באמצעות 22C 3 נוגדן Anti-PD-L1 להתרכז ביופסיה ודוגמאות ציטולוגיה של חולי סרטן ריאות שאינם קטנים התא
Summary
כדי להרחיב את היכולת של מעבדות ברחבי העולם כדי להעריך את הזכאות של חולים עם סרטן ריאות לטיפול pembrolizumab, באופן אמין לשחזור, פיתחנו וזמינותו של העושה את תרכיז נוגדן 22C 3-נרחב זמין immunohistochemical autostainer, עבור דגימות ביופסיה והן ציטולוגיה.
Abstract
יחידני Pembrolizumab אושרה לטיפול, השנייה-שורה ראשונה של חולי PD-L1-הבעת מתקדמים סרטן ריאות תאים שאינם קטנים (NSCLC). בדיקות עבור הביטוי PD-L1 PD-L1 אימונוהיסטוכימיה (IHC) 22C 3 לוויה אבחון וזמינותו, אשר נותן שיעור הגידול ניקוד (TPS), אומתה על גידול רקמות. פיתחנו ממוטבת מפותחות מעבדה מבחן (LDT) המשתמשת את תרכיז נוגדן 22C 3 (אלב) על autostainer IHC נרחב זמין עבור דגימות ביופסיה ו ציטולוגיה. תוכנית-המיתאר PD-L1 הוערך עם דגימות ביופסיה ומקטעים לזווג רקמת הגידול כל 120, עם 70 לזווג דגימות ביופסיה ו ציטולוגיה (שוטף הסמפונות, n = 40; השתפכות, n = 30). Ab 22C 3 שמבוסס להתרכז LDT הראה שיעור קונקורדנציה גבוה בין ביופסיה (~ 100%) ציטולוגיה דגימות (~ 95%) בהשוואה ל- PD-L1 IHC ביטוי באמצעות וזמינותו לוויה 22C 3 IHC PD-L1-TPS שני חותכים נקודות (≥1%, ≥50%). LDT ממוטבת המובאים כאן, באמצעות את תרכיז אלב 22C 3 כדי לקבוע את הביטוי PD-L1 ברקמת הגידול שני, דגימות ציטולוגיה, ירחיב את היכולת של מעבדות ברחבי העולם כדי להעריך את הזכאות של חולי NSCLC לטיפול pembrolizumab יחידני באופן אמין לשחזור.
Introduction
האחרונות ניסויים קליניים הראו את היעילות של pembrolizumab, monoclonal IgG4 קאפה isotype מואנשים שחוסמת את האינטראקציה בין מות תאים מתוכנת 1 (PD-1), שלה ליגנדים, PD-L1 ו- PD-L2, לטיפול בחולים עם מתקדם NSCLC1,2,3,4.
כיום, pembrolizumab אושרה לטיפול של NSCLC PD-L1-הבעת ‘ בחולים הן טיפול-תמים עם ביטוי PD-L1 תוכנית-המיתאר של ≥50%, אין גורם הגדילה באפידרמיס קולטן (EGFR) או לימפומה אנפלסטית קינאז (ALK) הגידול גנומית סטיות3 בעבר מטופלים חולים עם תוכנית-מיתאר PD-L1 של ≥1%1.
PD-L1 חלבון הביטוי שזוהה על-ידי IHC כבר בשימוש נרחב עבור טיפולים אנטי-PD-1/PD-L1 כמו assay סמן ניבוי. בניסויים קליניים pembrolizumab, המיתאר PD-L1 שהושג עם פורמלין-קבוע-מוטבע פרפין (FFPE) דגימות רקמה נקבע באמצעות PD-L1 IHC 22C 3 assay לוויה, או5. Assay זו אושרה על ידי מינהל המזון והתרופות האמריקני (FDA) ומאז CE המסומן באירופה מצפני הגידול PD-L1 TPS5.
אפשרויות נוספות גלובלית על פני מוסדות עבור הערכות איכותי ואמין של המיתאר PD-L1 עם LDTs להשתמש בו את תרכיז נוגדן 22C 3 חיוניים לתמיכה קלינית ההחלטות הנוגעות זכאות החולה pembrolizumab טיפול. מספר רב של מעבדות הפתולוגיה אין גישה PD-L1 IHC 22C 3 אבחון לוויה וזמינותו. לכן, הפיתוח של LDTs אמינה ועקבית תואם פלטפורמות autostainer IHC נוספים, הנפוצה היא חיונית.
