגן מספק גם מדד יחסי של שפע של כל מתכת, אשר יכול לשמש כדי לקבוע הפסגה ספיגת אנרגיה מתכת הכי טוב להשתמש עבור אוסף נתוני הפיזור רנטגן חריגה. ספיגת Radiometal יכול לשמש כשיטה לאמת מהות מצע זוהה על ידי פלואורסצנציה רנטגן פיזיולוגיים, כמו גם תמיכה הגילוי של סובסטרטים הרומן.
בחיידקים גראם שליליים, בריכות cytoplasmic של מתכות מעבר אטומי גדל, מחדש באמצעות ממברנה פנימית ABC (ATP מחייב קלטת) מייבאים להמתיק רוברטסונית מתכת על פני קרום פנימי. Periplasmic אשכול a-1 המצע מחייב חלבונים (SBPs) להלחין קבוצת מלווים לאגד את אטומי מתכת ישירות, המעבורת להם לעבור periplasm כדי לספק אותם ABC cognate יבואנים1. אחרים אשכולות SBPs מוקדשות להעברה של מצעים, כגון מתכת chelated (אשכול A-2), פחמימות (אשכולות B ו- D-1) חומצות אמינו (אשכולות ב, ג, F-2, F-4); למרות זאת, ללא קשר המצע, SBPs בצע של קיפול c-קלאמפ והתפאורה אבולוציונית2. המנגנון המוצע מוכללת SBP המצע העברה כוללת את c-הצבת שעברו סדרת מנסה להתקבל לקרקס הדומות דיונאה3. באופן כללי, SBPs a-1 אשכול לטהר בטופס (מאוגד-מתכת) ההולוגרפי, על פי מחקר של SBPs אלה הוא מוגבל על ידי הקושי ביצירת טפסים (ללא מתכת) אפו של חלבון עבור ניסויים4. עד כה, אסטרטגיות ללמוד apo אשכול SBPs a-1 היה מוגבל מוטגנזה מכוונת, דיאליזה, דנטורציה חלקית עם ethylenediaminetetraacetic חומצה (EDTA) chelator5,6,7,8 , 9 , 10 , 11. מבני נתונים שמקורם ניסויים אלה מראים כי אשכול SBPs a-1 אולי לא בדיוק פעל מנגנון דיונאה. חסרים כיום בספרות היא שיטה לייצר אפו SBPs a-1 אשכול ויוו באמצעות שותפים איגוד פיזיולוגיים.
נדגים בפעם הראשונה באמצעות תא fractionation לטהר YfeA, SBP a-1 של האשכול מן Yersinia pestis, הסוכן etiological של המגפה, אשר הוסב לטופס apo תוך אינטראקציה עם היבואן YfeBCDE ABC cognate הפיזיולוגיים שלו בתא. אנו מראים ש-yfea היא בצורה אפו על ידי אנרגיה-ואנליזת הספקטרומטריה (עורכים), הידוע גם בשם פלואורסצנציה רנטגן. נדגים גם פונקציונליות YfeBCDE על-ידי שילוב תא fractionation עם רגישות גבוהה ספיגת מתכת רדיואקטיבי מחקרים כדי להבחין בין ספיגת מתכת על פני הממברנה החיצונית וייבוא מתכת על פני קרום פנימי. השימוש של מכשיר מעקב רדיואקטיבי מאפשר איתור pg/L כמויות של מתכות, נמוך בהרבה מאשר המגבלה של זיהוי טכניקות כזה מצמידים כמו inductively פלזמה ספקטרומטר מסה (ICP-MS) או ספקטרוסקופיית בליעה אטומית (AAS). דבר זה מאפשר ההפרעות מינימלי של מערכת נחקר. בנוסף, שיטות המפורטות לעיתים קרובות דורשים אחסון מדגם גדולים יותר, שלאחר עיבוד נוסף ושעות עוד סיבוב, אשר אינם אופייניים עבור מבחני radiotracer. לכן, באמצעות radiotracer מספק שיטה נוחה וישירה לניטור הפצה מתכת, ספיגת בתוך תא. זה נשאר שיקבע אם אפו ש-SBP a-1 אשכול המיוצר בשיטה זו הד התצפיות מבנית מ נוהלי הנוכחי המשמש ליצירת חלבון אפו.
