Trapianto di cellule staminali di tessuto adiposo-derivato foglio per ridurre le perdite dopo la colectomia parziale in un modello del ratto
Summary
La preparazione e il trapianto di tessuto adiposo derivato della cellula formativa (ASC) fogli sul insufficientemente suturate anastomosi colorettale in un modello del ratto è presentata. Questa applicazione romanzo mostra che fogli di ASC possono ridurre le perdite di anastomosi colorettale.
Abstract
Anastomotiche è una complicazione disastrosa dopo la chirurgia del colon-retto. Sebbene metodi correnti per la prevenzione di perdite hanno diversi livelli di efficacia clinica, sono fino a questo momento imperfette soluzioni. Terapia con cellule staminali utilizzando fogli di ASC potrebbe fornire una soluzione a questo problema. ASC sono considerati come promettenti candidati per la promozione del tessuto di guarigione a causa delle loro proprietà trofiche e immunomodulatori. Qui, mettiamo a disposizione metodi per produrre fogli ASC ad alta densità, che vengono trapiantate su un’anastomosi colorettale in un modello del ratto per ridurre la perdita. ASC formano strati delle cellule in piastre di coltura termo-sensibile che potrebbero essere facilmente smontati. Il giorno del trapianto, è stata eseguita una colectomia parziale con un’anastomosi colorettale 5-sutura. Gli animali sono stati trapiantati immediatamente con 1 foglio ASC per ratto. Fogli di ASC aderito spontaneamente all’anastomosi senza alcun collante, sutura o qualsiasi biomateriale. Gruppi di animali sono stati sacrificati 3 e 7 giorni postoperatorio. Confrontato agli animali trapiantati, l’incidenza degli ascessi anastomotic e perdita era maggiore negli animali di controllo. Nel nostro modello, il trapianto di fogli ASC dopo l’anastomosi colorettale è stata associata con un tasso di perdite inferiore e di successo.
Introduction
Colectomia parziale con un’anastomosi primaria è un intervento chirurgico comunemente effettuato che può essere fatto per molte malattie che colpiscono il colon come cancro colorettale, morbo di Crohn e diverticolite1,2. Il più temuto complicazione dopo l’anastomosi colorettale è anastomotiche3. Sebbene siano stati identificati diversi fattori di rischio connessi con perdite anastomotiche, soluzioni per prevenire perdite rimangono unkown4,5.
Delle cellule stromali derivate da tessuto adiposo (ASCs) sono associate con le proprietà antinfiammatorie e trofiche6,7, che rende queste cellule promettenti candidati per terapie rigenerative8. L’efficacia di ASCs per promuovere la guarigione dei tessuti è stata dimostrata in vari tessuti quali il muscolo cardiaco, pelle ed esofago9,10,11,12,13. Tuttavia, ci sono pochi rapporti sull’uso di ASCs per promuovere la guarigione intestinale. Trapianto locale di ASCs per anastomosi colorettale sperimentale via rivestite con ASC biosutures o iniezioni serosal dell’ASC ha mostrato entrambi nessun miglioramento nella guarigione14 o non impedì anastomotiche nonostante una più favorevole anastomotica 15la guarigione.
Il trapianto locale di ASC in sospensione o in combinazione con biomateriali potrebbero essere associati con la conservazione delle cellule insufficiente o un’inadeguata distribuzione delle cellule trapiantate11. Cella foglio tecnologia16,17 offre un innovativo metodo di consegna ASC18,19. Pertanto, in uno studio precedente, un nuovo approccio è stato proposto in cui ASCs organizzato in una cella foglio potrebbe essere applicata su anastomosi colorettale sperimentale20. Questo studio ha dimostrato che il trapianto di foglio ASC è riuscito a ridurre le perdite di anastomosi colorettale dopo colectomia parziale in un modello del ratto. Questo articolo segnala ASC foglio preparazione e tecnica chirurgica di trapianto.
Protocol
Representative Results
Discussion
Anastomotiche è l’evento avverso più grave a seguito di resezione del colon con un’anastomosi primaria. Tecniche ottimali per prevenire perdita e rottura anastomotic sono ancora carenti. Applicazione locale di una matrice di biomateriali è stata condotta, con diversi risultati25,26,27. L’obiettivo delle terapie di cellula è quello di facilitare la riparazione dei tessuti da sostituzione di tessuto o la stimolazione della gua…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gli autori sono grati al Dr. s.e.r. Hovius, Dr. M.A.M. Mureau e tutti i chirurghi del reparto di chirurgia plastica per la raccolta del tessuto adiposo sottocutaneo. P. Sukho è sostenuta da una sovvenzione dal programma The Netherlands Fellowship (NFP-12/435), durante lo svolgimento dello studio. Y.M. Bastiaansen-Jenniskens è supportato da sovvenzioni da olandese Arthritis Foundation (LP11).
Materials
| LG DMEM | Gibco, Life technologies | 22320022 | ASC isolation and culture |
| Collagenase type I | Gibco, Life technologies | 17100-01 | ASC Isolation |
| Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | A9418 | ASC Isolation |
| Fetal bovine serum | Gibco, Life technologies | 10270-106 | FBS, ASC isolation and culture |
| 3% acetic acid with methylene blue | Stemcell Technologies | 7060 | ASC Isolation |
| Gentamicin | Gibco, Life technologies | 15750-037 | ASC isolation and culture |
| Ampothericin B | Gibco, Life technologies | 15290-018 | ASC isolation and culture |
| Shaker (Gallenkamp Environmental Shaker Model 10X 400) | Akribis Scientific | F240 | ASC Isolation |
| Centrifuge | Hettichlab | Rotina380 | ASC isolation and culture |
| Phosphate buffer saline | Gibco, Life technologies | 14190-094 | PBS, ASC isolation and culture |
| Ascorbic acid-2-phosphate | Sigma-Aldrich | A8960 | ASC isolation and culture |
| Human recombinant fibroblast growth factor 2 | AbD Serotec | AF-100-15 | FGF2, ASC isolation and culture |
| Trypsin EDTA | Gibco, Life technologies | 25200-056 | ASC culture |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma-Aldrich | D2650-5x | DMSO, ASC freezing |
| Thermo-responsive culture dishes | Nunc Thermo scientific | 174904 | ASC sheet preperation |
| Non-absorbable braided silk 4/0 | B Braun | 21151042 | surgery |
| Non-absorbable monofilament polyamide 8/0 | B Braun | G1118170 | surgery |
| Absorbable braided polyglycolic acid 5/0 | B Braun | C1048207 | surgery |
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