יתר על כן, יש צורך בהקמת LDTs באמצעות דגימות ציטולוגיה המהווים סוג הדגימה היחיד הזמין לעתים קרובות מחולים NSCLC. PD-L1 IHC 22C 3 מסייע וזמינותו מאומת כריתות, ביופסיות מחט הליבה של bronchoscopies רק אם ברונכוסקופיה מניבה 100 תאים סרטניים. למרות סוגי דגימה לעיל מתקבלים לעיתים קרובות, ציטולוגיה דגימות נאספים ביתר קלות, סוג הדגימה הנפוץ ביותר הזמינים ב6,כמה מוסדות7. עם זאת, יש כיום אין assay אבחון המאומת זמין עבור הערכת הביטוי PD-L1 בדגימות ציטולוגיה; תואם עם דגימות ציטולוגיה אמין LDTs להמשיך לקדם את בדיקת PD-L1 באיכות גבוהה.
יתר על כן, בעת יצירת האימות קליני של LDT, IHC צריכה להתבצע באופן דומה מבחן מסחרי המאומת קלינית המתאימה8. למשל, מספר שלבים קריטיים צריך לאמת כדי לקבל את האות באותו בסעיפים טורית כגון נוגדנים טיטור, עיכובים pretreatment, זמן הדגירה, מערכות הגברה9.
לאחרונה פיתחנו של LDT ממוטבת העושה את תרכיז נוגדן 22C 3 להעריך את הביטוי PD-L1 על הגידול ביופסיות ו ציטולוגיה דגימות10,11. . מצאנו את הקונקורדנציה גבוהה עם LDT לעומת “תקן הזהב” PD-L1 IHC 22C 3 assay10,11. פרוטוקול המאומת קלינית זה יתמוך אמין, איכותי PD-L1 בדיקות על-פני אזורים ברחבי העולם.
Protocol
Representative Results
Discussion
הבדיקה והאימות של LDT ממוטב באמצעות. תתרכזי נוגדן PD-L1 22C 3, על-ידי השוואתה עם ה10,המקביל בדיקה קלינית המאומת מסחרי11. 22C 3 מרוכז נוגדן מבוססי LDT הראה שיעור קונקורדנציה גבוה בין ביופסיה (~ 100%) דגימות ציטולוגיה (~ 95%) בהשוואה הביטוי PD-L1 IHC נקבע באמצעות וזמינותו PD-L1 IHC 22C 3 ב…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
מחקר זה מומן על ידי מרק & ושות’, בע מ, Kenilworth, ניו ג’רזי, ארה ב. התורמים שחיים אין תפקיד ב תכנון המחקר, איסוף נתונים, ניתוח, ההחלטה לפרסם או אופן ההכנה של כתב היד.
Materials
| NovaPrep HQ1 | Novacyt | NA | Preservative solution for cytology specimens |
| Novaprep® HQ+ B | Novacyt | NA | Mucolytic solution |
| Tissue-Tek VIP 6 | Sakura | 6042 VIP 6 | |
| Tissue-Tek TEC 5 Tissue Embedding Console System | Sakura | 5229 TEC 5 | |
| microscope glass slide SuperFrost Plus | Thermo Fisher Scientific | 4951PLUS4 | |
| DL-Dithiothreitol powder | Sigma-Aldrich | D3801 | |
| Heidolph Multi Reax Vortex Shaker | Thermo Fisher Scientific | 13-889-410 | |
| Shandon Cytoblock | Thermo Fisher Scientific | 7401150 | |
| 22C3 anti-PD-L1 concentrate antibody | Agilent Dako | #M365329 | |
| PD-L1 IHC 22C3 pharmDx | Agilent Dako | SK006 | |
| Autostainer Link 48 | Agilent Dako | AS480 | |
| BenchMark ULTRA autostainer | Ventana | #750-600 | |
| OptiView HQ Universal Linker | Ventana | #760-700 | |
| OptiView HRP Multimer | Ventana | #760-700 | |
| OptiView Amplification H2O2 | Ventana | #760-099 | |
| OptiView Amplifier | Ventana | #760-099 | |
| OptiView Amplification Multimer | Ventana | #760-100 | |
| OptiView DAB | Ventana | #760-700 | |
| OptiView Copper | Ventana | #760-700 | |
| Hematoxylin II | Ventana | #790-2208 | |
| Bluing Reagent | Ventana | #760-2037 | |
| Cell Conditioning 1 (CC1) | Ventana | #950-124 | |
| Tissue-Tek Film Coverslipper | Sakura | 4742 |
References
- Garon, E. B., et al. Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer. The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).
