Isolatie, karakterisering en MicroRNA gebaseerde genetische modificatie van stamcellen van menselijke tandheelkundige follikel
Summary
Dit protocol beschrijft de voorbijgaande genetische manipulatie van tandheelkundige stamcellen gewonnen uit de menselijke tandheelkundige follikel. De toegepaste niet-virale wijziging strategie kan een basis voor de verbetering van de cel van de stam van de therapeutische producten geworden.
Abstract
Tot op heden, zijn de verschillende types van de stamcel op verschillende ontwikkelingsstadia in de focus voor de behandeling van degeneratieve ziekten. Echter verminderde bepaalde aspecten, zoals de eerste massale celdood en lage therapeutische effecten, hun brede klinische vertaling. Genetische manipulatie van stamcellen voorafgaand aan de transplantatie naar voren gekomen als een veelbelovende methode voor het optimaliseren van de cel van de stam van de therapeutische effecten. Gen van de veilige en efficiënte levering systemen zijn echter nog steeds ontbreekt. Daarom kan de ontwikkeling van geschikte methoden biedt een aanpak om op te lossen van de huidige uitdagingen in stamcel gebaseerde therapieën.
Dit protocol beschrijft de extractie en de karakterisatie van menselijke tandheelkundige follikelstimulerend stamcellen (hDFSCs) en hun niet-virale genetische modificatie. De postnatale tandheelkundige follikel onthuld als een veelbelovende en gemakkelijk toegankelijke bron voor het oogsten van adulte multipotente stamcellen hoge proliferatie potentieel bezitten. De procedure beschreven isolatie presenteert een eenvoudige en betrouwbare methode om te oogsten hDFSCs van beïnvloed wijsheid tanden. Dit protocol bevat ook methoden om te definiëren van de kenmerken van de cel van de stam van geïsoleerde cellen. Voor genetische manipulatie van hDFSCs, wordt een geoptimaliseerde kationische lipide gebaseerde transfectie strategie gepresenteerd waardoor hoogefficiënte microRNA Inleiding zonder cytotoxische effecten. MicroRNAs zijn geschikte kandidaten voor voorbijgaande cel manipulatie, omdat deze kleine translationeel toezichthouders controle de lotgevallen en het gedrag van stamcellen zonder het gevaar van stabiele genoom integratie. Dit protocol vormt aldus, een veilige en efficiënte procedure voor de engineering van hDFSCs die belangrijk zijn voor het optimaliseren van hun therapeutische werking kan worden.
Introduction
De menselijke tandheelkundige follikel is een losse ectomesenchymally afkomstige bindweefsel rondom de ontwikkelende tand1,2. Naast zijn functie om osteoclastogenesis en osteogenesis voor de tand uitbarsting proces te coördineren, herbergt dit weefsel cellen van de stam en voorlopercellen vooral voor de ontwikkeling van het parodontium3,4,5. De tandheelkundige follikel is derhalve als een alternatieve financieringsbron te oogsten menselijke adulte stamcellen6,7.
Verschillende studies aangetoond dat stamcellen van menselijke tandheelkundige follikel (hDFSCs) geschikt zijn voor differentiatie in de parodontale afkomst, met inbegrip van botcellen, ligament fibroblasten en cementoblasts8,9,10 . Bovendien, deze cellen werden getoond aan alle kenmerken van mesenchymale stromale cellen (MSCs) met inbegrip van zichzelf vernieuwende capaciteit, de naleving van de plastic, expressie van specifieke oppervlakte markers (b.v., CD73, CD90, CD105) zo goed als osteogenic, adipogenic en chondrogenic differentiatie potentiële11,12,13. Andere studies bleek ook een potentieel van de neurale differentiatie van hDFSCs2,14,15,16,17,18.