תא fractionation היא שיטה הוקמה עבור הפרדת תאים סלולריים למטרה המפורשת של חיטוט במיוחד את התוכן שלהם בידוד12. תא fractionation משמש בדרך כלל כדי לאשר את המיקום של מולקולה במהלך מחזור התא או למדוד את הפעילות של תא מסוים13. לדוגמה, פעילות תחבורה מתכת יכול להיות לבדיקה ע י חקירת תאים סלולריים המצע מתכת. שילוב תא fractionation מאפשר הבחנה, השוואה בין ספיגת מתכת על פני הממברנה החיצונית והעברת מתכת על פני קרום פנימי. תהליכים אלה אז בתורו ניתן למדוד לאורך זמן. במקרה של חלבון-טיהור, השיטות הנפוצות ביותר של תא פירוק והפרדה של מרכיבים מסיסים מרכיבים לא מסיסים הם הפרעה מכנית (קרי, שחיקה, מיזוג), המגון בלחץ גבוה (קרי, הלחץ הצרפתי תא לחץ, תא disrupter), והתדרים אולטראסאונד (כלומר., sonication)14. השימוש התדרים אולטראסוניות lyse תאים בדרך כלל המתאימה ביותר עבור אמצעי אחסון קטן; עם זאת, sonication ידוע לייצר חום מוגזם זה יכול denature חלבון. כדי למנוע יצירת חום עודף, תדרים אולטרה סאונד מיושמים כלל בפרצים קצרים רציפים, אשר ניתן זמן רב בשוגג לבזות במולקולות דנ א לחלקים קטנים יותר. בנוסף, הגששים sonication יקר מרובות עשוי להידרש לניסויים מפוח אנליטיים, כמו כל בדיקה יש טווח מוגבל עבור אמצעי האחסון מדגם ניתן לעבד. השימוש בלחץ גבוה כדי lyse תאים מונע יצירת חום עודף במהלך פירוק התא על-ידי מצמרר רכיבי העיתונות תא הלחץ הצרפתי לפני פירוק או הפעלה של מפצל תא בסביבת קר כגון חדר קר. כמו sonication הגששים, ערכות מרובות של רכיבים לתקשורת תא הלחץ הצרפתי ייתכן שיהיה עליך לרכוש לעבד מגוון רחב של אמצעי אחסון מדגם. הלחץ הצרפתי תא לחץ הרכבות הם להתחבר בקלות אך מביך פועלים ולנקות, יכול להיות כבד להזיז, נוטים סתימת מדגימות צפופה. יתרונות לשימוש תדרים אולטרה סאונד ומערכות בלחץ גבוה כדי lyse תאים כוללים לדוגמה גבוהה התאוששות, היכולת לעבד דגימות מרובים עם זיהום לחצות מינימלי, מתכוונן הטיית הכוח, אשר ניתן להתאים למיטוב פירוק של מגוון רחב של סוגי מדגם. אופטימיזציה יכול להתרחש על-ידי התאמת התדר אולטרה סאונד, משך הזמן של התפרצויות, בוכנה לחץ ק ג לכל סנטימטר מרובע (psi) ומספר עוברת דרך התקשורת. השימוש הפרעה מכנית lyse תאים עשויים להיות האסטרטגיה הכי טכנית טריוויאלי והזולה עבור פירוק התא. הפרעה מכנית יכול להציג אתגרים בהתאוששות מדגם ואינו אידיאלי עבור עיבוד הדגימות מרובים. הפרעה מכנית עדינה כדי דגימות יותר בלחץ גבוה או תדרים אולטרה סאונד, אבל אינה תפוקה גבוהה והוא נוטה פירוק לא יעיל. מגבלה משמעותית ניסיוני של הפרעה מכנית, בלחץ גבוה המגון תדרים אולטרה סאונד, הוא שיבוש הארכיטקטורה הסלולר כולו נשלט כזה לאחר פירוק, מעורבבים כל הרכיבים תא מימית . יחד. יתר על כן, כל התאים תא לשבש לא באותו הזמן; לפיכך, התוכן של תאים זה lyse מוקדם יכול להיות כפופים כוחות משובש מתמשך זמן רב יותר מאשר התוכן של תאים זה lyse מאוחר. תא fractionation מאפשר זולה, טכנית פשוטה, יעילה מבוססת-תא הפרדה בין תוכן התא תוך הימנעות את הצורך ציוד יקר וחשיפה מדגם כוחות קשים, משובש.
