Utilizzando 22 3 dell'anticorpo Anti-PD-L1 concentrarsi sulla biopsia e campioni di citologia dai malati di cancro del polmone Non a piccole cellule
Summary
Per espandere la capacità dei laboratori in tutto il mondo per valutare l’ammissibilità dei pazienti con cancro del polmone per il trattamento con pembrolizumab, in modo affidabile e riproducibile, abbiamo sviluppato un test che utilizza il 22 3 anticorpo concentrato su un ampiamente disponibile immunohistochemical autostainer, per gli esemplari di biopsia e la citologia.
Abstract
Pembrolizumab in monoterapia è stato approvato per il trattamento di prima e seconda linea di pazienti con PD-L1-esprimendo avanzata di carcinoma polmonare non a piccole cellule (NSCLC). Test per PD-L1 espressione con l’analisi diagnostica di PD-L1 immunohistochemistry (IHC) 22 3 compagno, che dà una percentuale di tumore Punteggio ottenuto (TPS), è stato convalidato il tessuto del tumore. Abbiamo sviluppato un test ottimizzato laboratorio-sviluppato (LDT) che utilizza il concentrato 22 3 anticorpo (Ab) su un autostainer IHC ampiamente disponibile per gli esemplari di biopsia e citologia. Il TPS PD-L1 è stato valutato con 120 sezioni di accoppiati insieme-tumore del tessuto e i campioni di biopsia e con 70 accoppiato i campioni di biopsia e citologia (lavaggi bronchiali, n = 40; le effusioni pleuriche, n = 30). Il 22 3 Ab che concentrato a base di LDT ha mostrato un alto tasso di concordanza tra biopsia (~ 100%) e citologia (~ 95%) esemplari quando confrontata con IHC PD-L1 espressione valutata mediante il saggio di 22 3 compagno IHC PD-L1 a entrambi TPS taglio punti (≥ 1%, ≥ 50%). LDT ottimizzato presentato qui, usando il concentrato di Ab 22 3 per determinare l’espressione di PD-L1 in entrambi il tessuto del tumore e in campioni citologici, si espanderà la capacità dei laboratori in tutto il mondo per valutare l’ammissibilità dei pazienti con NSCLC trattati con pembrolizumab in monoterapia in modo affidabile e riproducibile.
Introduction
Recenti studi clinici hanno dimostrato l’efficacia di pembrolizumab, un anticorpo di isotipo monoclonale umanizzato di kappa IgG4 che blocca l’interazione tra la morte programmata delle cellule 1 (PD-1) ed i suoi ligandi, PD-L1 e L2-PD, nel trattamento di pazienti con avanzato NSCLC1,2,3,4.
Attualmente, pembrolizumab è approvato per il trattamento di NSCLC PD-L1-esprimendo in entrambi i pazienti naïve al trattamento con un’espressione di PD-L1 TPS di ≥ 50% e nessun recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR) o aberrazioni di linfoma anaplastic della chinasi (ALK) tumore genomico3 e per precedentemente trattati pazienti con un TPS PD-L1 di ≥ 1%1.
PD-L1 espressione proteica rilevata da IHC è stato ampiamente usato come analisi predittiva biomarcatore per terapie anti-PD-1/PD-L1. Negli studi clinici di pembrolizumab, il PD-L1 TPS ottenuti con formalina di campioni di tessuto paraffina (FFPE) è stato determinato utilizzando il PD-L1 IHC 3 22 compagno test5. Questo test è stato approvato da la US Food and Drug Administration (FDA) ed è stato marcato CE in Europa per la determinazione del tumore PD-L1 TPS5.
Ulteriori opzioni globali attraverso istituzioni per valutazioni affidabili e di alta qualità del TPS PD-L1 con LDTs che usare il concentrato di 22 3 anticorpo sono essenziali per sostenere le decisioni cliniche in materia di ammissibilità paziente per pembrolizumab trattamento. Un gran numero di laboratori di patologia non hanno accesso per il dosaggio di PD-L1 IHC 22 3 diagnostico compagno. Di conseguenza, lo sviluppo di affidabili e coerenti LDTs compatibile con piattaforme IHC autostainer ulteriori, ampiamente disponibili è essenziale.