Als gevolg van hun veelbelovende eigenschappen en gemakkelijke toegang werd hDFSCs onlangs relevant voor weefsel engineering19,20,21. De eerste studies geconcentreerd op het potentieel van DFSCs voor de regeneratie van bot, parodontale en tand wortels19,22,23,24,25,26, 27,28,29,30. Sinds de kennis van de neurogene vermogen van hDFSCs, is hun toepassing als mogelijke behandeling voor neurodegeneratieve ziekten onderzochte31,32,33. HDFSCs hebben ook opgedaan belang met betrekking tot het herstel van andere weefsels (bijvoorbeeld hoornvlies epitheel)34,35. De therapeutische mogelijkheden van hDFSC is niet alleen gebaseerd op hun directe differentiatie mogelijkheden maar ook op hun paracrine activiteit. Onlangs, hDFSCs is aangetoond dat het afscheiden van een schat aan bioactieve factoren, zoals matrix metalloproteinasen (MMP), insuline-achtige groei factor (IGF), vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF), fundamentele fibroblast groeifactor (bFGF) en hepatocyte groei factor (HGF), die een cruciale rol voor de angiogenese, immunomodulatie, extra cellulaire matrix remodelleren en herstellend processen36.
Brede klinische vertaling van stamcel therapie is echter nog steeds aangetast door verschillende uitdagingen, zoals massale eerste celdood en37,38van de effecten van de lage positieve cel van de stam. Genetische manipulatie biedt een veelbelovende strategie om deze problemen aan te pakken en daarom kan sterk verbeteren van de therapeutische werking van stamcellen38,39,40. Voor tijdelijke cel manipulatie zijn microRNAs (miRs) geschikte kandidaten, omdat deze kleine translationeel toezichthouders controle de lotgevallen en het gedrag van stamcellen zonder het gevaar van stabiele genoom integratie41,42, 43. tot op heden verschillende heilzame miRs geconstateerd bevordering van stam celproliferatie, overleving, homing, paracrine activiteit, evenals hun differentiatie in verscheidene geslachten44. Bijvoorbeeld, ontworpen miR-133a MSCs toonde een hogere overleving en de engraftment in infarcted rat hart wat resulteert in een verbeterde cardiale functie wanneer vergeleken bij ongewijzigde van de MSCs45. MiR-146a overexpressing MSCs werden ook getoond om hogere bedragen van VEGF die op zijn beurt geleid tot een verbeterde therapeutische efficiëntie in ischemische weefsel46afscheiden.
Dit manuscript presenteert een gedetailleerd protocol voor de selectieve extractie en genetische manipulatie van hDFSCs. Voor dit doel beschreven we de oogsten en enzymatische vertering van menselijke tandheelkundige follikels en de daaropvolgende Isolatievan hDFSCs. Om het karakteriseren van geïsoleerde cellen, zijn belangrijke aanwijzingen voor de verificatie van MSC eigenschappen opgenomen overeenkomstig de richtsnoeren van de International Society for cellulaire therapie13. Daarnaast bieden wij een gedetailleerde beschrijving voor de generatie van miR gemodificeerde hDFSCs door toepassing van een strategie van kationische lipide gebaseerde transfectie en de evaluatie van de efficiëntie van de transfectie en cytotoxiciteit.
Protocol
Representative Results
Discussion
Volwassen stamcellen zijn momenteel in focus voor de behandeling van verschillende degeneratieve ziekten. In het bijzonder, beenmerg (BM)-afgeleid van stamcellen, met inbegrip van hematopoietische stamcellen (HSCs) en de MSCs, onder intensieve klinisch onderzoek47. BM oogsten is echter een invasieve procedure veroorzaken van pijn op de site van donatie en kan leiden tot ongewenste voorvallen48. Onlangs, het postnatale tandheelkundige weefsel heeft ontpopt als een roman en g…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dit werk werd ondersteund door het programma van de FORUN van het Rostock universitair medisch centrum (889018) en de VOCHTIGE Foundation (2016-11). Daarnaast P.M. en R.D. worden ondersteund door de goedgekeurd (VIP + 00240).
