ワイヤー図法を使用してマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮力測定
Summary
線第 1 報技術を使用して、血管平滑筋機能や画面の新しい薬を調査します。今回はマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮を測定して血管平滑筋の弛緩を新しいスクリーニングのための詳しいプロトコル。
Abstract
ワイヤー第 1 報技術を使用して脱分極の応答、GPCR アゴニスト/阻害薬.での血管平滑筋の収縮性を評価するには血管平滑筋の生理学的機能、高血圧など血管系の疾患の病態解明と平滑筋弛緩薬の開発に関する多くの研究で広く使用されます。マウス疾患モデル、遺伝子組み換え系統の大きなプールで広く使用されているモデル動物であります。詳細にマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮を測定する方法を紹介します。マウス腸間膜動脈の 1.4 mm のセグメントは分離され、内腔を通して 2 つの鋼線を渡すことによって第 1 報室にマウントされています。平衡と正規化の手順の後、血管収縮アッセイの前に 2 回高 K+ソリューションによってし。医薬品開発におけるこのメソッドのアプリケーションの例としてマウスの腸間膜の新規天然物質の neoliensinine、中国のハーブ、ハスの実 (ハス春まき。) の胚から分離した弛緩効果を測定動脈。第 1 報室に取り付けられた容器セグメント高 K+溶液で刺激を受けました。力の張力が安定した持続的な段階に達したら、neoliensinine の累積線量は商工会議所に追加されました。それは高血圧に対する潜在的な活性をクマが示唆その neoliensinine 平滑筋収縮に対する用量依存性弛緩効果があったとわかりました。さらに、血管できます取り付け後、少なくとも 4 時間を生き残るため、何回も、我々 はお勧めの高 K+ソリューションによる収縮性が維持された、創薬スクリーニングの時間のかかるプロセスの線第 1 報システムを使用すること。
Introduction
ここで使用される小型船舶の第 1 報システムだった測定の内部直径 100 から 400 μ m 分離小型船舶 (約 2 mm 長い) に至るまでの小さな抵抗血管の等尺性収縮直径 40 μ m 2 本のワイヤーによって挿入されたし、順番にマイクロメータ側と探触子側の顎にマウントされています。この第 1 報手法だった 1972年1で最初に提案したし、Mulvany と彼の同僚2,3,の4,5,6が主に開発しました。今、安定装置、簡単なパフォーマンス標準正規化手順7,8,9と成熟した技術です。我々 はマウスの腸間膜動脈で測定にいくつかの変更でこのメソッドが利用されています。
血管平滑筋は、ほとんどすべての血管の壁を行します。その基本的な機能は、様々 な刺激に対する応答の収縮力を生成します。通常血管平滑筋収縮は血圧調節に欠かせない、栄養補完10。様々 な病気、高血圧、心不全、虚血.などの血圧測定結果の異常な規制いくつかの研究では、異常な血圧が血管平滑筋機能不全収縮7,11,12,13に関連付けられて常にことを示唆しています。第 1 報の方法では、血管収縮薬、阻害薬など様々 な刺激によるマウス血管の等尺性収縮の調査をことができます。収縮の成功の測定は、血圧維持と血管平滑筋疾患の新規治療アプローチを模索する病態のメカニズムを理解するのに役立ちます。
多くの中国のハーブは、血管疾患の臨床治療のため広く使用されています。ただし、その有効成分は通常不明のままに。したがって、有効成分の分離・同定は、新規治療薬の開発のため非常に重要です。第 1 報マルチ ワイヤ技術では、ハーブの有効成分をスクリーニングするための単純なアプローチを提供しています。小型船舶の第 1 報システムを使用してマウスの腸間膜動脈の収縮を調査するいくつかの研究を報告し、抗高血圧活動12,13,14天然化合物を識別しました。ここでは、詳細な説明第 1 報の方法のためのプロトコルし、ロータス (ハス春まき) 種子の胚から分離した neoliensinine の弛緩効果を評価14。
Protocol
Representative Results
Discussion
高血圧は、心血管などの重篤な合併症など腎臓疾患16広範な公衆衛生課題です。高血圧の病因を理解とより抗高血圧薬の探索は、この分野で緊急の課題になっています。血圧が生成され、循環の末梢血管抵抗によって維持されます。ポアズイユの法則によると比較的小さい動脈循環抵抗の大きい割合を生成し、血圧3,10の主要生産?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
テクニカル サポート、博士魏斉彼 (東呉大学、中国・蘇州) と博士ヤン寧喬 (陝西師範大学、西安、中国) に感謝します。この作品は中国の国家自然科学基金 (グラント 31272311、81373295、81473420)、優先度学術プログラム開発の江蘇高等教育機関 (グラント号のプロジェクト資金によって支えられました。ysxk-2016)。
Materials
| Multi wire myograph system | DMT | 610-M | |
| Stainless steel wire | DMT | 400447 | |
| Geuder dissection scissor | DMT | 400431 | |
| Dumont forceps | DMT | 300413 | |
| PowerLab/8SP | ADInstruments | ML785 | |
| Software | ADInstruments | LabChart 5 | |
| NaCl | SigmaAldrich | S5886 | |
| KCl | SigmaAldrich | P5405 | |
| CaCl2 | SigmaAldrich | C4901 | |
| MgCl2·6H2O | SigmaAldrich | M2393 | |
| D-Glucose | SigmaAldrich | G6152 | |
| HEPES | Sangon Biotech | A100511-0250 | |
| NaOH | SigmaAldrich | S8045 | |
| DMSO | SigmaAldrich | D2650 |
References
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