Détection des virus de bioaérosols à l’aide de résine échangeuse d’anions

Résumé

Un anion exchange résines méthode, adaptée au liquide impingement base bioaérosols prélèvement d’échantillons de virus est démontrée. Lorsqu’il est couplé avec la détection moléculaire en aval, la méthode permet une détection facile et sensible des virus de bioaérosols.

Résumé

Ce protocole illustre une méthode d’échantillonnage personnalisées aux bioaérosols de virus. Dans ce système, résine échangeuse d’anions est couplé avec dispositifs d’échantillonnage atmosphérique impingement liquide pour la concentration efficace des virus charge négative de bioaérosols. La résine sert donc, une étape de concentration supplémentaire du flux de travail d’échantillonnage aux bioaérosols. Extraction des acides nucléiques des particules virales est ensuite exécutée directement à partir de la résine échangeuse d’anions, avec l’échantillon qui en résulte adapté aux analyses moléculaires. De plus, ce protocole décrit une chambre aux bioaérosols sur mesure capable de générer des bioaérosols contenant des virus sous une variété de conditions environnementales et permettant une surveillance continue des variables environnementales comme la température, humidité, Vitesse du vent et la concentration massique en aérosol. Le principal avantage de l’utilisation de ce protocole est une sensibilité accrue de détection virale, telle qu’évaluée par comparaison directe avec un impacteur liquide conventionnel non modifié. D’autres avantages incluent la possibilité de concentrer des divers virus charge négative, le faible coût de résine échangeuse d’anions (~$0.14 par exemple) et la facilité d’utilisation. Les inconvénients incluent l’incapacité du présent protocole pour évaluer l’infectivité des particules virales adsorbés à la résine, et éventuellement la nécessité pour l’optimisation de la mémoire tampon de liquide d’échantillonnage utilisées au sein de l’impacteur.

Introduction

Le but de cette méthode est de fournir une plate-forme d’échantillonnage très sensibles aux bioaérosols afin de faciliter la détection moléculaire des virus charge négative de bioaérosols. Micro-organismes, y compris des particules virales, peuvent survivre en bioaérosols pendant de longues périodes de temps¹. Bioaérosols peut se déplacer sur des distances relativement longues et maintenir la viabilité et infectiosité, comme en témoigne une épidémie de légionellose qui proviennent de l’industriel situés à une distance de 6 km de personnes touchées de tours de refroidissement et abouti à 18 morts,². Transmission indirecte....

Protocole

1. installation de la chambre aux bioaérosols (voir Figure 2)

1. Précharger les impacteurs liquides avec 20 mL de 0,01 M phosphate buffered saline, pH 7,5 (PBS).
   1. Ajouter 0,5 g de résine échangeuse d’anions et suspendre dans du PBS de l’un des impacteurs liquides, avec un autre impacteur liquide agissant comme un contrôle.
2. Impacteurs liquides de position en parallèle dans la chambre aux bioaérosols, à l’aide de supports de pince avec anses aérosol face le nébuliseur.
   Remarque : Voir la Figure 2 pour plus de détails.
3. Co-implanter un moniteur....

Résultats

Figure 1 illustre le principe qui sous-tend la capture axée sur la charge de virus de bioaérosols par l’inclusion de la résine dans les impacteurs base liquide. La figure 2 illustre la configuration de la chambre aux bioaérosols sur mesure. La figure 3 décrit les étapes nécessaires à la mise en place l’expérience aérosolisation et les mesures pour s’assurer le contrôle de la qualité.

Discussion

Ce protocole décrit une méthode pour la capture virale sensible de bioaérosols en utilisant des impacteurs liquides mis à jour le. La méthode est optimisée pour la détection et la quantification de la charge virale dans les bioaérosols. La modification précise démontrée ici implique l’ajout de résine échangeuse d’anions à liquide contenue dans un impacteur liquid commun. Cette méthode a été développée pour sa simplicité dans le traitement de l’échantillon en aval, alors que les autres techniques de traitement d’échantill.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Escherichia coli bactériophage MS2 (ATCC 15597-B1)	American Type Culture Collection	ATCC 15597-B1
FluMist Quadrivalent	AstraZeneca	Contact fabricant	Les constituants viraux de ce vaccin sont susceptibles d’être modifiés sur une base annuelle
CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System	Bio-Rad	1855195
Amorces et sondes	Technologies d’ADN intégrées	NA
0.2 & micro ; M filtre stérile	NA	NA
1 L Bouteilles en pyrex ou équivalent	NA	NA
Pointes de pipette 1 mL	S.A	S.O
Pipette de 1 mL	S.O	S.O
PCR	NA	NA
Auxiliaire de pipette ou équivalent	NA	NA
QIAamp Mini Kit d’ARN viral	Qiagen	52904
Sonde QuantiTect Kit RT-PCR	Qiagen	204443
Amberlite IRA-900 forme chlorure	Sigma-Aldrich	216585-500G
Saline tamponnée au phosphate	Sigma-Aldrich	P5368-10PAK
Eau (qualité biologie moléculaire)	Sigma-Aldrich	W4502-1L
Eppendorf DNA LoBind Microcentrifugeuse Tubes	ThermoFisher	13-698-791
Falcon 50 mL Tubes coniques à centrifuger  ;	ThermoFisher	14-432-22
Falcon Tubes à centrifuger en polypropylène	ThermoFisher	05-538-62
SuperScript III Platinum Kit qRT-PCR en une étape avec ROX	ThermoFisher	11745100
SKC Biosampler 20 mL, set de 3 verres	SKC Inc.	225-9593
Pompes d’échantillonnage Vac-u-Go	SKC Inc.	228-9695
Nébuliseur Collison (6 jets)	BGI Inc.
NA Capsule HEPA	PALL	12144
Q-TRAK Moniteur de qualité de l’air intérieur 8554	TSI Inc.
ANÉMOMÈTRE thermique à vélomètre NA Alnor AVM440-A	TSI Inc.
SidePak AM510 moniteur d’aérosols personnel	TSI Inc.
à bioaérosols	NA	NA

. . . . Tubes NAChambre