Materials
| Mouse anti Human CD105 Antibody: Alexa Fluor 488 | Bio-Rad | MCA1557A488 | Clone SN6, monoclonal |
| Mouse IgG1 Negative Control Antibody: Alexa Fluor 488 | Bio-Rad | MCA928A488 | monoclonal |
| APC Mouse Anti-Human CD29 Antibody | BD Biosciences | 559883 | Clone MAR4, monoclonal |
| APC Mouse IgG1, κ Isotype Control Antibody | BD Biosciences | 555751 | Clone MOPC-21, monoclonal |
| PE Mouse Anti-Human CD73 Antibody | BD Biosciences | 550257 | Clone AD2, monoclonal |
| PE Mouse IgG1, κ Isotype Control Antibody | BD Biosciences | 555749 | Clone MOPC-21, monoclonal |
| PE-Cy7 Mouse Anti-Human CD117 Antibody | BD Biosciences | 339217 | Clone 104D2, monoclonal |
| PE-Cy7 Mouse IgG1, κ Isotype Control Antibody | BD Biosciences | 557872 | Clone MOPC-21, monoclonal |
| PerCP-Cy5.5 Mouse Anti-Human CD44 Antibody | BD Biosciences | 560531 | Clone G44-26, monoclonal |
| PerCP-Cy5.5 Mouse IgG2b, κ Isotype Control Antibody | BD Biosciences | 558304 | Clone 27-35, monoclonal |
| PerCP-Cy5.5 Mouse Anti-Human CD90 Antibody | BD Biosciences | 561557 | Clone 5E10, monoclonal |
| PerCP-Cy5.5 Mouse IgG1, κ Isotype Control Antibody | BD Biosciences | 55095 | Clone MOPC-21, monoclonal |
| V500 Mouse Anti-Human CD45 Antibody | BD Biosciences | 560777 | Clone HI30, monoclonal |
| V500 Mouse IgG1, κ Isotype Control Antibody | BD Biosciences | 560787 | Clone X40, monoclonal |
| FcR Blocking Reagent, human | Miltenyi Biotec | 130-059-901 | |
| UltraPure EDTA | Thermo Fisher Scientific | 15575-020 | 0.5M, pH 8.0 |
| Steritop | Merck Millipore | SCGPT05RE | 0.22 µm, radio-sterilized, polyethersulfone |
| BSA | Sigma-Aldrich | A7906 | |
| PFA | Merck Millipore | 1040051000 | |
| Human Mesenchymal Stem Cell Functional Identification Kit | R&D Systems | SC006 | |
| RNase decontamination solution; RNaseZap RNase Decontamination Solution | Thermo Fisher Scientific | AM9780 | |
| Cy3-labelled precursor miR; Cy3 Dye-Labeled Pre-miR Negative Control #1 | Thermo Fisher Scientific | AM17120 | 5 nmol |
| Pre-miR miRNA Precursor Negative Control #1 | Thermo Fisher Scientific | AM17110 | 5nmol |
| Cationic lipid-based transfection reagent; Lipofectamine 2000 Transfection Reagent | Thermo Fisher Scientific | 11668019 | |
| Reduced serum medium; Opti-MEM I Reduced Serum Medium | Thermo Fisher Scientific | 31985070 | |
| Donkey anti-Goat IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488 | Thermo Fisher Scientific | A-11055 | polyclonal |
| Donkey anti-Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488 | Thermo Fisher Scientific | A-21202 | polyclonal |
| Mounting medium; Fluoroshield with DAPI | Sigma-Aldrich | F6057-20ML | histology mounting medium |
| ELYRA PS.1 LSM 780 confocal microscope | Zeiss | ||
| BD FACS LSRII flow cytometer | BD Biosciences | ||
| BD FACSDiva Software 6.1.2 | BD Biosciences | ||
| ZEN2011 software | Zeiss | ||
| Trypsin/EDTA solution (0.05%/ 0.02%) | Biochrom | L2143 | in PBS, w/o: Ca2+, Mg2+ |
| Amine reactive dye; LIVE/DEAD™ Fixable Near-IR Dead Cell Stain Kit | Thermo Fisher Scientific | L10119 | |
