JoVE Journal > Immunology and Infection
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Résultats
Discussion
Divulgations
Acknowledgements
Materials
References
Traduction automatique
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Immunologie et infection

Половым путем американских трипаносом в наивный товарищей от мужчин и женщин

Published: January 27, 2019
doi:
10.3791/57985
, , , , ,
1Chagas Disease Multidisciplinary Research Laboratory, Faculty of Medicine,University of Brasilia, 2Instituto Evandro Chagas

Summary

Агент Trypanosoma cruzi болезни Шагаса производит долговечные бессимптомные инфекции, которые резко развиться в клинически признанных патологии. Следующий протокол исследования описывает на базе семьи эпидемиологическое исследование краткосрочных разгадать т. cruzi инфекция передается половым путем от родителей к потомству.

Abstract

Американским трипаносомозом передается людям triatomine ошибок через пищу загрязненных продуктов питания, переливание крови или случайно в больницах и исследовательских лабораторий. Кроме того инфекции Trypanosoma cruzi врожденно передается от матери chagasic ее потомство, но мужчины-партнера вклад внутриутробное заражение неизвестным. Гнезда и clumps из amastigotes и trypomastigotes в клетках theca завязи, в goniablasts и в просвете семенных канальцев пришли к выводам, что т. cruzi инфекций передающихся половым путем. Протокол исследования здесь представлены результаты семейного обучения населения, показывая паразита ядерной ДНК в мононуклеарных клетках диплоидных крови и в haploid гамет человека предметов. Таким образом три независимых биологических образцов, собранных отдельно один год подтвердил, что т. cruzi инфекции половым потомкам. Интересно, что конкретные т. cruzi антитела отсутствовал в большинстве семьи потомства, что родила Иммунологическая толерантность к антигену паразита. Иммунологическая толерантность был продемонстрирован в курица огнеупорных т. cruzi после первой недели эмбрионального роста, и вылупившихся из яиц бичевать привитых цыплят смогли произвести специфическое антитело. Кроме того инстилляции человеческой спермы эякуляции внутрибрюшинно или во влагалище наивно мышей, принесли amastigotes т. cruzi в придатка яичка, семенных канальцах, семяпроводов и маточных труб при отсутствии воспалительного реакции в иммунной привилегированных органов размножения. Разведение т. cruzi-инфицированных мужчин и женщин мышей с наивными товарищей привели к приобретению инфекции, которые впоследствии были препровождены потомства. Таким образом программу надежные образования, информации и коммуникации, которая предполагает населения и общественных организаций является необходимым для предотвращения болезни Шагаса.

Introduction

Простейших паразитов Trypanosoma cruzi , принадлежащий к семейству Trypanosomatidae подвергается trypomastigote и amastigote этапов жизненного цикла в млекопитающих хостов и существует как epimastigotes в насекомое вектора (поцелуйными: Триатомовые клопы) кишки и в стерильных культуры. В последние десятилетия некоторые исследования показали наличие болезни Шагаса в странах на четырех континентах считается triatomine ошибка бесплатно1,2,3,4,5, 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13; дисперсия американских трипаносом был первоначально приписывается латиноамериканских иммигрантов в северном полушарии, но возможность, что некоторые из них автохтонные случаев болезни Шагаса, больше не может быть отказано3,4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14. только узнаваемый эндогенного источник заражения т. cruzi были приписывают chagasic мать передачи паразита потомство в приблизительно 10% беременностей15; мужчины-партнера вклад в утробе инфекции через спермы эякуляции остается непризнанной.

Более века назад, следователи16,17 наблюдается внутриклеточных cruzi т. amastigotes в клетках theca завязи и в зародыше линия клетки яичек острых случаев болезни Шагаса. Гнезда и clumps т. cruzi trypomastigotes и amastigotes в теки клеток яичника, в goniablasts и в просвете семенных канальцев (рис. 1) смертельных случаев острой болезни Шагаса развивать иммунные привилегии в органах воспроизводства в условиях отсутствия воспалительные инфильтраты18,19. В последние десятилетия несколько экспериментальных исследований показали гнезда форм круглые amastigote т. cruzi в семенных канальцах, придатка и семяпроводов также как и матки, труб и яичников клеток теки остро зараженных мышей 1,20,21,22. Кроме того, в ходе исследования семьи к документу передачи простейших митохондриальной ДНК от родителей пациентов Шагаса их потомкам, т. cruzi ядерной ДНК (nDNA) была проверена в человеческих зародышей haploid клетки линии23и этапы жизненного цикла паразитов были замечены в эякуляции chagasic мышей24. Эти выводы согласуются с доклады о иммунной толерантности, достигается потомства т. cruzi –зараженных хостов в отсутствие специфического антитела1,25,26. Кроме того эпидемиологические отчеты, которые предложили распространения эндемических болезни Шагаса в других континентов3,4,5,6,7,8 ,9,10,11,12,13 теперь поддерживаются экспериментальные исследования, показывающие, что болезнь Шагаса может передаваться половым путем1 . Настоящее исследование представляет протокол эпидемиологическое исследование семьи и показывает, что т. cruzi инфекции распространяется на половое сношение.

