Polimer ince film Kompozit yapıların farklı Young’un dönmeler ya da kalınlıkları sahip üretim süreci için bir protokol sunulmuştur. Filmler için Gelişmiş hücre kültür çalışmaları veya deri yapıştırıcı olarak üretilmektedir.
Bu protokol için biz ince elastomer bileşik filmleri Gelişmiş hücre kültür uygulamaları için ve cilt yapıştırıcılar gelişimi için imal etmek yöntemleri mevcut. İki farklı poly-(dimethyl siloxanes) (PDMS ve yumuşak deri yapıştırıcı (SSA)), kullanılmıştır için biyolojik etkileri ve yapışkanlı özellikleri derinlik soruşturmada. Bileşik filmleri esnek destek katmanı ve yapışkan bir üst kaplama oluşur. Her iki katmanı Doktor blade uygulama tekniği ile imal edilmiştir. Mevcut araştırmada, katman kalınlığı bir fonksiyonu veya Young katsayısı üst tabaka bir varyasyon olarak kompozit filmleri yapışkanlı davranışını soruşturma. Young katsayısı PDMS in Bankası crosslinker karıştırma oranı değişen tarafından değiştirildi. Buna ek olarak, SSA film kalınlığı yaklaşık 320 µm. taramalı elektron mikroskobu için (SEM) yaklaşık 16 µm çeşitli ve optik mikroskobu kalınlığı ölçümleri için kullanılan. Elastomer filmlerin yapışkanlı Özellikler güçlü film kalınlığı, Young katsayısı polimerler ve yüzey özelliklerine bağlıdır. Bu nedenle, yumuşak ve sert yüzeyler sergileyen cam yüzeyler üzerinde bu filmlerin normal yapışma araştırıldı. Çekme-off stres ve iş ayrılık silikon elastomer karıştırma oranına bağlıdır.
Ayrıca, üzerinde bir destekleyici destek katmanı yerleştirilen yumuşak deri yapıştırıcı kalınlığı cilt uygulamaları için yamalar üretmek için çeşitli. Sitotoksisite, yayılmasını önleme ve hücresel yapışma L929 fare fibroblastlar (karıştırma oranı 10:1) PDMS ve (karıştırma oranı 50: 50) SSA filmleri üzerinde yapılmıştır. Biz burada, ilk kez yan yana karşılaştırma iki polimerler üretilen ince bileşik filmlerin göstermiştir ve biyolojik ve yapışkan özelliklerinin incelenmesi mevcut.
Bu protokol için üretim ince elastomer filmlerin detaylı yöntemleri sunulmaktadır. Yaygın olarak kullanılan Doktor blade tekniği ince bileşik film üretimi için kullanılmaktadır. İmalat tekniği polyethylenterephtalate (PET) folyo, büyük ölçekte bu filmlerin sonraki üretim etkinleştirme üzerinde yapıldı. Vurgu bu protokol tekrarlanabilirlik, üretim kompozit filmlerin farklı katmanları ve bileşik yama final biyolojik ve yapışma özelliklerinin belirlenmesi hassas bir değerlendirme olduğunu. Silikon elastomer poly-(dimethylsiloxane) (PDMS) yoğun üretim cilt yapıştırıcılar, havacilik uygulamalar ve ek araştırma alanları1,2,3 de dahil olmak üzere Biyomedikal teknolojisinde kullanılan ,4. Son zamanlarda, yumuşak cilt yapıştırıcılar (SSAs) sözde PDMS, başka bir alt sınıfı olmuştur tanıttı, bağ ve de-bağ nazik cilt için belirli.