| PBS (1x) | Thermo Fisher Scientific | 10010023 | pH: 7.4; w/o: Ca and Mg |
| P-S-G (100x) | Thermo Fisher Scientific | 10378016 | |
| Basal medium; Dulbecco's Modified Eagle Medium/Nutrient Mixture F-12 | Thermo Fisher Scientific | 11039021 | |
| Antibiotic, ZellShield | Biochrom | W 13-0050 | |
| FBS | Thermo Fisher Scientific | 10500064 | |
| Collagenase type I | Thermo Fisher Scientific | 17100017 | |
| Dispase II | Thermo Fisher Scientific | 17105041 | |
| Filter, Sterifix syringe filter 0.2 µm | Braun | 4099206 | |
| 50 mL conical centrifuge tube | Sarstedt | 62,547,254 | |
| 15 mL conical centrifuge tube | Sarstedt | 62,554,502 | |
| Cell culture flask 75 cm2 | Sarstedt | 833,910,002 | |
| Cell culture flask, 25 cm2 | Sarstedt | 833,911,002 | |
| Freezing medium, Biofreeze | Biochrom | F 2270 | |
| Cryotubes | Thermo Fisher Scientific | 377267 | 1.8 mL |
| Trypan blue solution | Sigma-Aldrich | T8154 | 0.4 % |
| Counting chamber | Paul Marienfeld | ||
| Local anesthetic, Xylocitin (lidocaine hydrochloride) 2% with epinephrine (adrenaline) 0.001% | Mibe | ||
| NaCl solution | Braun | 0.9 % | |
| Vicryl satures, Vicryl rapide | Ethicon | 3 – 0 |
References
- Potdar, P. D., Jethmalani, Y. D. Human dental pulp stem cells: Applications in future regenerative medicine. World journal of stem cells. 7 (5), 839-851 (2015).
- Lima, R. L., et al. Human dental follicle cells express embryonic, mesenchymal and neural stem cells markers. Archives of oral biology. 73, 121-128 (2017).
- Wise, G. E. Cellular and molecular basis of tooth eruption. Orthodontics & craniofacial research. 12 (2), 67-73 (2009).
- Baykul, T., Saglam, A. A., Aydin, U., Başak, K. Incidence of cystic changes in radiographically normal impacted lower third molar follicles. Oral surgery, oral medicine, oral pathology, oral radiology, and endodontics. 99 (5), 542-545 (2005).
- Wise, G. E., Frazier-Bowers, S., D’Souza, R. N. Cellular, molecular, and genetic determinants of tooth eruption. Critical reviews in oral biology and medicine : an official publication of the American Association of Oral Biologists. 13 (4), 323-334 (2002).
- Ten Cate, A. R. The development of the periodontium: A largely ectomesenchymally derived unit. Periodontology 2000. 13 (1), 9-19 (1997).
- Park, B. -. W., et al. In vitro and in vivo osteogenesis of human mesenchymal stem cells derived from skin, bone marrow and dental follicle tissues. Differentiation; research in biological diversity. 83 (5), 249-259 (2012).
- Sowmya, S., et al. Periodontal Specific Differentiation of Dental Follicle Stem Cells into Osteoblast, Fibroblast, and Cementoblast. Tissue engineering. Part C, Methods. 21 (10), 1044-1058 (2015).
- Kémoun, P., et al. Human dental follicle cells acquire cementoblast features under stimulation by BMP-2/-7 and enamel matrix derivatives (EMD) in vitro. Cell and tissue research. 329 (2), 283-294 (2007).
- Morsczeck, C., et al. Isolation of precursor cells (PCs) from human dental follicle of wisdom teeth. Matrix biology: Journal of the International Society for Matrix Biology. 24 (2), 155-165 (2005).