במקרה SBP, המצע מיובאים מופיעה שוב פוטנציאל apo לחלבון ויוצרת ההולוגרפי חלבון במהלך פירוק, לפני כרומטוגרפיה במורד הזרם או טכניקות טיהור אחרות. ההכללה של EDTA chelator במהלך פירוק מציג מכשול נוסף, שבהם זיקה מתכת כצעד ראשון של חלבון טיהור אינה אפשרית כי EDTA רצועת מתכת מן השרף כרומטוגרפיה ולמנוע חלבון מחייב15. פתרון פשוט וזול הוא תא fractionation על-ידי הלם אוסמוטי, איפה צנטריפוגה דיפרנציאלית ו ריאגנטים המעבדה הנפוצות מאפשרים החוקר בקפידה לחלץ חלבון מספקת עבור אנליזה פונקציונלית. Fractionation הלם אוסמוטי מנצל בשינוי לחץ אוסמוטי כדי להפריד בין תאים סלולריים בשני שלבים. ראשית, מאגר hypertonic גורם תאים ל crenate מים משאיר כל תא, שנית, מאגר היפוטוניק גורם תאים להתנפח כמו מים מתמזגת מחדש בכל תא. על ידי בקפידה השליטה? כמה זמן התאים להתנפח, בקרום החיצוני יכול להיות סלקטיבי lysed (עקב הצטברות של לחץ אוסמוטי מן המים הנכנסים), ובכך לרוקן את התוכן שלהם לתוך המאגר. שימור בקרום הפנימי מבטיח כי התכנים cytoplasmic נשמרים ב- spheroplasts, מופרדים בקלות תוכן periplasmic על ידי צנטריפוגה.
YfeA הוא polyspecific SBP מסוגל מחייב ברזל, מנגן, אבץ אטומים16. כמויות יחסיות של מתכת מואגד יכול להשתנות על פי תוספת מתכת במהלך צמיחה, וזמינה לבדיקה על ידי פלואורסצנציה רנטגן כגון בגיל מתקדם הפוטון מקור Argonne National Laboratory של16. פלואורסצנציה רנטגן מאפשר לחוקר במהירות פרופיל של מכלול רחב של מתכות ללא הצורך גדול או עקיפה איכות קריסטלים, והוא אפילו יכול ללקט נתונים חלבון precipitate או proteinaceous פתרון.
פלואורסצנציה רנטגן יכולים לחשוף במהירות תוצאות בלתי צפויות כגון, במקרה זה, המצע YfeA הראשי להיות אבץ לא של סובסטרטים פיזיולוגיים מתועדים ברזל או מנגן16. אם נעשה שימוש לפני איסוף נתונים פיזור קרני רנטגן, פלואורסצנציה רנטגן יכול להודיע החוקר בעיצוב ניסיוני, כגון אילו אנרגיה מתכת edge(s) להשתמש עבור אוסף נתוני הפיזור רנטגן חריגה. רק שימושי כמו קביעת שפע יחסי פלואורסצנציה רנטגן מתכת, באפשרותך גם לקבוע אם מתכת נעדר במדגם, מתן שיטה מהירה של הפרדת גבישים המכילים חלבון apo מחלבון ההולוגרפי ולאחר הערכת מתכת הלעפה/םויס שקמ ללא צורך גוזלת זמן עיבוד נתונים. עם זיהוי מדגם עם קליטה מתכת חזקה, אורך הגל מדויק כדי להשתמש עבור אוסף נתוני הפיזור רנטגן חריג יכול להיקבע על ידי פיזור חריגות מרובות באורך הגל (MAD) סריקה.
פרוטוקול מפורט זה נועד לעזור ניסויים חדשים בהצלחה לבצע תא fractionation ולעשות שימוש יעיל בחומרת הפרעות לקרן החלקיקים סינכרוטרון פרופיל הכולל תוכן מתכת ולקדם את המחקר של המתכת מחייב חלבונים.
