3 22 باستخدام الأجسام المضادة-PD-L1 تركز على خزعة وعينات عنق من مرضى سرطان الرئة من الخلايا غير الصغيرة
Summary
لتوسيع قدرة المختبرات في جميع أنحاء العالم لتقييم الأهلية للمرضى المصابين بسرطان الرئة للمعاملة مع بيمبروليزوماب، بطريقة موثوقة واستنساخه، قمنا بتطوير مقايسة يستخدم تركيز الضد 3 22 على نطاق واسع أوتوستاينير المناعي، لعينات خزعة وعلم الخلايا.
Abstract
وافقت الأحادي بيمبروليزوماب لعلاج المرضى المصابين بسرطان الرئة الخلية غير الصغيرة PD-L1-الإعراب عن المتقدم (NSCLC) السطر الأول والثاني. إجراء اختبار للتعبير PD-L1 مع 3 22 رفيق PD-L1 إيمونوهيستوتشيميستري (المدينة) التشخيص المقايسة، الذي يعطي نسبة ورم نقاط (TPS)، وقد صودق على أنسجة الورم. لقد طورنا أمثل تطوير مختبر تجربة (LDT) يستخدم الركاز 3 22 جسم (Ab) في أوتوستاينير المدينة متاحة على نطاق واسع لعينات خزعة وعلم الخلايا. تم تقييم مع 120 أبواب إقران كل ورم الأنسجة وعينات خزعة TPS PD-L1 ومع 70 إقران عينات خزعة وعنق (يغسل الشعب الهوائية، n = 40؛ الاراقة الجنبي، ن = 30). قص Ab 3 22 LDT المستندة إلى التركيز أظهرت ارتفاع معدل التوافق بين خزعة (~ 100%)، وعلم الخلايا العينات (~ 95 ٪) بالمقارنة مع “المدينة” PD-L1 التعبير المحدد باستخدام مقايسة رفيق 3 22 PD-L1 “المدينة” في كل النقاط النقاط (% إيه وان، إيه فايف زيرو %). وستوسع LDT الأمثل المعروضة هنا، باستخدام تركيز Ab 3 22 لتحديد التعبير PD-L1 في كلا ورم الأنسجة وعينات عنق، قدرة المختبرات في جميع أنحاء العالم لتقييم أهلية مرضى NSCLC للعلاج مع بيمبروليزوماب الأحادي بطريقة موثوقة واستنساخه.
Introduction
وقد أظهرت التجارب السريرية الأخيرة كفاءة بيمبروليزوماب، أنسنة [مونوكلونل] IgG4 كابا ايستب جسم الذي يمنع التفاعل بين موت الخلايا المبرمج 1 (PD-1)، وأن يغاندس، PD-L1 و PD-L2، في علاج المرضى الذين يعانون من متقدمة NSCLC1،2،،من34.
حاليا، هو الموافقة على بيمبروليزوماب المعاملة للإعراب عن PD-L1 NSCLC في كلا المرضى العلاج-السذاجة مع تعبير PD-L1 TPS إيه فايف زيرو % ولا من مستقبلات عامل نمو البشرة (EGFR) أو الأورام اللمفاوية المتحولة كيناز (ALK) الورم الجينوم الانحرافات3 وعن سبق تعامل المرضى مع TPS PD-L1 إيه وان %1.
تعبير البروتين PD-L1 الكشف عنها بواسطة المدينة قد استخدمت على نطاق واسع من وصفها فحص العلامات البيولوجية تنبؤية للعلاجات المضادة-PD-1/PD-L1. في التجارب السريرية بيمبروليزوماب، مصممة TPS PD-L1 الحصول عليها مع الفورمالين–الثابتة جزءا لا يتجزأ من البارافين (FFPE) عينات الأنسجة باستخدام مقايسة رفيق PD-L1 “المدينة” 22 35. هذا التحليل قد أقرها “لنا الغذاء” والدواء (FDA)، وقد تم وضع علامة CE في أوروبا لتحديد الورم TPS PD-L15.
خيارات عالمية إضافية عبر المؤسسات لتقييمات موثوقة وعالية الجودة من TPS PD-L1 مع LDTs الذي استخدم تركيز الضد 22 3 ضرورية لدعم اتخاذ القرارات السريرية فيما يتعلق بأهلية المريض بيمبروليزوماب العلاج. عدد كبير من مختبرات علم الأمراض لا يحصلون على مقايسة PD-L1 “المدينة” 3 22 التشخيص رفيق. ولذلك، ضروري وضع LDTs موثوقة ومتسقة متوافقة مع منصات أوتوستاينير إضافية، ومتاحة على نطاق واسع في المدينة.