- Hieke, C., et al. Human dental stem cells suppress PMN activity after infection with the periodontopathogens Prevotella intermedia and Tannerella forsythia. Scientific reports. 6, 39096 (2016).
- Kumar, A., et al. Molecular spectrum of secretome regulates the relative hepatogenic potential of mesenchymal stem cells from bone marrow and dental tissue. Scientific reports. 7 (1), 15015 (2017).
- Dominici, M., et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 8 (4), 315-317 (2006).
- Ullah, I., et al. In vitro comparative analysis of human dental stem cells from a single donor and its neuronal differentiation potential evaluated by electrophysiology. Life sciences. 154, 39-51 (2016).
- Völlner, F., Ernst, W., Driemel, O., Morsczeck, C. A two-step strategy for neuronal differentiation in vitro of human dental follicle cells. Differentiation; research in biological diversity. 77 (5), 433-441 (2009).
- Morsczeck, C., et al. Comparison of human dental follicle cells (DFCs) and stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED) after neural differentiation in vitro. Clinical oral investigations. 14 (4), 433-440 (2010).
- Kadar, K., et al. Differentiation potential of stem cells from human dental origin – promise for tissue engineering. Journal of physiology and pharmacology: An official journal of the Polish Physiological Society. 60, 167-175 (2009).
- Heng, B. C., et al. Decellularized Matrix Derived from Neural Differentiation of Embryonic Stem Cells Enhances the Neurogenic Potential of Dental Follicle Stem Cells. Journal of endodontics. 43 (3), 409-416 (2017).
- Honda, M. J., Imaizumi, M., Tsuchiya, S., Morsczeck, C. Dental follicle stem cells and tissue engineering. Journal of Oral Science. 52 (4), 541-552 (2010).
- Liu, J., et al. Concise reviews: Characteristics and potential applications of human dental tissue-derived mesenchymal stem cells. Stem cells. 33 (3), 627-638 (2015).
- Morsczeck, C., Reichert, T. E. Dental stem cells in tooth regeneration and repair in the future. Expert opinion on biological therapy. 18 (2), 187-196 (2018).
- Rezai-Rad, M., et al. Evaluation of bone regeneration potential of dental follicle stem cells for treatment of craniofacial defects. Cytotherapy. 17 (11), 1572-1581 (2015).
- Handa, K., et al. Progenitor Cells From Dental Follicle Are Able to Form Cementum Matrix In Vivo. Connective Tissue Research. (2-3), 406-408 (2009).
- Tsuchiya, S., Ohshima, S., Yamakoshi, Y., Simmer, J. P., Honda, M. J. Osteogenic Differentiation Capacity of Porcine Dental Follicle Progenitor Cells. Connective Tissue Research. 51 (3), 197-207 (2010).
- Honda, M. J., et al. Stem cells isolated from human dental follicles have osteogenic potential. Oral surgery, oral medicine, oral pathology, oral radiology, and endodontics. 111 (6), 700-708 (2011).
- Guo, W., et al. Dental follicle cells and treated dentin matrix scaffold for tissue engineering the tooth root. Biomaterials. 33 (5), 1291-1302 (2012).
- Yang, B., et al. Tooth root regeneration using dental follicle cell sheets in combination with a dentin matrix – based scaffold. Biomaterials. 33 (8), 2449-2461 (2012).
- Bai, Y., et al. Cementum- and periodontal ligament-like tissue formation by dental follicle cell sheets co-cultured with Hertwig’s epithelial root sheath cells. Bone. 48 (6), 1417-1426 (2011).
- Guo, S., et al. Comparative study of human dental follicle cell sheets and periodontal ligament cell sheets for periodontal tissue regeneration. Cell transplantation. 22 (6), 1061-1073 (2013).
- Lucaciu, O., et al. Dental follicle stem cells in bone regeneration on titanium implants. BMC biotechnology. 15, 114 (2015).