Silikon SSAs functionalized vinil elastomerler, benzer polimerler silis5takviye devamsızlık göre farklı vardır. Diğer PDMS, SSA’ın Barcelona’da Young katsayısı geniş bir alanda modülasyonlu cross-linker konsantrasyon veya kuruma süresi6,7,8tarafından adapte edilebilir. Bu değişikliği Young katsayısı silikonlu elastomerler, malzemenin yapışkanlı özellikleri önemli ölçüde etkiler ve ayrıca üstünde yüzey9,10 kültürlü prokaryotik ve ökaryotik hücrelerde derin sonuçları vardır , 11. biyolojik hücresel düzeyde, bu gösterildi, ökaryotik hücreleri sinyal iletim düzeyde bir modülasyon matris esneklik veya kalınlığı yüzey9,10,12 yanıt ,13,14. Bu yüzden, hücre kültür uygulamaları ayarlanabilir mekanik özelliklere sahip polimerlerin geniş bir ilgi var. Önemlisi, özünde düşük yüzey enerji Silikon esaslı elastomerler ökaryotik hücrelerin hücre kültürü için optimal koşullar sağlamaz. Oksijen Plazma tedavidir çekme-off gücünü bir donanım için önde gelen PDMS düşük yüzey enerji geçici olarak artırmak için yaygın olarak kullanılan bir teknik eki, yayılmasını teşvik paralel iken moleküllerin yüzey adsorpsiyon azalma ve Ökaryotik hücreler15,16,17,18yayılması.
Malzeme özelliklerine ek olarak, yüzey topografyası hücresel yapışma ve yapışkanlı etkileşim iki malzeme19,20,21,22arasında büyük ölçüde etkiler. Yüzey pürüzlülüğü iki yüzey arasında iletişim oluşumu üzerinde çeşitli etkileri vardır: azaltma iletişim alanının yüksek elastik enerji etkisi çatlamak yaymayı yapıştırıcı gücü23, değiştirebilirsiniz yanı sıra asperities çevreleyen depolanan 24. İnsan derisi için kendi yapışkan filimler yapışma gelişmekte olan uygulama alanı, Örneğin, yara sosları, ECG elektrotlar fiksasyonu veya diğer taşınabilir elektronik cihazlar25,26,27olduğunu, 28. Öz-yapıştırıcılar ile ilgili olarak yüzey topografyası yapışkanlı performansını ölçmek için normal yapışma ölçümleri8,21‘ pürüzlülük değişen derecelerde ile cam yüzeylerde kullanılabilir. Burada, iki cam yüzeylerde yapıştırıcı polimer filmler özelliklerini araştırmak için seçilmiştir. İlk, bileşik filmler PDMS destek katman karıştırma oranında PDMS tarafından farklı karıştırma oranı ile kaplı 10-1 ağırlık parçaların ile karakterize. İkinci adımda yapışkanlı bir SSA katman her iki bileşenin miktarda eşit ağırlık ve destekleyici bir PDMS film üstüne film kalınlığı değişen hazırlanmıştır.
Kompozit yapıların tasarım Young katsayısı veya örnekleri kalınlığı gibi malzeme özelliklerine basit ayarlama sağlar. Young katsayısı PDMS, iki bileşenler arasındaki karıştırma oranı değiştirme veya karışımları farklı silikon elastomer30,31kullanarak üretim geniş bir alanda etkin bir şekilde değiştirilebilir. Açıklanan yöntemleri geçerli araştırmada kullanılan PDMS’ın sınırlı değildir, ama özellikle yapışkanlı performans güçlü kullanılan belirli türüne göre değişir. Bu iletişim kuralı içinde önemli bir adım bileşik filimler (Şekil 1) üretim sürecidir. Bu film kalınlığı önemli ölçüde farklı yüzeylerde (Şekil 5 ve Şekil 6) deri de dahil olmak üzere, tarih filmleri yapışma davranışını etkiler gösterilmiştir. Film kalınlığı yanı sıra zaman ve sıcaklık kür işlemi sırasında malzeme özellikleri32etkiler. Bu nedenle, parametre olarak polimer katman kalınlığı dikkatli bir şekilde uyarlanmıştır ve doğrulanmadı gerekir.