Protocol

Человека и животных исследовательских комитетов на факультете медицины Университета Бразилиа одобрил все процедуры с людьми и лабораторных животных, соответственно, в протоколы исследований 2500.167567 и 10411/2011. Комитет по этике общественный фонд больница Гаспар Вианна (протокол № 054/2009 и C…

Representative Results

Это исследование, проведенное в соответствии с протоколом, направленных для выявления острых случаях болезнь Шагаса, клинических и паразитологии экзаменов. Пробы венозной крови были подвергнуты прямой микроскопического исследования и в пробирке культуры для роста ?…

Discussion

Здесь, мы обсуждаем на базе семьи исследовательский протокол, который ответил на вопрос ли человеческие болезни Шагаса проистекает из половым внутривидовых т. cruzi инфекции. Ранние исследования не может представить доказательства передачи половым путем инфекций, т. cruzi , вероя?…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Мы признаем, лабораторное оборудование и критические замечания Изабела Dourado, Карла Араужу, и умный Гомес и технической помощи Бруно Dalago и Рафаэль Андраде. Мы в долгу перед фондом для развития науки (FAPDF), Национальный исследовательский совет, министерства науки и технологии (CNPq/MCT) и агентство для подготовки людских ресурсов, Министерство образования (накидки / ME), Бразилия, для поддержки этих расследований.