وعلاوة على ذلك، هناك حاجة إلى إنشاء LDTs باستخدام عينات الخلايا التي هي نوع العينة الوحيدة المتاحة كثيرا من مرضى NSCLC. التحقق من صحة المقايسة رفيق PD-L1 “المدينة” 3 22 ريسيكشنز وكور إبرة الخزعات، ويقوم إلا إذا كان القصبات غلة 100 ورم الخلايا. على الرغم من أن كثيرا ما يتم الحصول على أنواع العينات المذكورة أعلاه، عينات الخلايا التي تم جمعها بسهولة أكبر وهي نوع العينة المتاحة الأكثر شيوعاً في بعض المؤسسات6،7. ومع ذلك، هناك لا فحص التشخيص تم التحقق من صحتها المتاحة حاليا لتقييم التعبير PD-L1 في عينات عنق؛ LDTs موثوقة متوافقة مع عينات عنق ستيسر اختبار PD-L1 عالية الجودة.
وعلاوة على ذلك، عند وضع المصادقة LDT السريرية، ينبغي أن يجري في المدينة بطريقة مشابهة ل اختبار التجاري المصادق عليه سريرياً الموافق8. على سبيل المثال، ينبغي التحقق من عدة خطوات حاسمة للحصول على إشارة نفسه في مقاطع المسلسل مثل معايرة الأجسام المضادة وتأخير المعالجة المسبقة ووقت الحضانة و نظم التضخيم9.
ونحن مؤخرا بوضع LDT أمثل الذي يستخدم تركيز الضد 3 22 لتقييم التعبير PD-L1 في ورم الخزعات وعنق عينات10،11. يمكننا العثور على الفهرس أبجدي عالية مع LDT مقابل “المعيار الذهبي” المدينة PD-L1 3 22 مقايسة10،11. سوف تدعم هذا البروتوكول سريرياً المصادق عليها موثوقة وعالية الجودة PD-L1 اختبار مختلف المناطق على الصعيد العالمي.
Protocol
Representative Results
Discussion
ونحن قد التحقق من صحة LDT أمثل استخدام تركيز الضد PD-L1 3 22, بمقارنته مع ال10،اختبار التجاري المصادق عليه سريرياً المقابلة11. 3 22 تتركز LDT المستندة إلى جسم أظهرت ارتفاع معدل التوافق بين خزعة (~ 100 ٪) وعينات عنق (~ 95 ٪) عند مقارنتها بتعبير “المدينة” PD-L1 تحدد باستخدام مقاي?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
أشرفت على هذه الدراسة من شركة ميرك & Co., Inc.، كينيلورث، نيوجيرسي، الولايات المتحدة الأمريكية. الممولين أي دور في تصميم الدراسة، وجمع البيانات وتحليل، وقرار نشر أو إعداد المخطوطة.
Materials
| NovaPrep HQ1 | Novacyt | NA | Preservative solution for cytology specimens |
| Novaprep® HQ+ B | Novacyt | NA | Mucolytic solution |
| Tissue-Tek VIP 6 | Sakura | 6042 VIP 6 | |
| Tissue-Tek TEC 5 Tissue Embedding Console System | Sakura | 5229 TEC 5 | |
| microscope glass slide SuperFrost Plus | Thermo Fisher Scientific | 4951PLUS4 | |
| DL-Dithiothreitol powder | Sigma-Aldrich | D3801 | |
| Heidolph Multi Reax Vortex Shaker | Thermo Fisher Scientific | 13-889-410 | |
| Shandon Cytoblock | Thermo Fisher Scientific | 7401150 | |
| 22C3 anti-PD-L1 concentrate antibody | Agilent Dako | #M365329 | |
| PD-L1 IHC 22C3 pharmDx | Agilent Dako | SK006 | |
| Autostainer Link 48 | Agilent Dako | AS480 | |
| BenchMark ULTRA autostainer | Ventana | #750-600 | |
| OptiView HQ Universal Linker | Ventana | #760-700 | |
| OptiView HRP Multimer | Ventana | #760-700 | |
| OptiView Amplification H2O2 | Ventana | #760-099 | |
| OptiView Amplifier | Ventana | #760-099 | |
| OptiView Amplification Multimer | Ventana | #760-100 | |
| OptiView DAB | Ventana | #760-700 | |
| OptiView Copper | Ventana | #760-700 | |
| Hematoxylin II | Ventana | #790-2208 | |
| Bluing Reagent | Ventana | #760-2037 | |
| Cell Conditioning 1 (CC1) | Ventana | #950-124 | |
| Tissue-Tek Film Coverslipper | Sakura | 4742 |
References
- Garon, E. B., et al. Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer. The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).