- Herbst, R. S., et al. Pembrolizumab versus docetaxel for previously treated, PD-L1-positive, advanced non-small-cell lung cancer (KEYNOTE-010): a randomised controlled trial. The Lancet. 387 (10027), 1540-1550 (2016).
- Reck, M., et al. Pembrolizumab versus Chemotherapy for PD-L1-Positive Non-Small-Cell Lung Cancer. The New England Journal of Medicine. 375 (19), 1823-1833 (2016).
- Langer, C. J., et al. Carboplatin and pemetrexed with or without pembrolizumab for advanced, non-squamous non-small-cell lung cancer: a randomised, phase 2 cohort of the open-label KEYNOTE-021 study. The Lancet Oncology. 17 (11), 1497-1508 (2016).
- Buttner, R., et al. Programmed Death-Ligand 1 Immunohistochemistry Testing: A Review of Analytical Assays and Clinical Implementation in Non-Small-Cell Lung Cancer. Journal of Clinical Oncology. 35 (34), 3867-3876 (2017).
- Folch, E., Costa, D. B., Wright, J., VanderLaan, P. A. Lung cancer diagnosis and staging in the minimally invasive age with increasing demands for tissue analysis. Translational Lung Cancer Research. 4 (4), 392-403 (2015).
- Padmanabhan, V., et al. Improving Adequacy of Small Biopsy and Fine-Needle Aspiration Specimens for Molecular Testing by Next-Generation Sequencing in Patients With Lung Cancer: A Quality Improvement Study at Dartmouth-Hitchcock Medical Center. Archives of Pathology & Laboratory Medicine. 141 (3), 402-409 (2017).
- Tsao, M. S., et al. . IASLC ATLAS of PD-L1 Immunohistochemistry Testing in Lung Cancer. , (2017).
- Thunnissen, E., de Langen, A. J., Smit, E. F. PD-L1 IHC in NSCLC with a global and methodological perspective. Lung Cancer. , 102-105 (2017).
- Ilie, M., et al. Use of the 22C3 anti-PD-L1 antibody to determine PD-L1 expression in multiple automated immunohistochemistry platforms. PLoS One. 12 (8), e0183023 (2017).
- Ilie, M., et al. Use of the 22C3 anti-programmed death ligand 1 antibody to determine programmed death ligand 1 expression in cytology samples obtained from non-small cell lung cancer patients. Cancer Cytopathology. 126 (4), 264-274 (2018).
- Skov, B. G., Skov, T. Paired Comparison of PD-L1 Expression on Cytologic and Histologic Specimens From Malignancies in the Lung Assessed With PD-L1 IHC 28-8pharmDx and PD-L1 IHC 22C3pharmDx. Applied Immunohistochemistry & Molecular Morphology. 25 (7), 453-459 (2017).
- Russell-Goldman, E., Kravets, S., Dahlberg, S. E., Sholl, L. M., Vivero, M. Cytologic-histologic correlation of programmed death-ligand 1 immunohistochemistry in lung carcinomas. Cancer Cytopathology. 126 (4), 253-263 (2018).
- Heymann, J. J., et al. PD-L1 expression in non-small cell lung carcinoma: Comparison among cytology, small biopsy, and surgical resection specimens. Cancer Cytopathology. 125 (12), 896-907 (2017).
- Stoy, S. P., Rosen, L., Mueller, J., Murgu, S. Programmed death-ligand 1 testing of lung cancer cytology specimens obtained with bronchoscopy. Cancer Cytopathology. 126 (2), 122-128 (2018).
- Ilie, M., Hofman, P. Reproducibility of PD-L1 assessment in non-small cell lung cancer-know your limits but never stop trying to exceed them. Translational Lung Cancer Research. 6 (Suppl 1), S51-S54 (2017).