תא fractionation הוא כלי שימושי עבור במיוחד בודק את התוכן של תא הסלולר, יכול לשמש כלי שימושי עבור חילוץ מולקולות קטנות כגון אטומי המתכת, כמו גם מקרומולקולות כגון חלבונים. ראוי לציין כי fractionation תא אינה טכניקה מוחלטת וניתן מועדת לשגיאות ללא תשומת-לב רבה ערבוב/resuspension בטמפרטורת דגירה, זמן הדגירה. ערבוב לא שלם יכול לגרום פירוק עלי הלוואי קרומיים מינימלית, fractionation ובכך זניח, fractionation בטמפרטורת החדר יכול לגרום פירוק מהיר של שתי ממברנות וכתוצאה של השבר periplasmic עם תוכן cytoplasmic, זיהום, פעמים דגירה ממושכת עלולה לגרום גם פירוק מופרז ובכך שבר זיהום. פשרה סבירה להשגת פירוק הממברנה החיצונית יעיל ומלא יחסית (תוך שמירה על קרום פנימי) הוא הדגירה 20 דקות מעל הקרח במאגר fractionation היפוטוניק. שיקול נוסף הוא שיטת החילוץ, איפה החילוץ הקשה על ידי טלטול או מערבולת יכול לסכן את האיכות של התמצית: גרימת צבירת חלבון. מומלץ לערבב בעדינות כגון, המרית, היפוך או כ רפה בעברית על ידי פיפטה כדי לשמור על חומרים באיכות גבוהה עבור ניתוח במורד הזרם. טיהור של תא מפוח fractionation יכול להתרחש עם היעילות משתנה כפי שמעידים איור 1. בניסוי אחד, YfeA החלה לפי 8% של התוכן שחולץ periplasmic (איור 1C), ואילו בניסוי נוסף, YfeA החלה 17% מהתוכן periplasmic (איור 1D). הבדלים אלה יכול לנבוע ממספר סיבות כגון תנאי ביטוי משתנה (הוספת EDTA למדיה גדילה יכול להגדיל ביטוי של גנים מוסדר על ידי מנגנוני הרעב כגון פרווה רגולציה של האמרגן Yfe), השימוש החוזר ונשנה של קפואה מניות קבוע, טעות אנוש. במקום התאמת הזמנים דגירה, מומלץ הסולם ההכנה. טיהור של השבר periplasm מומלץ לכלול של מעבר צבע • תנאי ליניארי מהשלב כרומטוגרפי exchange אניון. • הדרגתי תנאי שלב היא אסטרטגיית • תנאי שימושים נפרדים פתאומי השינויים בתוך הרכב (כלומר-, 0 מ מ NaCl, 50 מ מ NaCl, 150 מ מ NaCl, וכו ‘.). • תנאי מעבר צבע ליניארי היא אסטרטגיית • תנאי המשתמשת שינוי הדרגתי ב”מוביל שלב הקומפוזיציה (קרי, 0 מ מ NaCl, 5 מ מ NaCl, 10 מ מ NaCl וכד’). מעבר הדרגתי צעד שימושי עבור הפרדת מולקולות שיש הזיקות שונות לשלב נייח, • תנאי מעבר צבע ליניארי שימושית לצורך הפרדת מולקולות בעלות הזיקות דומה לשלב נייח. במקרה של טיהור חלבון עם אין תג טיהור מלאכותיים (כדי לשפר את הזיקה לשלב נייח) מתא לתא כי הוא עשיר במינים חלבון ייחודי, • תנאי מעבר צבע ליניארי מומלץ להפריד חלבונים של noninterest שלא ניתן יש דומה הזיקות לשלב נייח כמו החלבון עניין. באופן כללי, תשואה של 1-2 מ”ג של apo מטוהרים YfeA צפוי של כל ליטר תרבות לבטא YfeA מ שלה אנדוגני יזם י’ pestis .