- Li, X., et al. A therapeutic strategy for spinal cord defect: Human dental follicle cells combined with aligned PCL/PLGA electrospun material. BioMed research international. , 197183 (2015).
- Yang, C., Li, X., Sun, L., Guo, W., Tian, W. Potential of human dental stem cells in repairing the complete transection of rat spinal cord. Journal of neural engineering. 14 (2), 26005 (2017).
- Kanao, S., et al. Capacity of Human Dental Follicle Cells to Differentiate into Neural Cells In Vitro. Stem Cells International. 2017, 8371326 (2017).
- Sung, I. -. Y., et al. Cardiomyogenic Differentiation of Human Dental Follicle-derived Stem Cells by Suberoylanilide Hydroxamic Acid and Their In Vivo Homing Property. International journal of medical sciences. 13 (11), 841-852 (2016).
- Botelho, J., Cavacas, M. A., Machado, V., Mendes, J. J. Dental stem cells: Recent progresses in tissue engineering and regenerative medicine. Annals of medicine. 49 (8), 644-651 (2017).
- Dou, L., et al. Secretome profiles of immortalized dental follicle cells using iTRAQ-based proteomic analysis. Scientific reports. 7 (1), 7300 (2017).
- Lee, S., Choi, E., Cha, M. -. J., Hwang, K. -. C. Cell adhesion and long-term survival of transplanted mesenchymal stem cells: A prerequisite for cell therapy. Oxidative medicine and cellular longevity. 2015, 632902 (2015).
- Lemcke, H., Voronina, N., Steinhoff, G., David, R. Recent Progress in Stem Cell Modification for Cardiac Regeneration. Stem Cells International. 2018 (2), 1-22 (2018).
- Nowakowski, A., Walczak, P., Janowski, M., Lukomska, B. Genetic Engineering of Mesenchymal Stem Cells for Regenerative Medicine. Stem cells and development. 24 (19), 2219-2242 (2015).
- Nowakowski, A., Walczak, P., Lukomska, B., Janowski, M. Genetic Engineering of Mesenchymal Stem Cells to Induce Their Migration and Survival. Stem Cells International. 2016, 4956063 (2016).
- Gulluoglu, S., Tuysuz, E. C., Bayrak, O. F., #350;ahin, F., Doğan, A., Demirci, S. miRNA Regulation in Dental Stem Cells: From Development to Terminal Differentiation. Dental Stem Cells. Stem Cell Biology and Regenerative Medicine. , (2016).
- Hammond, S. M. An overview of microRNAs. Advanced drug delivery reviews. 87, 3-14 (2015).
- Jakob, P., Landmesser, U. Role of microRNAs in stem/progenitor cells and cardiovascular repair. Cardiovascular research. 93 (4), 614-622 (2012).
- Clark, E. A., Kalomoiris, S., Nolta, J. A., Fierro, F. A. Concise Review: MicroRNA Function in Multipotent Mesenchymal Stromal Cells. Stem cells. 32 (5), 1074-1082 (2014).
- Dakhlallah, D., et al. MicroRNA-133a engineered mesenchymal stem cells augment cardiac function and cell survival in the infarct heart. Journal of cardiovascular pharmacology. 65 (3), 241-251 (2015).
- Seo, H. -. H., et al. Exogenous miRNA-146a Enhances the Therapeutic Efficacy of Human Mesenchymal Stem Cells by Increasing Vascular Endothelial Growth Factor Secretion in the Ischemia/Reperfusion-Injured Heart. Journal of vascular research. 54 (2), 100-108 (2017).
- Trounson, A., McDonald, C. Stem Cell Therapies in Clinical Trials: Progress and Challenges. Cell stem cell. 17 (1), 11-22 (2015).
- Siddiq, S., et al. Bone marrow harvest versus peripheral stem cell collection for haemopoietic stem cell donation in healthy donors. The Cochrane database of systematic reviews. (1), CD006406 (2009).