Materials

BCIP and NBT redox system Sigma-Aldrich 681 451 001
Blood DNA Purification columns Amersham Biosciences 27-9603-01
d-ATP, [α-32P], 250 µCi.   Perkin Elmer   BLU012H
DNA, Solution Salt Fish Sperm AMRESCO 064-10G
dNTP Set, 100 mM Solutions GE Healthcare 28-4065-51
Eco RI Invitrogen 15202-021
Goat anti-human IgG- alkaline phosphatase conjugated Southern Biotech        2040-04
Goat anti-human IgG- FITC conjugated Biocompare MB5198020
Hybond – N+ nylon membrane GE Healthcare RPN303B
Hybridization oven Thomas Scientific 95-0031-02
Micro imaging software cell Sens software Olympus, Japan
Molecular probes labeling System Invitrogen 700-0030
Nsi I Sigma-Aldrich R5584 1KU
Plasmid Prep Mini Spin Kit GE Healthcare 28-9042-70
Plate reader  Bio-Tek GmBH 2015
Rabbit anti-chicken IgG-alkaline phosphatase conjugated Sigma-Aldrich A9171
Rabbit anti-chicken IgG-FITC conjugated Sigma-Aldrich F8888
Rabbit anti-mouse IgG- alkaline phosphatase conjugated Sigma Aldrich A2418 
Rabbit anti-mouse IgG-FITC conjugated Biorad MCA5787
Spin Columns for radio labeled DNA purification, Sephadex G-25, fine Sigma-Aldrich G25DNA-RO 
Taq DNA Polymerase Recombinant Invitrogen 11615-010
Thermal cycler system Biorad, USA 1709703
Vector Systems Promega A1380
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Araujo, P. F., et al. Sexual transmission of American trypanosomiasis in humans: a new potential pandemic route for Chagas parasites. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz. 112 (6), 437-446 (2017).
  2. Teixeira, A. R. L., Nitz, N., Bernal, F. M., Hetch, M. M. Parasite Induced Genetically Driven Autoimmune Chagas Heart Disease in the Chicken Model. Journal of Visualized Experiments. (65), 3716 (2012).
  3. Kalil-Filho, R. Globalization of Chagas Disease Burden and New Treatment Perspectives. Journal of the American College of Cardiology. 66 (10), 1190-1192 (2015).
  4. Nunes, M. C. P., Dones, W., Morillo, A., Encina, J. J., Ribeiro, A. L. Chagas Disease: An Overview of Clinical and Epidemiological Aspects. Journal of the American College of Cardiology. 62 (9), 767-776 (2013).
  5. Pinazo, M. J., Gascon, J. Chagas disease: from Latin America to the world. Reports in Parasitology. 2015 (4), 7-14 (2015).
  6. Kessler, D. A., Shi, P. A., Avecilla, S. T., Shaz, B. H. Results of lookback for Chagas disease since the inception of donor screening at New York Blood Center. Transfusion. 53 (5), 1083-1087 (2013).
  7. Klein, N., Hurwitz, I. R. Globalization of Chagas Disease: A Growing Concern in Nonendemic Countries. Epidemiology Research International. , (2012).
  8. Pérez-Molina, J. A., Norman, F., López-Vélez, R. Chagas disease in non-endemic countries: epidemiology, clinical presentation and treatment. Current Infectious Diseases Report. 14 (3), 263-274 (2012).
  9. Hotez, P. J., et al. Chagas disease: "the new HIV/AIDS of the Americas". PLoS Neglected Tropical Diseases. 6, e1498 (2012).
  10. Schmunis, G. A., Yadon, Z. E. Chagas disease: a Latin American health problem becoming a world health problem. Acta Tropica. 115 (1-2), 14-21 (2010).
  11. Franco-Paredes, C., Bottazzi, M. E., Hotez, P. J. The Unfinished Public Health Agenda of Chagas Disease in the Era of Globalization. PLoS Neglected Tropical Diseases. 3 (7), e470 (2009).
  12. Teixeira, A. R. L., Vinaud, M., Castro, A. M. . Emerging Chagas Disease. In: Chagas Disease: – A Global Health Problem. 3, 18-39 (2009).
  13. Lee, B. Y., Bacon, K. M., Bottazzi, M. E., Hotez, P. J. Global economic burden of Chagas disease: a computational simulation model. Lancet Infectious Diseases. 13 (4), 342-348 (2013).
  14. Teixeira, A. R. L., Hecht, M. M., Guimaro, M. C., Sousa, A. O., Nitz, N. Pathogenesis of Chagas Disease: Parasite Persistence and Autoimmunity. Clinical Microbiology Review. 24 (3), 592-630 (2011).
  15. Murcia, L., et al. Risk factors and primary prevention of congenital Chagas disease in a nonendemic country. Clinical Infectious Diseases. 56 (4), 496-502 (2013).
  16. Chagas, C. New human trypanosomiasis. Morphology and lifecycle of Schizotrypanum cruzi, the cause of a new human disease. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz. 1, 159 (1909).
  17. Vianna, G. Contribution to the study of the Pathology of Chagas disease. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz. 3, 276 (1911).
  18. Teixeira, A. R. L., Roters, F., Mott, K. E. Acute Chagas disease. Gazeta Médica da Bahia. 3, 176-186 (1970).
  19. Teixeira, A. R. L., et al. Prevention and Control of Chagas Disease – An Overview. International STD Research, Reviews. 7 (2), 1-15 (2018).
  20. Rios, A., et al. Can sexual transmission support the enzootic cycle of Trypanosoma cruzi?. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz. 113 (1), 3-8 (2018).