İnce filmlerin yapışkanlı özelliklerinin çözümlemenin Ra kadar farklı yüzey pürüzlülük ile iki cam yüzeylerde kullanarak normal kuvvet yapışma ölçüleri ile 0.338 µm (Şekil 3) =. Genel olarak, pürüzlülük yapışma yüzeylerinin, elastik malzeme33,34özellikle önemli ölçüde etkiler. Cam pürüzlülüğü farklı sertliklerin boyutlarda, bu nedenle daha yüksek pürüzlülük değerleri21sergilenmesi yüzeylerde imalatı izin zımpara taşlama tarafından kolayca değiştirilebilir. Buna ek olarak, diğer malzemeler, örneğin epoksi reçine yüzeylerde15,35üretim için kullanılabilir. Bu sunulan Protokolü’nün bir önemli değişiklik strateji olabilir. Örneğin, Eğer farklı yüzey serbest enerji sergilenmesi yüzeylerde gerekli veya belirli Topografyaları gereklidir. Burada, çekme-off stres ve iş ayrılık PDMS ve SSA üretilen ince filmlerin özel olarak oluşturulmuş bir kurulum (makroskopik yapışma ölçüm cihazı (MAD, Şekil 4)) ile analiz edildi. 36 optik uyum substrat ve uç ölçüm sonuçlarının analizi için kritik bir adımdır. Bu nedenle, tilt açı düzeltilmesi mümkün olduğunca kesin Gonyometre ile yapılması gerekiyor. Bu el ile yatay bir kişi elde kadar film yüzeyine temas substrat getirerek yeterli hassasiyetle elde edilebilir.
Geçerli protokol tutun zaman bir saniye (Şekil 5 ve Şekil 7) sabit tutuldu. Özellikle yapışkanlı elastik bir filmi bir kaba substrat yüzey ile performansını incelenmesi için uzantı tutun zaman ek bilgi sağlar. Örneğin, bildirilen8tutun zaman artan stres çekme-off bir artış olmuştur. Geçerli protokol, diğer yöntemlerle gerçekleştirilen ölçümler yanı sıra örneğin kabuğu testleri, yapışma performansı37daha kapsamlı bir soruşturma izin yerine olabilir.
Bileşik Filmler (Şekil 7) farklı film yumuşak deri yapıştırıcı kalınlıkları belirlendi sergilenmesi yapışkanlı özellikleri. Bu film kalınlığı çekme-off stres artış müşteri adayına, bir düşüş gösteren hapsi, yani, substrat çapı ve film kalınlığı, artar38,39 arasındaki oran olarak yayımlanmış veri doğrultusunda bizim sonuçları. . Bu sonuçlar ve Şekil 7‘ de tasvir veri dayalı, biz yaklaşık 100 µm (yaklaşık 60 µm PDMS film için yaklaşık 40 µm kalınlığında ile uygulanan SSA tabakası kalınlığı) toplam kalınlığı ile bileşik filmleri olumlu yapışma p sergi sonucuna zellikleri pürüzlü yüzeylerde.
Daha sonra biyolojik karakterizasyonu ile ilgili deneyler bozulmamış bileşik filmler gerçekleştirilmiş ve plazma bileşik Filmler (Şekil 8) tedavi. Silikon elastomer tedavisinde plazma yüzeyler ve hücresel eki ve hücresel40,41yayılmasını teşvik hidrofilik özelliklerini artırmak için sık sık uygulanan, çok yönlü bir tekniktir. Silikonlar kendi düşük toksisite ve yüksek biostability için bilinen ama artık monomerleri veya fizyolojik süreçler, ayrıca sitotoksisite42,43için önde gelen etkileyen katalizörler içerebilir. Yapılan deneyler biz gözlemledim daha az içinde karaciğer kullanan bir göstergesi ve bir Trypan mavi dışlama tahlil %5 sitotoksisite. Sunulan protokolü, tüm hücresel nüfus ilişkisi kesildi yüzeye yayılması Analizi (Şekil 9B) analiz formu hücresel toplamları dahil olmak üzere. Bir değişiklik Protokolü’nün daha farklı sonuçlar üretebilir. Her örnek için müstakil hücresel toplamları içeren süpernatant olabilir bir ayrı tepki tüp transfer ve enzimatik polimer yüzeyden kaldırıldı hücreleri ile birlikte değil. Bu yüzeye bağlı hücre tam değerlendirme izin ve sonunda polimerler etkisi hücre adezyon işlemiyle ilgili daha ayrıntılı bir kararlılık ortaya koyuyor. Burada sunulan immunocytochemical yöntemlere ek olarak, hücrelerin protein ifade detaylı bir kantitatif değerlendirilmesi sağlayan immunoblot yöntemlerini ile soruşturma için hasat.
