Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

Summary

선법 myograph 혈관 부드러운 근육 기능과 화면 새로운 약물을 조사 하는 데 사용 됩니다. 우리 보고 마우스 mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정 및 혈관 평활 근의 새로운 relaxants 심사에 대 한 자세한 프로토콜.

Abstract

와이어 myograph 기술은 depolarization 응답, GPCR 촉진제/저 해제 및 약. 에 혈관 부드러운 근육의 수축 평가 하는 데 사용 됩니다. 그것은 혈관 부드러운 근육의 생리 기능, 고혈압 등 혈관 질환의 병 인 및 부드러운 근육 이완 약물의 개발에 많은 연구에서 널리 이용 된다. 마우스는 널리 사용 되는 모델 동물 질병 모델, 유전자 변형된 종자의 큰 수영장. 자세히 마우스 mesenteric 동맥의 수축 isometric을 측정 하기 위해이 방법을 도입 했습니다. 마우스 mesenteric 저항 동맥의 1.4 m m 세그먼트 격리 되었고 그것의 루멘을 통해 두 개의 강철 와이어를 전달 하 여 myograph 챔버에 장착. 평형 및 정규화 단계 후 선박 세그먼트 수축 분석 결과 이전에 두 번 하이-K⁺ 솔루션으로 potentiated 이었다. 신약 개발에서이 방법의 응용 프로그램의 예를 들어, 마우스 mesenteric에 새로운 자연 물질, neoliensinine, 중국 약초, 연꽃 씨 (Nelumbo nucifera Gaertn.)의 배아에서에서 분리의 이완 효과 측정 동맥입니다. Myograph 챔버에 장착 된 선박 세그먼트 높은-K⁺ 솔루션으로 자극 했다. 힘 긴장에 안정적인 지속적인된 단계에 도달 하면 neoliensinine의 누적 복용량 챔버에 추가 되었습니다. 우리는 neoliensinine 했다 복용량 의존 이완 효과 부드러운 근육 수축에 따라서 고혈압에 대 한 잠재적인 활동 곰 제안 발견. 또한, 선박 세그먼트 장착 후 적어도 4 시간을 살아남을 수 있고 여러 번, 우리는 제안에 대 한 높은-K⁺ 솔루션에 의해 유도 된 수축 유지 와이어 myograph 시스템 마약 검사의 시간이 걸리는 과정에 사용할 수 있습니다.

Introduction

여기에 사용 된 작은 그릇 myograph 시스템 되었고 측정에 대 한 내부 직경 100에서 400 µ m. 고립 된 작은 배 (약 2 m m 긴)에 이르기까지 작은 저항 혈관의 수축 isometric 두 40 µ m 직경 철사에 의해 삽입 된 그 마이크로미터 측면과 변환기 쪽 턱에 순차적으로 탑재. 이 myograph 기술은 1972¹ 에서 처음 제안 되었고 Mulvany와 그의 동료^2,3,4,,56에 의해 주로 개발. 그것은 지금 안정 장비, 쉬운 성능 및 표준 정규화 절차^7,,89성숙한 기술. 우리 마우스 mesenteric 동맥에서 측정에 대 한 몇 가지 수정이 방법을 활용.

혈관 평활 근 거의 모든 혈관의 벽을 라인. 그들의 기본적인 함수는 다양 한 자극에 대 한 응답에서 수 축을 통해 힘을 생성 하는. 혈관 부드러운 근육의 정상적인 수축 혈액 압력 조절에 필수적 이며 영양 보충¹⁰. 다양 한 질병, 고혈압, 심장 마비와 뇌. 을 포함 하 여 혈압의 비정상적인 규제 여러 연구 결과 비정상적인 혈압은 항상 역 기능 혈관 평활 근 수축^7,11,,1213와 관련 된 제안 했다. Myograph 메서드는 vasoconstrictors, 저 해제 및 약물을 포함 하 여 다양 한 자극에 의해 유도 된 마우스 선박의 isometric 수축의 조사 수 있습니다. 수축의 성공적인 측정 혈압 유지 보수와 새로운 치료 접근을 탐구 하 고 혈관 부드러운 근육 관련 질환의 pathogenesis의 메커니즘을 이해 하는 데 도움이 됩니다.

많은 중국 약초; 혈관 질환의 임상 치료에 널리 사용 된 그러나, 그들의 성분에 일반적으로 알 수 없는 남아 있습니다. 따라서, 절연 및 효과적인 구성 요소 식별 새로운 약물의 개발에 대 한 매우 중요 하다. 멀티 와이어 myograph 기술 심사 허브에 활성 구성 요소에 대 한 간단한 접근을 제공 합니다. 우리 마우스 mesenteric 동맥 수축 조사를 작은 그릇 myograph 시스템을 사용 하 여 여러 연구 결과 보고 하 고 반대로 고혈압 활동^12,,1314자연 화합물 발견. 여기, 우리는 자세한 설명 로터스 씨 (Nelumbo nucifera Gaertn.)의 배아에서 분리 된 neoliensinine의 이완 효과 평가 하 고 myograph 메서드에 대 한 프로토콜 ¹⁴.

Protocol

동물 조작 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)의 모델 동물 연구 센터 남 경 대학에 의해 승인 되었다. 1. 솔루션 준비 HEPES Tyrode 솔루션 (H-T) 137.0 m NaCl, 2.7 m KCl m m, 1.8 m m CaCl2, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5.6 m m D-포도 당, 및 10 mM HEPES를 사용 하 여 준비 pH 7.3-7.4. 칼슘 없이 HEPES Tyrode 솔루션 준비 (캘리포니아2 +-H T 무료) 140.6 m NaCl m, 2.7 m KCl m, 1 mM…

Representative Results

우리는 멀티 와이어 myograph 시스템을 사용 하 여 마우스 mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정 하 고 로터스 씨 (Nelumbo nucifera Gaertn.)의 배아에서 정화 neoliensinine의 이완 효과 평가 14. 마우스 mesenteric 저항 동맥은 고립 된 결합 조직의 청소 하 고 1.4 m m 세그먼트를 잘라. 동맥 세그먼트에 캘리포니아2 +2 개의 강철 철사에 의해 삽입 된-무료 페 트리 …

Discussion

고혈압은 심혈 관 질환 등 심각한 합병증 및 신장 질환¹⁶광범위 한 보건 도전 이다. 고혈압의 병 인을 이해 하 고 탐구 더 고혈압 약물이이 분야에서 긴급 작업 되고있다. 혈압은 생성 하 고 순환의 주변 저항에 의해 유지. Poiseuille의 법률, 상대적으로 작은 동맥 순환 저항의 큰 비율을 생성 하 고 혈압^3,10의 지배적인 생산자로 봉사. 따라…

Materials

Multi wire myograph system	DMT	610-M
Stainless steel wire	DMT	400447
Geuder dissection scissor	DMT	400431
Dumont forceps	DMT	300413
PowerLab/8SP	ADInstruments	ML785
Software	ADInstruments	LabChart 5
NaCl	SigmaAldrich	S5886
KCl	SigmaAldrich	P5405
CaCl2	SigmaAldrich	C4901
MgCl2·6H2O	SigmaAldrich	M2393
D-Glucose	SigmaAldrich	G6152
HEPES	Sangon Biotech	A100511-0250
NaOH	SigmaAldrich	S8045
DMSO	SigmaAldrich	D2650