Inoltre, c’è la necessità di stabilire LDTs usando campioni di citologia che sono il tipo di unico esemplare frequentemente disponibile da pazienti con NSCLC. Il dosaggio di compagno PD-L1 IHC 3 22 è convalidato per le resezioni, biopsie dell’ago e broncoscopie solo se la broncoscopia produce 100 cellule del tumore. Anche se spesso si ottengono i suddetti tipi di campione, campioni di citologia sono più facilmente raccolti e sono il tipo di campione più comunemente disponibile in alcune istituzioni6,7. Tuttavia, non c’è attualmente nessun test diagnostico convalidato disponibile per la valutazione dell’espressione PD-L1 in campioni di citologia; affidabile LDTs compatibile con campioni di citologia faciliterebbe ulteriori test di alta qualità PD-L1.
Inoltre, quando si stabilisce la validazione clinica di un LDT, l’IHC deve essere eseguita in modo simile ai test commerciale clinicamente validato corrispondente8. Per esempio, diversi passaggi critici devono essere verificate per ottenere lo stesso segnale in sezioni seriali quali titolazione di anticorpi, pretrattamento ritardi, tempi di incubazione e di sistemi di amplificazione9.
Recentemente abbiamo sviluppato un LDT ottimizzato che utilizza il concentrato 22 3 anticorpo per valutare l’espressione di PD-L1 su biopsie del tumore e citologia campioni10,11. Abbiamo trovato un’alta concordanza con la LDT contro il “gold standard” PD-L1 IHC 22 3 analisi10,11. Questo protocollo clinicamente validato sosterrà affidabile, di alta qualità PD-L1 test tra le regioni a livello mondiale.
Protocol
Representative Results
Discussion
Abbiamo convalidato un LDT ottimizzata utilizzando il concentrato di anticorpo del PD-L1 22 3, attraverso il confronto con il corrispondente test commerciale clinicamente validato10,11. 3 22 concentrato anticorpo-basato LDT ha mostrato un alto tasso di concordanza tra biopsia (~ 100%) e campioni di citologia (~ 95%) quando confrontata con l’espressione di PD-L1 IHC valutata mediante il saggio di PD-L1 IHC 3 22 a ≥ 1% TPS sia il ≥ 50% TPS taglio punti. Come re…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo studio è stato sponsorizzato da Merck & Co., Inc., Kenilworth, NJ, Stati Uniti d’America. I finanziatori non ha svolto ruolo nel disegno di studio, raccolta dati e analisi, decisione di pubblicare o preparazione del manoscritto.
Materials
| NovaPrep HQ1 | Novacyt | NA | Preservative solution for cytology specimens |
| Novaprep® HQ+ B | Novacyt | NA | Mucolytic solution |
| Tissue-Tek VIP 6 | Sakura | 6042 VIP 6 | |
| Tissue-Tek TEC 5 Tissue Embedding Console System | Sakura | 5229 TEC 5 | |
| microscope glass slide SuperFrost Plus | Thermo Fisher Scientific | 4951PLUS4 | |
| DL-Dithiothreitol powder | Sigma-Aldrich | D3801 | |
| Heidolph Multi Reax Vortex Shaker | Thermo Fisher Scientific | 13-889-410 | |
| Shandon Cytoblock | Thermo Fisher Scientific | 7401150 | |
| 22C3 anti-PD-L1 concentrate antibody | Agilent Dako | #M365329 | |
| PD-L1 IHC 22C3 pharmDx | Agilent Dako | SK006 | |
| Autostainer Link 48 | Agilent Dako | AS480 | |
| BenchMark ULTRA autostainer | Ventana | #750-600 | |
| OptiView HQ Universal Linker | Ventana | #760-700 | |
| OptiView HRP Multimer | Ventana | #760-700 | |
| OptiView Amplification H2O2 | Ventana | #760-099 | |
| OptiView Amplifier | Ventana | #760-099 | |
| OptiView Amplification Multimer | Ventana | #760-100 | |
| OptiView DAB | Ventana | #760-700 | |
| OptiView Copper | Ventana | #760-700 | |
| Hematoxylin II | Ventana | #790-2208 | |
| Bluing Reagent | Ventana | #760-2037 | |
| Cell Conditioning 1 (CC1) | Ventana | #950-124 | |
| Tissue-Tek Film Coverslipper | Sakura | 4742 |
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