פלואורסצנציה רנטגן היא טכניקה המאפשרת החוקר לקבוע תוכן מתכת במדגם, ובמהירות ליידע את החוקר על התאגדות מתכת בלתי צפוי, שאחרת היה לא ידוע. למרות EDTA נכלל במאגר של hypertonic fractionation ‘ כדי להסיר הקשורים באופן רופף או ללא מתכת, YfeA נגזר מן השבר periplasm יכול להכיל כמה חלבון ההולוגרפי. בהתחשב בכך תחבורה מתכת הוא תהליך דינמי, אולי תכולת החלבון של ההולוגרפי מקורו של YfeA זה עדיין לא תרמה את מטענה כדי YfeBCDE. ראוי לציין כי פלואורסצנציה רנטגן רק מודד הכולל תוכן מתכת, אינו מציין אם המתכת היא הורה בשריג גבישי, או קשור במיוחד חלבון. כדי לקבוע אם המתכת היא הורה בשריג גבישי ו/או קשור במיוחד מולקולה של חלבון, נדרש איסוף נתונים פיזור קרני רנטגן ועיבוד. ובכל זאת, פלואורסצנציה רנטגן מאפשר הערכת מדגם מהיר של זיהום מתכת ו/או ההולוגרפי משקעי חלבון אינטגרציה. סינכרוטרון קרינה זמן מוגבל, לא תמיד יש זמן לתכנן אסטרטגיה איסוף הנתונים פיזור קרני רנטגן כל דגימה, ובכך פלואורסצנציה רנטגן היא טכניקה יקר עבור הקרנת קריסטלים רבים וקביעת סדרי עדיפויות עבור אילו דגימות רנטגן פיזור נתונים צריכים להיאסף. יתר על כן, פלואורסצנציה רנטגן מאפשר איסוף נתונים מדגימות כי ייתכן מכמותה צילומי רנטגן. בעת איסוף הנתונים פלורסצנטיות רנטגן, לפעמים האות יכול להיות חלש מאוד ולא ומתחמקות הספקטרום המתקבל. כדי לשפר את עוצמת האות, או פלואורסצנציה רנטגן או סריקה כועס, שקול להגדיל את זמן החשיפה ו/או הפחתת הרנטגן לשגר הנחתה. כאשר דגימת מזוהה עבור איסוף נתונים פיזור קרני רנטגן, מומלץ לאסוף נתוני הפיזור רנטגן בחלק אחר של המדגם מאשר מה היה משמש פלואורסצנציה רנטגן ו- MAD סריקה כדי למזער נזק הקרינה, לשפר את איכות הנתונים אוסף, ולצמצם את כל פוטנציאל הפחתה של אות חריג.
זיהוי של קליעים נותבים רדיואקטיביים דורש nanomolar כמויות של חומר או פחות, וזה שימוש אלה המשדרים כסוכני מעקב מולקולרית מספק שיטה פשוטה מאוד רגיש נחטט תהליכים תאיים. וזמינותו radiometal שפורטו לעיל יכול לשמש כדי לקבוע את סך ספיגת מתכת, הפצה על פני תאים סלולריים, כמו גם המחירים של ספיגת. אכן, כל נקודת זמן נתונים דורשת fractionation של 40 דקות; עם זאת, כמו כל נקודת הזמן הגיע, תאים מגורען, מיד מתפשט במאגר מלח גבוהה (איור 5שלב 1). מדידות Radiometal של המדיה, זרוקים מאגר מלח גבוהה (איור 5שלב 1), שברים periplasmic, cytoplasmic לאחר (איור 5שלב 3) מציינים שהדגירה מאגר מלח גבוהה בהצלחה מסיר את כל שנותר לא משויכות למתכת חינם התעכבו בעקבות את צנטריפוגה הראשונית לאחר שהגיע נקודת זמן. צנטריפוגה הראשונית מסיר רוב (עד 80%) של המתכת חינם לא משויכות, צנטריפוגה לאחר דגירה במאגר מלח גבוהה גם מסירה נוספים שנותרו מתכת חינם לא משויכת. מתכת חינם לא משויכות מתמשכת בכל לא צפויה להשפיע באופן משמעותי על תחבורה מתכת במהלך fractionation 40 דקות. השפעת fractionation 40 דקות בתחבורה מתכת תאיים הוא שיקול נוסף על פרשנות הנתונים שקולה. כמעט פרוטוקול fractionation כולה מתרחשת על קרח, מלבד צנטריפוגה השני 30 בין השלבים. מתכת תחבורה זמן הקורס ניסויים הראו כי שמירה על תאים ב 4 ° C abrogates תחבורה מתכת20,21,22; לכן, בגלל הניסויים מתרחשת על קרח, fractionation 40 דקות לא צפוי להגדיל באופן משמעותי את רמות מתכת periplasm של הציטופלסמה, רמות מתכת צפויים להיות נציג של נקודות זמן שבו היו התאים בתחילה centrifugalized.
