Orthotopic Transplantation de cellules d’adénocarcinome pulmonaire syngénique pour étudier l’Expression des PD-L1

Summary

Nous décrivons ici un modèle de transplantation orthotopique syngénique minimalement invasives des cellules d’adénocarcinome pulmonaire souris comme un modèle de temps - et réduction des coûts pour étudier le cancer du poumon non à petites cellules.

Abstract

L’utilisation de modèles murins est indispensable pour l’étude de la physiopathologie des maladies diverses. En ce qui concerne le cancer du poumon, plusieurs modèles sont disponibles, y compris les organismes génétiquement machiné des modèles ainsi que les modèles de la transplantation. Cependant, les modèles de souris génétiquement modifiées sont long et coûteux, que certains modèles de transplantation orthotopique sont difficiles à reproduire. Ici, une méthode de livraison non invasif par voie intratrachéale de cellules de tumeur du poumon comme un modèle de transplantation orthotopique alternative est décrite. L’utilisation de cellules d’adénocarcinome pulmonaire souris et receveurs de greffe syngénique permet à étudier la tumorigenèse sous la présence d’un système immunitaire pleinement active. En outre, les manipulations génétiques de tumeur cellules avant transplantation rend ce modèle une approche intéressante de gagner du temps pour étudier l’impact des facteurs génétiques sur la croissance tumorale et l’expression des gènes cellulaires tumorales profils dans des conditions physiologiques. En utilisant ce modèle, nous montrons ce poumon cellules d’adénocarcinome express niveaux accrus de l’éliminateur de lymphocytes programmé mort-ligand 1 (PD-L1) lorsqu’il est cultivé dans leur milieu naturel par rapport à la culture in vitro.

Introduction

Cancer du poumon est toujours de loin le plus grand tueur de liés au cancer dans les hommes et les femmes¹. En effet, selon l’American Cancer Society, chaque année plus de personnes meurent du cancer du poumon que du cancer du sein, la prostate et du côlon cancer ensemble¹. Jusqu'à récemment, la majorité des patients souffrant de cancer de poumon non à petites cellules (NSCLC), qui est le plus abondant sous-type de cancer du poumon, ont été traitée avec une chimiothérapie à base de platine dans un cadre de première ligne, principalement avec l’ajout de l’angiogenèse inhibiteurs de la². Seulement u....

Protocol

Tous les protocoles expérimentaux comme indiqué ci-dessous suivent les directives éthiques et ont été approuvés par le ministère fédéral autrichien de la Science, la recherche et l’économie.

Remarque : Le protocole ici décrit un modèle orthotopique de transplantation de cellules d’adénocarcinome pulmonaire souris dans syngéniques bénéficiaires. Les cellules peuvent être isolées des poumons avec tumeur de Kras^LSL-G12D: p53^fl/fl (KP) souris^7,18, si elles sont disponibles en interne et transplantées chez des souris de même sexe et de fond. Si les ....

Results

Nous avons utilisé le modèle de transplantation orthotopique par livraison de cellules tumorales par voie intratrachéale pour tester si le microenvironnement tumoral stimule expression PD-L1. Par conséquent, nous avons isolé cellules pulmonaires AC souris du modèle KP autochtone (cellules de KP), dix semaines après induction tumorale via Cre recombinase-exprimant l’adénovirus (Ad.Cre) livraison²⁴. Par la suite, nous avons marqué le poumon cellules AC en utilisant u.......

Discussion

Afin d’étudier les manifestations physiologiques et pathologiques de poumon dans le poumon, méthodes intubation par voie intratrachéale invasive et non invasive pour l’instillation de différents réactifs sont largement utilisé^{26,27,28,29 ,30,31,32}. Dans le domaine du cancer, les chercheurs .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
		cellulaire d’adénocarcinome pulmonaire de souris	isolée dans la maison
C57Bl/6 souris			F1 du croisement des deux arrière-plans peut être utilisée (8-12 semaines)
Souris
RPMI 1640 Medium	Life Technologies	11544446
Fetal Calf Serum	Life Technologies	11573397
Pénicilline/ Streptomycine Solution	Life Technologies	11548876
L-Glutamine	Life Technologies	11539876
Trypsine, 0,25 % (1x) avec EDTA	Life Technologies	11560626
UltraPure 0,5 M EDTA, pH 8,0	Thermo Fisher Scientific	15575020
Ketasol (100 mg/mL de kétamine)	Ogris Pharma	8-00173
Xylasol (20 mg/mL Xylazine)	Ogris Pharma	8-00178
BD Insyste (22 GA 1.00 IN)	BD	381223
Pinces émoussées	Roboz	RS8260
Leica CLS150 LED	Leica	30250004	Fibre Light Illuminator
Student Iris Scissors	Fine Science Tools	91460-11
DNase I (RNase-Free)	Nouvelle-Angleterre Biolabs	M0303S
Collagénase de type I	Life Technologies	17100017
Tampon de lyse ACK	Lonza	10-548E
CD274 (-L1, B7-H1) Anticorps monoclonal (MIH5), PE-Cyanine7	eBioscience	25-5982-82
Contrôle des isotypes IgG2a kappa de rat, PE-Cyanine7	eBioscience	25-4321-82