エレクトロスピニング ラットモデルにおける最適化された構造を有する人工血管の移植
Summary
PCL 血管太い繊維と、大きな細孔を製造するため腹部大動脈置換のラットモデルにおける生体内でのパフォーマンスを評価するためのプロトコルを記述する変更されたエレクトロスピニング法を紹介します。
Abstract
ここでは、マクロポーラス PCL 人工血管を作製し、腹部大動脈置換のモデルラットを用いた評価プロトコルを記述するプロトコルを提案する.エレクトロスピニング血管は頻繁、グラフトに細胞浸潤を制限し、再生とネオ動脈の改造を妨げる比較的小さな毛穴を所有しています。本研究では厚い繊維 (5-6 μ m) と孔径が大きい (~ 30 μ m) PCL 血管を修正処理テクニックを使用して作製しました。腹部大動脈ラットモデルにおける注入によるグラフトの長期的なパフォーマンスを行った。超音波は、グラフト残った動脈瘤や狭窄注入の 12 ヶ月後も発生せず特許を示した。多孔体構造はセル成長を改善し、こうして推進組織 3 カ月で再生成されます。さらに、12 ヶ月後の血管壁内石灰化などの不利な改造の兆候だった。したがって、エレクトロスピニング PCL 血管処理変更した多孔体で保持長期的な注入のため動脈代替可能性を秘めて。
Introduction
合成ポリマーから作られた血管は、心血管疾患 (スッテパー) の治療のためのクリニック広く使用されています。残念ながら、小口径人工血管の場合 (D < 6 mm) は、成功した製品が、しばしば血栓症、内膜増殖症などにつながる減らされた血流速によって引き起こされる低開存のために利用合併症1。
ティッシュ ・ エンジニア リングは、長期的な開存性と血管再生の足場誘導と再構成に基づく恒常性を実現するために別の方法を提供します。詳しくは、血管移植三次元テンプレートとしてことができるメカニカル ・ サポートやガイダンスを提供構造維管束組織と影響の細胞機能、細胞接着、移行、増殖などの再生時に、細胞外マトリックス2の分泌。今までは、維管束組織工学用各種合成樹脂を評価されています。これらの高分子の中で poly(ε-caprolactone) (PCL) は良いセルの互換性と数ヶ月から 2 年間3に至るまで劣化を遅らせるために集中的に検討されている.優れた構造健全性開存、増加だけでなく、継続的に細胞浸潤と血管新生ラット大動脈モデル4,5,6、PCL 血管静電紡糸法による処理が展示されて、最大 6 ヶ月の壁を移植します。しかし、細胞と毛細血管と石灰化、回帰を含む不利な組織の改造もで観測した長い縦長を 18 ヶ月。
Cellularization 血管移植の組織再生を決定し、修繕7キー要因であります。エレクトロスピニング、汎用性の高い手法として採用されている広くナノ繊維構造8血管移植の準備のため。残念なことに、比較的小さな細孔構造はしばしばその後の組織再生を制限エレクトロスピニング血管で不十分な細胞浸潤に します。この問題を解決するには、様々 なテクニックは、細孔径と塩/高分子溶出9,10、コレクター装置、レーザー放射11 による治療後の変更を含む、全体的な気孔率を高めるため試行されています。、等。実際には、エレクトロスピニング移植 (ファイバー径、孔径、気孔率を含む) の構造は処理条件12,13に密着します。エレクトロスピニング、中に繊維の直径は、高分子溶液、流量、電圧などの濃度など、パラメーターを変更することにより容易に制御できます。14,15としたがって、細孔径と気孔率がそれに応じて強化され。
我々 は最近、多孔体構造 (5-7 μ m の直径 30-40 μ m の細孔の繊維) と変更された PCL エレクトロスピニング移植を報告しました。ラット腹部大動脈を置き換えることによって体内注入は、3 ヶ月手術後16で開存、として良好な血管内皮形成と平滑筋再生率が高いを示した。もっと重要なは、不利な組織の石灰化とセルの回帰を含む改造が認められなかったのも移植の 1 年後。
Protocol
Representative Results
Discussion
再生の重要な細胞浸潤は、生体内で血管16の改造。限られた細胞浸潤は頻繁に細胞の血管壁への移行を妨げるグラフトの比較的小さな毛穴に関連します。この困難に対処するため大規模な細孔構造を持つエレクトロスピニング PCL 血管を準備する修正法を開発しました。詳しくは、細孔径は処理のパラメーターによって容易に制御できる線維厚の増加に伴い増加しまし…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、NSFC プロジェクト (81522023、81530059、91639113、81772000、81371699、および 81401534) によって財政的に支えられました。
Materials
| Poly(ε-caprolactone) (PCL) pellets (Mn=80,000) | Sigma | 704067 | |
| Methanol | Tianjin Chemical Reagent Company | 1060 | |
| Alcohol | Tianjin Chemical Reagent Company | 1083 | |
| Chloroform | Tianjin Chemical Reagent Company | A1007 | |
| Sucrose | Tianjin Fengchuan Company | 2296 | |
| Triton X-100 | Alfa Aesar | A16046 | |
| Sprague Dawley rats | Laboratory Animal Center of the Academy of Military Medical Sciences | ||
| Normal saline | Hebei Tiancheng Pharmaceutical company | ||
| Chloral hydrate | Tianjin Ruijinte chemical company | 2223 | |
| Heparin sodium Injection | Tianjin Biochem Pharmaceutical company | ||
| Gentamycin Sulfate Injection | Jiangsu Lianshui Pharmaceutical company | ||
| Mouse anti-α-SMA primary antibody | Abcam | ab7817 | |
| Mouse anti-smooth MYH primary antibody | Abcam | ab683 | |
| Rabbit polyclonal anti-rat elastin antibody | Abcam | ab23748 | |
| Rabbit anti-von Willebrand factor primary antibody | Abcam | ab6994 | |
| Goat anti-mouse IgG (Alexa Fluor 488) | Invitrogen | ab150117 | |
| Goat anti-rabbit IgG (Alexa Fluor 488) | Invitrogen | ab150077 | |
| 5% normal goat serum | Zhongshan Golden bridge | ZLI9022 | |
| Hematoxylin and eosin (H&E) | Beijing leagene biotech | DH0006 | |
| Masson's trichrome | Beijing leagene biotech | DC0032 | |
| Verhoeff-van Gieson (VVG) | Beijing leagene biotech | DC0059 | |
| Von Kossa | Beijing leagene biotech | DS0003 | |
| Surgical sutures needles with thread,3-0 silk | Shanghai Jinhuan medical supplies company | G3002b | |
| Surgical sutures needles with thread,9-0 silk | Shanghai Jinhuan medical supplies company | H901 |
References
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