Misurazione di contrattilità isometrica dell'arteria mesenterica Mouse con filo Myography
Summary
La tecnica di myograph di filo è utilizzata per studiare le funzioni muscolari lisce e schermo nuove droghe. Segnaliamo un protocollo dettagliato per misurare la contrattilità isometrica dell’arteria mesenterica del mouse e per lo screening di nuovi farmaci rilassanti di muscolo liscio vascolare.
Abstract
La tecnica di myograph di filo viene utilizzata per valutare la contrattilità della muscolatura liscia vascolare in risposta alla depolarizzazione, GPCR agonisti/inibitori e farmaci. È ampiamente usato in molti studi sulle funzioni fisiologiche del muscolo liscio vascolare, la patogenesi di malattie vascolari quali l’ipertensione e lo sviluppo di farmaci miorilassanti muscolo liscio. Il mouse è un animale di modello ampiamente usato con una grande piscina di modelli di malattia e ceppi geneticamente modificati. Abbiamo introdotto questo metodo per misurare la contrazione isometrica dell’arteria mesenterica del mouse in dettaglio. Un segmento di 1.4 millimetri dell’arteria mesenterica resistenza del mouse è stato isolato e montato su una camera di myograph passando due fili di acciaio attraverso il relativo lumen. Dopo i passaggi di equilibrazione e normalizzazione, il segmento di vaso è stato rafforzato da una soluzione di high-K+ due volte prima del dosaggio di contrazione. Come un esempio dell’applicazione di questo metodo nello sviluppo della droga, abbiamo misurato l’effetto rilassante di una nuova sostanza naturale, neoliensinine, isolata da un’erba cinese, embrioni del seme del loto (Nelumbo nucifera (Gaertn.) mouse mesenterica arterie. I segmenti di nave montati sulla camera di myograph sono stati stimolati con una soluzione di high-K+ . Quando la tensione di forza ha raggiunto una fase stabile e sostenuta, dosi cumulative di neoliensinine sono stati aggiunti alla camera. Abbiamo trovato che neoliensinine aveva un effetto miorilassante dose-dipendente sulla contrazione del muscolo liscio, così suggerendo che esso rechi potenziale attività contro l’ipertensione. Inoltre, come il segmento di nave può sopravvivere almeno 4 ore dopo il montaggio e mantenere la contrattilità indotta dalla soluzione high-K+ per molte volte, ci suggeriscono che il sistema di myograph di filo può essere utilizzato per il lungo processo di screening di stupefacenti.
Introduction
Il sistema di myograph piccolo vascello usato qui era per misurare la contrazione isometrica dei vasi di piccola resistenza con diametri interni che vanno da 100 a 400 µm. isolato piccoli vasi (circa 2 mm di lunghezza) sono stati inseriti da due fili di diametro da 40 µm e sono stati quindi montato sulle mascelle micrometro-sul lato e trasduttore in modo sequenziale. Questa tecnica di myograph era in primo luogo suggerita in 19721 e poi sviluppata principalmente da Mulvany e suoi colleghi2,3,4,5,6. Ora è una tecnica matura con attrezzatura stabile, prestazione facile e una normalizzazione standard procedura7,8,9. Abbiamo utilizzato questo metodo con alcune modifiche per misurazioni nell’arteria mesenterica del mouse.
Muscolo liscio vascolare linee le pareti dei vasi sanguigni quasi tutti. La loro funzione fondamentale è quello di generare forze attraverso la contrazione in risposta a vari stimoli. La normale contrattilità del muscolo liscio vascolare è essenziale per la regolazione della pressione arteriosa e nutrizione supplemento10. Regolazione anormale della pressione sanguigna si traduce in una varietà di malattie, compreso ipertensione, infarto e ischemia. Parecchi studi hanno suggerito che anomala della pressione sanguigna è sempre associata a muscolo liscio vascolare disfunzionale contrattilità7,11,12,13. Il metodo myograph consente di indagine di isometrica contrattilità dei vasi del mouse indotto da vari stimoli, tra cui i vasocostrittori, inibitori e farmaci. Misure di successo di contrazione ci aiuterà a comprendere i meccanismi di mantenimento della pressione sanguigna e la patogenesi delle malattie vascolari del muscolo liscio-collegato e di esplorare nuovi approcci terapeutici.
Molte erbe cinesi sono stati ampiamente usate per il trattamento clinico delle malattie vascolari; Tuttavia, la loro efficaci ingredienti solitamente rimangono sconosciuti. Quindi, isolamento e identificazione dei componenti efficaci è molto importante per lo sviluppo di nuovi farmaci. La tecnologia multi-filo myograph offre un approccio semplice per lo screening di componenti attivi in erbe. Abbiamo segnalato diversi studi utilizzando il sistema di myograph dei piccoli vasi per indagare la contrazione dell’arteria mesenterica del mouse e identificato composti naturali con attività anti-ipertensione12,13,14. Qui, descriviamo il dettagliato protocollo per il metodo di myograph e di valutare l’effetto rilassante del neoliensinine isolato dagli embrioni dei semi di loto (Nelumbo nucifera Gaertn.) 14.
Protocol
Representative Results
Discussion
L’ipertensione è una sfida di sanità pubblica diffusa grazie alle sue complicazioni severe, tra cui cardiovascolari e renali malattie16. Comprensione della patogenesi dell’ipertensione ed esplorare più farmaci anti-ipertensivi è diventato un compito urgente in questo campo. La pressione sanguigna è generata e mantenuta dalla resistenza periferica della circolazione. Secondo legge di Poiseuille, relativamente piccole arterie generano una grande percentuale di resistenza circolatoria e servono …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Si ringraziano il Dr. Wei Qi He (Soochow University, Suzhou, Cina) e Dr. Yan Ning Qiao (Shaanxi Normal University, Xi ‘ an, Cina) per l’assistenza tecnica. Questo lavoro è stato supportato da National Natural Science Foundation of China (Grant 31272311, 81373295 e 81473420) e il progetto, finanziato le priorità programma sviluppo di Jiangsu istruzione superiore istituzioni accademiche (Grant No. ysxk-2016).
Materials
| Multi wire myograph system | DMT | 610-M | |
| Stainless steel wire | DMT | 400447 | |
| Geuder dissection scissor | DMT | 400431 | |
| Dumont forceps | DMT | 300413 | |
| PowerLab/8SP | ADInstruments | ML785 | |
| Software | ADInstruments | LabChart 5 | |
| NaCl | SigmaAldrich | S5886 | |
| KCl | SigmaAldrich | P5405 | |
| CaCl2 | SigmaAldrich | C4901 | |
| MgCl2·6H2O | SigmaAldrich | M2393 | |
| D-Glucose | SigmaAldrich | G6152 | |
| HEPES | Sangon Biotech | A100511-0250 | |
| NaOH | SigmaAldrich | S8045 | |
| DMSO | SigmaAldrich | D2650 |
References
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