Özet olarak, üretim koşulları uygulamalar Gelişmiş hücre kültür araştırma için ince elastomerik bileşik filmlerin üretimi için kurduk. Ayrıca, bu ince filmler yüksek adaptasyon pürüzlülük, cilt yapıştırıcıların sofistike tasarımı etkinleştirme cilde sahip.
The authors have nothing to disclose.
Martin Danner örnekleri ve hücre kültür yordamlar kurulması hazırlarken onun yardımını kabul edilmektedir. Yazarlar Biesterfeld Spezialchemie GmbH (Hamburg, Almanya), özellikle Robert Radsziwill sürekli destek ve sohbet için teşekkür etmek istiyorum. Bu sonuçlar için önde gelen araştırma Avrupa Araştırma Konseyi Avrupa Birliği’nin yedinci çerçeve programı (FP/2007-2013) ERC Hibe Sözleşmesi n. 340929 altında fon aldı.
2-Propanol, 97% | Stockmeier Chemie | 1000452610000 | Isopropanol |
Abrasive diamnod hand pad | Bohle | MO 5007522 | Grit: 220 |
Accutase | Capricorn Scientific | ACC-1B | |
Albumin Fraktion V | Roth | 0163.2 | BSA |
Alexa Fluor 488 Phalloidin | ThermoFischer Scientific | A12379 | highly toxic |
Aquamount | Polysciences | 18606-20 | water soluble mounting medium |
CytoTox-ONE Homogeneous Membrane Integrity Assay | Promega | G7890 | |
DPBS, without Ca2+, Mg2+ | ThermoFischer Scientific | 14190094 | |
Fetal bovine serum gold | GE Health Care Life Science | A15-151 | FBS |
Goniometer OCA35 | Dataphysics | for the determination of the static water contact angle | |
Hoechst Dye 33342 | Sigma-Aldrich | B1155-100MG | bisBenzimide H 33342 trihydrochloride, highly toxic |
Microscope Axiovert 25 | Zeiss | Microscope used for cell culture documentation | |
Microscope Eclipse LV100ND | Nikon | Microscope used for film thickness determination | |
Paraformaldehyde, aqueous solution 16% | Electron Microscopy Sciences | RT 15710 | electron microscopy grade |
penicillin und streptomycin solution | Sigma-Aldrich | P4333-100ML | |
Phenom XL Scanning Electron Microscope (SEM) | Phenom | ||
Poly-(vinyl alcohol) 4-88, MW 31000 | Sigma-Aldrich | 81381-1KG | Mowiol 4-88 |
Poly-dimethyl siloxanes, Sylgard 184 | Dow Corning | (400)000108351397 | PDMS |
RPMI 1640 basal medium | ThermoFischer Scientific | 21875034 | |
soft skin adhesive (SSA) | Dow Corning | (400)000108251792 | MG 7-9800 Soft Skin Adhesive (SSA) |
speed mixer DAC 600.2 VAC-P | Hauschild | ||
stylus profilomter | Zeiss | Model: SURFCOM 1500SD3 | |
Tecan Infinite M200 pro | Tecan | fluorescence plate reader | |
Triton X 100 | Calbiochem | 648466 | |
Trypan Blue solution | Sigma-Aldrich | T8154-100ML | highly toxic |
Trypsin/EDTA solution | PAN-Biotech | P10-023500 | 0.05% Trypsin, 0.02% EDTA in PBS |
UV glue | Bohle | BO MV76002 | medium viscosity |