  21. Lenzi, H. L., et al. Trypanosoma cruzi: compromise of reproductive system in acute murine infection. Acta Tropica. 71 (2), 117-129 (1998).
  22. Carvalho, L. O. P., et al. Trypanosoma cruzi and myoid cells from seminiferous tubules: Interaction and relation with fibrous components of extra cellular matrix in experimental Chagas’ disease. International Journal of Experimental Pathology. 90 (1), 52-57 (2009).
  23. Hecht, M. M., et al. Inheritance of DNA transferred from American trypanosomes to human hosts. PLoS One. 12, e9181 (2010).
  24. Alarcon, M., et al. Presencia de epimastigotes de Trypanosoma cruzi en el plasma seminal de ratones con infección aguda. Boletín Malariología y Salud Ambiental. 51, 237 (2011).
  25. Teixeira, A. R. L., et al. Trypanosoma cruzi in the Chicken Model: Chagas-Like Heart Disease in the Absence of Parasitism. PLoS Neglected Tropical Diseases. 5 (3), e1000 (2011).
  26. Guimaro, M. C., et al. Inhibition of Autoimmune Chagas-Like Heart Disease by Bone Marrow Transplantation. PLoS Neglected Tropical Diseases. 8 (12), e3384 (2014).
  27. Oliveira, C. I., et al. Leishmania braziliensis isolates differing at the genome level display distinctive features in BALB/c mice. Microbes and Infection. 6 (11), 977-984 (2004).
  28. Mendes, D. G., et al. Exposure to mixed asymptomatic infections with Trypanosoma cruzi, Leishmania braziliensis and Leishmania chagasi in the human population of the greater Amazon. Tropical Medicine, International Health. 12, 629 (2007).
  29. Moser, D. R., Kirchhoff, L. V., Donelson, J. E. Detection of Trypanosoma cruzi by DNA amplification using the polymerase chain reaction. Journal of Clinical Microbiology. 27 (7), 1477-1482 (1989).
  30. Da Silva, A. R. . Sexual transmission of Trypanosoma cruzi in mus musculus [MsD thesis]. , (2013).
  31. Ribeiro, M., et al. Can sexual transmission support the enzootic cycle of Trypanosoma cruzi?. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz. 113 (1), 3-8 (2018).
  32. Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B. Actively acquired tolerance of foreign cells. Nature. 172 (4379), 603-606 (1953).
  33. Burnet, F., Fenner, F. . The production of Antibodies. , (1949).
  34. Hasek, M. Parabiosis of birds during their embryonic development. Chekhoslovatskaia Biology. 2 (1), 29-31 (1953).
  35. Coura, J. R., Junqueira, A. C. V., Fernades, O., Valente, S. A., Miles, M. A. Emerging Chagas Disease in Amazonian Brazil. Trends Parasitology. Trends Parasitology. 18 (4), 171-176 (2002).
  36. Teixeira, A. R. L., et al. Emerging Chagas disease: Trophic network and cycle of transmission of Trypanosoma cruzi from palm trees in the Amazon. Emerging Infectious Diseases. 7 (1), 100112 (2001).
  37. Hazebroek, M., Dennert, R., Heymans, S. Idiopathic dilated cardiomyopathy: possible triggers and treatment strategies. Netherland Heart Journal. 20 (7-8), 332-335 (2012).
  38. Arimura, T., Hayashi, T., Kimura, A. Molecular etiology of idiopathic cardiomyopathy. Acta Myologica. 26 (3), 153-158 (2007).
  39. Dec, W. G., Fuster, V. Idiopathic Dilated Cardiomyopathy. New England Journal of Medicine. 33, 1564-1575 (1994).
  40. Niederkorn, J. Y. See no evil, hear no evil, do no evil: the lessons of immune privilege. Nature Immunology. 7 (4), 354-359 (2006).
  41. Smith, B. E., Braun, R. E. Germ cell migration across Sertoli cell tight junctions. Science. 338 (6118), 798-802 (2012).
  42. Garth, A., Wilbanks, J., Streilein, W. Fluids from immune privileged sites endow macrophages with the capacity to induce antigen-specific immune deviation via a mechanism involving transforming growth factor-β. European Journal of Immunology. 22 (4), 1031-1036 (1992).
  43. Meng, J., Anne, R., Greenlee, C., Taub, J., Braun, R. E. Sertoli Cell-Specific Deletion of the Androgen Receptor Compromises Testicular Immune Privilege in Mice. Biology of Reproduction. 85 (2), 254-260 (2011).
  44. Fujisaki, J., et al. In vivo imaging of Treg cells providing immune privilege to the haematopoietic stem-cell niche. Nature. 474 (7350), 216-219 (2011).
  45. Wood, K. J., Sakaguchi, S. Regulatory T cells in transplantation tolerance. Nature Review Immunology. 3 (3), 199-210 (2003).

Tags

Trypanosoma CruziChagas DiseaseSexual TransmissionBlood SamplesCell CulturePCR AnalysisDNA Extraction

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Citer Cet Article
Almeida, A. B., Araújo, P. F., Bernal, F. M., Rosa, A. d. C., Valente, S. A., Teixeira, A. R. Sexual Transmission of American Trypanosomes from Males and Females to Naive Mates. J. Vis. Exp. (143), e57985, doi:10.3791/57985 (2019).
Télécharger la Citation
Réimpressions et Autorisations

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image