- Karamzadeh, R., Eslaminejad, M. B., Andrades, J. A. Dental-Related Stem Cells and Their Potential in Regenerative Medicine. Regenerative Medicine and Tissue Engineering. , (2013).
- Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (25), 13625-13630 (2000).
- Honda, M. J., et al. Side population cells expressing ABCG2 in human adult dental pulp tissue. International endodontic journal. 40 (12), 949-958 (2007).
- Seo, B. -. M., et al. Investigation of multipotent postnatal stem cells from human periodontal ligament. The Lancet. 364 (9429), 149-155 (2004).
- Miura, M., et al. SHED: stem cells from human exfoliated deciduous teeth. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (10), 5807-5812 (2003).
- Sonoyama, W., et al. Characterization of the apical papilla and its residing stem cells from human immature permanent teeth: a pilot study. Journal of endodontics. 34 (2), 166-171 (2008).
- Nollet, E., Hoymans, V. Y., van Craenenbroeck, A. H., Vrints, C. J., van Craenenbroeck, E. M. Improving stem cell therapy in cardiovascular diseases: the potential role of microRNA. American journal of physiology. Heart and circulatory physiology. 311 (1), H207-H218 (2016).
- Müller, P., et al. Magnet-Bead Based MicroRNA Delivery System to Modify CD133+ Stem Cells. Stem cells international. 2016, 7152761 (2016).
- Schade, A., et al. Magnetic Nanoparticle Based Nonviral MicroRNA Delivery into Freshly Isolated CD105(+) hMSCs. Stem cells international. 2014, 197154 (2014).
- Bulbake, U., Doppalapudi, S., Kommineni, N., Khan, W. Liposomal Formulations in Clinical Use: An Updated Review. Pharmaceutics. 9 (2), (2017).
- Xue, H. Y., Liu, S., Wong, H. L. Nanotoxicity: a key obstacle to clinical translation of siRNA-based nanomedicine. Nanomedicine. 9 (2), 295-312 (2014).
- Nguyen, L. T., Atobe, K., Barichello, J. M., Ishida, T., Kiwada, H. Complex formation with plasmid DNA increases the cytotoxicity of cationic liposomes. Biological & pharmaceutical bulletin. 30 (4), 751-757 (2007).
- Omidi, Y., Barar, J., Akhtar, S. Toxicogenomics of cationic lipid-based vectors for gene therapy: impact of microarray technology. Current drug delivery. 2 (4), 429-441 (2005).
- Hausburg, F., et al. Defining optimized properties of modified mRNA to enhance virus- and DNA- independent protein expression in adult stem cells and fibroblasts. Cellular physiology and biochemistry: International journal of experimental cellular physiology, biochemistry, and pharmacology. 35 (4), 1360-1371 (2015).
- Cardarelli, F., et al. The intracellular trafficking mechanism of Lipofectamine-based transfection reagents and its implication for gene delivery. Scientific reports. 6, 25879 (2016).
- Kirschman, J. L., et al. Characterizing exogenous mRNA delivery, trafficking, cytoplasmic release and RNA-protein correlations at the level of single cells. Nucleic acids research. 45 (12), e113 (2017).
- Li, L., Nie, Y., Ye, D., Cai, G. An easy protocol for on-chip transfection of COS-7 cells with a cationic lipid-based reagent. Lab on a chip. 9 (15), 2230-2233 (2009).
- Chang, K., Marran, K., Valentine, A., Hannon, G. J. RNAi in cultured mammalian cells using synthetic siRNAs. Cold Spring Harbor protocols. 2012 (9), 957-961 (2012).
- Sakurai, K., Chomchan, P., Rossi, J. J. Silencing of gene expression in cultured cells using small interfering RNAs. Current protocols in cell biology. , (2010).
- Hoelters, J., et al. Nonviral genetic modification mediates effective transgene expression and functional RNA interference in human mesenchymal stem cells. The journal of gene medicine. 7 (6), 718-728 (2005).