נחישות של ספיגת היחסי בתאים הסלולר שונה יכול לסייע ליידע את נתוני המערכות, לאמת מהות מצע פיזיולוגיים, כמו גם לאפשר החוקר לחקור עוד יותר את הפרטים מולקולרית של מנגנון. לדוגמה, תוספת של גנטי מוטגנזה מכוונת. radiometal ספיגה ולניסויים מספק שיטה ישירה לחזק את שאריות פונקציונלי מפתח או מולקולות מעורב התחבורה המצע. היתרונות של radiometal ספיגת ניסויים וניתוחים כוללים אספקה מהיר, תפוקה גבוהה, גבוהה הפארמצבטית parallelization של ניסויים השוואת תנאי הגידול וקבועים גנטי.
The authors have nothing to disclose.
הנתונים נאספו גם ב- GM/CA@APS, אשר מימנה במלואם או בחלקם עם כספים פדרליים מן המכון הלאומי לסרטן (ACB-12002) הלאומית המכון כללי רפואי למדעים (AGM-12006). מחקר זה נעשה שימוש במשאבים של מקור הפוטון מתקדם (APS), ארצות הברית מחלקת האנרגיה (DOE) במשרד של המשתמש מתקן מדעי פעלו במשרד DOE של המדע על ידי Argonne National Laboratory תחת חוזה מס דה-AC02-06CH11357. השימוש המקור הפוטון מתקדם נתמכה על ידי מחלקת האנרגיה של ארה ב, משרד המדע, משרד בסיסי אנרגיה למדעים, תחת חוזה מס W-31-109-Eng-38.
ברצוננו להודות UAB מקיף במרכז לחקר הסרטן – מסה ספקטרומטר/פרוטאומיקס משותפים מתקן (P30CA13148-38) לסיוע שלהם בניתוח ספקטרומטר מסה.
פיקוד נתמך על ידי מענק של אוניברסיטת אלבמה-המשרד המגוון של ברמינגהאם, הון עצמי והכללה. L.L.R. נתמכה על ידי המחלקה לרדיולוגיה של אוניברסיטת אלבמה בבירמינגהם. התוכנית איזוטופ משרד האנרגיה, משרד המדע, נתמך 52Mn ייצור ולהעניק A.V.F.M. תחת DESC0015773.
Chemicals | |||
Polyethylene glycol 4000, EMD Millipore | Fisher | M1097270100 | |
Ampicillin Sodium Salt (Crystalline Powder) | Fisher | BP1760-5 | |
AMRESCO M9 Medium Broth | Fisher | NC9688886 | |
Bis-Tris, Fisher BioReagents | Fisher | BP301-100 | |
Calcium Chloride Dihydrate (Certified ACS) | Fisher | C79-500 | |
Dextrose (D-Glucose) Anhydrous (Granular Powder/Certified ACS) | Fisher | D16-500 | |
Ethylenediaminetetraacetic Acid, Disodium Salt Dihydrate (Crystalline/Certified ACS) | Fisher | S311-100 | |
Fisher BioReagents Microbiology Media: LB Broth, Miller | Fisher | BP1426-500 | |
Magnesium Sulfate Heptahydrate (Crystalline/Certified ACS) | Fisher | M63-500 | |
Sodium Azide, White Powder | Fisher | BP922I-500 | |
Sodium Chloride (Crystalline/Certified ACS) | Fisher | S271-500 | |
Sodium Phosphate Dibasic Anhydrous (Granular or Powder/Certified ACS) | Fisher | S374-500 | |
Tris Hydrochloride (Small White Flakes/Molecular Biology) | Fisher | BP153-500 | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Equipment | |||
Cryschem Plate | Hampton | HR3-158 | |
EMD Millipore Amicon Ultra-15 Centrifugal Filter Units | Fisher | UFC903024 | |
EMD Millipore Millex Sterile Syringe Filters: Durapore PVFD Membrane | Fisher | SLHV013SL | |
GE Healthcare HiLoad 26/600 Superdex 200 pg | Fisher | 28-9893-36 | |
GE Healthcare HiTrap IEX HP Prepacked Columns | Fisher | 17-1154-01 | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Cells | |||
Agilent Technologies BL21-CODON PLUS RIPL CELLS | Fisher | 230280 |