Nous présentons une approche détaillée pour effectuer le prélèvement de salive, y compris la trachéotomie murin et l’isolement des trois glandes salivaires principales.
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Article de méthode
Murine salivaire évaluation fonctionnelle par l’intermédiaire de Pilocarpine Stimulation suit fractionnés rayonnement
Dans cet article
Résumé
Résumé
Hypoptyalisme est fréquemment observé dans la réaction auto-immune du syndrome de Sjögren ou d’après une blessure rayonnement vers les glandes salivaires principales. Dans ces cas, les questions demeurent au sujet de la pathogenèse de la maladie et des interventions efficaces. Une technique optimisée qui permet l’évaluation fonctionnelle des glandes salivaires est inestimable pour l’étude thérapeutique, dysfonction et la biologie des glandes exocrines. Ici, nous présentons une approche étape par étape, lorsque vous exécutez pilocarpine stimule la sécrétion de salive, y compris la trachéotomie et la dissection des trois principales glandes salivaires murines. Nous détaillons également l’anatomie tête et cou murine approprié consultée au cours de ces techniques. Cette approche est évolutive, permettant plusieurs souris être traitées simultanément, améliorant ainsi l’efficacité du flux de travail. Notre objectif est d’améliorer la reproductibilité de ces méthodes, dont chacun contient d’autres applications dans le domaine. En plus de prélèvement de salive, nous discutons des métriques pour quantifier et normaliser la capacité fonctionnelle de ces tissus. Des données représentatives sont incluses à partir des glandes sous-maxillaires avec la fonction des glandes salivaires déprimé 2 semaines après l’irradiation fractionnée (4 doses de 6,85 Gy).
Introduction
Troubles des glandes salivaires incluent syndrome de dysrégulation ou ayant une déficience de sécrétion conduisant à la surproduction (sialorrhée) ou sous-production (xérostomie et hypoptyalisme) de salive1. Dans les deux cas, il y a un intérêt dans l’amélioration de notre compréhension de la biologie de la glande salivaire vers le but ultime de développement thérapeutique2.
Les glandes salivaires sont des organes très radiosensibles et sont souvent endommagés au cours de la radiothérapie du cancer tête et cou, conduisant à une sécheresse permanente de la bouche (xérostomie)3....
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Protocole
Toutes les procédures en vivo décrites ci-dessous ont été approuvés par le Comité Université sur les ressources animales de l’Université de Rochester, Rochester. NY.
1. préparation
- À l’aide d’une balance analytique, peser 20 mg de pilocarpine. Dissolvez-le dans 2 mL de sérum physiologique stérile dans un tube de microcentrifuge.
Remarque : Parce que la pilocarpine est sensible à la lumière et perd l’efficacité au fil du temps, cette solution devrait être préparée le jour de l’injection et abrie de la lumière jusqu'à ce que les administrés. - À l’aide d’une balance analytique, peser et identifier tous les tubes ....
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Résultats
Lors de l’exécution pilocarpine dose élevée, stimulée par le prélèvement de salive, il est important de maintenir les voies respiratoires afin d’éviter l’aspiration ou étouffement des sécrétions de la cavité buccale. Une représentation schématique de la trachéotomie est fournie (Figure 1). Après incision trachéale, la stomie doit rester à l’écart des fluides et les tissus.
Pour améliorer l’action ca.......
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Discussion
Nous présentons une méthode plusieurs étapes pour évaluer la fonction des glandes salivaires, qui peut être appliquée à l’étude thérapeutique et lésion de la glande. Notre procédé implique la trachéotomie, prélèvement de salive et dissection de la glande, dont chacun a des applications expérimentales qui peuvent soutenir une étude intégrée de la biologie de la glande salivaire. Par exemple, trachéotomie murine a servi pour la gestion des voies aériennes générales au cours de procédures obstruant la cavité buccale.
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Recherche rapporté dans cette publication a été financée par le National Institute of Dental et recherche Craniofacial (NIDCR) et le National Cancer Institute (NCI) de la National Institutes of Health, sous attribution numéro R56 DE025098 et UG3 DE027695 F30 CA206296. Le contenu est la seule responsabilité des auteurs et ne représente pas nécessairement l’opinion officielle de la National Institutes of Health. Ce travail a été également soutenu par la NSF DMR 1206219 et de l’Innovation de l’AIRD en Oral Care Award (2016).
Nous tenons à remercier le Dr Eri Maruyama et Andrew Hollomon pour leur aide avec prélèvement de salive. Nous tenons à r....
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Chlorhydrate de pilocarpine | Sigma Aldrich | P6503 | Pilocarpine |
| Student Vannas Ciseaux à ressort | Outils de sciences fines | 91500-9 | Ciseaux à ressort pour trachéotomie |
| Solution saline stérile | Medline | RDI30296H | Saline |
| Dumont #7 Forceps | Fine Science Tools | 11274-20 | Pince |
| incurvée Dumont #5 Forceps | Outils de science fine | 11251-10 | Pince droite |
| Pince à motif standard | Outils de science fine | 11000-12 | Pince émoussée |
| Ciseaux fins - Carbure de tungstène | Outils de science fine | 14568-09 | Ciseaux de dissection |
| Microhématocrite Tubes capillaires héparinés | Fisher Scientific | 22362566 | Tubes capillaires |
| Lubrifiant Pommade | pour les yeuxRefresh | N/A | Refresh Lacri-Lube |
| Goat polyclonal anti-Nkcc1 | Santa Cruz Biotech | SC-21545 | Nkcc1 Anticorps |
| DAPI (4',6-Diamidino-2-Phénylindole, Dihydrochloride) | Thermo Fisher Scientific | D1306 | DAPI |
| GraphPad Prism | GraphPad | ver6.0 | Statistical Software |
| Applicateur à pointe de coton | Medline | MDS202000 | Applicateur pour pommade oculaire |
| 0,5cc Seringue à insuline, 29G x 1/2" | BD | 7629 | Seringue pour injection intrapéritonéale |
Références
- Bradley, P., O'Hara, J. Diseases of the salivary glands. Surgery (Oxford). 33 (12), 614-619 (2015).
- Fox, P. C. Salivary enhancement therapies. Caries Research. 38 (3), 241-246 (2004).
- Konings, A. W. T., Coppes, R. P., Vissink, A.
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Réimpressions et autorisations