- Herbst, R. S., et al. Pembrolizumab versus docetaxel for previously treated, PD-L1-positive, advanced non-small-cell lung cancer (KEYNOTE-010): a randomised controlled trial. The Lancet. 387 (10027), 1540-1550 (2016).
- Reck, M., et al. Pembrolizumab versus Chemotherapy for PD-L1-Positive Non-Small-Cell Lung Cancer. The New England Journal of Medicine. 375 (19), 1823-1833 (2016).
- Langer, C. J., et al. Carboplatin and pemetrexed with or without pembrolizumab for advanced, non-squamous non-small-cell lung cancer: a randomised, phase 2 cohort of the open-label KEYNOTE-021 study. The Lancet Oncology. 17 (11), 1497-1508 (2016).
- Buttner, R., et al. Programmed Death-Ligand 1 Immunohistochemistry Testing: A Review of Analytical Assays and Clinical Implementation in Non-Small-Cell Lung Cancer. Journal of Clinical Oncology. 35 (34), 3867-3876 (2017).
- Folch, E., Costa, D. B., Wright, J., VanderLaan, P. A. Lung cancer diagnosis and staging in the minimally invasive age with increasing demands for tissue analysis. Translational Lung Cancer Research. 4 (4), 392-403 (2015).
- Padmanabhan, V., et al. Improving Adequacy of Small Biopsy and Fine-Needle Aspiration Specimens for Molecular Testing by Next-Generation Sequencing in Patients With Lung Cancer: A Quality Improvement Study at Dartmouth-Hitchcock Medical Center. Archives of Pathology & Laboratory Medicine. 141 (3), 402-409 (2017).
- Tsao, M. S., et al. . IASLC ATLAS of PD-L1 Immunohistochemistry Testing in Lung Cancer. , (2017).
- Thunnissen, E., de Langen, A. J., Smit, E. F. PD-L1 IHC in NSCLC with a global and methodological perspective. Lung Cancer. , 102-105 (2017).
- Ilie, M., et al. Use of the 22C3 anti-PD-L1 antibody to determine PD-L1 expression in multiple automated immunohistochemistry platforms. PLoS One. 12 (8), e0183023 (2017).
- Ilie, M., et al. Use of the 22C3 anti-programmed death ligand 1 antibody to determine programmed death ligand 1 expression in cytology samples obtained from non-small cell lung cancer patients. Cancer Cytopathology. 126 (4), 264-274 (2018).
- Skov, B. G., Skov, T. Paired Comparison of PD-L1 Expression on Cytologic and Histologic Specimens From Malignancies in the Lung Assessed With PD-L1 IHC 28-8pharmDx and PD-L1 IHC 22C3pharmDx. Applied Immunohistochemistry & Molecular Morphology. 25 (7), 453-459 (2017).
- Russell-Goldman, E., Kravets, S., Dahlberg, S. E., Sholl, L. M., Vivero, M. Cytologic-histologic correlation of programmed death-ligand 1 immunohistochemistry in lung carcinomas. Cancer Cytopathology. 126 (4), 253-263 (2018).
- Heymann, J. J., et al. PD-L1 expression in non-small cell lung carcinoma: Comparison among cytology, small biopsy, and surgical resection specimens. Cancer Cytopathology. 125 (12), 896-907 (2017).
- Stoy, S. P., Rosen, L., Mueller, J., Murgu, S. Programmed death-ligand 1 testing of lung cancer cytology specimens obtained with bronchoscopy. Cancer Cytopathology. 126 (2), 122-128 (2018).
- Ilie, M., Hofman, P. Reproducibility of PD-L1 assessment in non-small cell lung cancer-know your limits but never stop trying to exceed them. Translational Lung Cancer Research. 6 (Suppl 1), S51-S54 (2017).
