Medição de hipofaringe glândula Acinus tamanho em trabalhadores de abelhas (Apis mellifera)
Summary
Hipofaringe glândula acinus tamanho é uma medida robusta de nutrição de abelhas de mel de enfermeira. Aqui, nós fornecemos um protocolo detalhado para dissecar, coloração, imagem e medição ácinos de glândula enfermeira abelha hipofaringe.
Abstract
As enfermeira hipofaringe glândulas produzem a fração proteica do trabalhador e geleia real que é alimentada para desenvolver as larvas e as rainhas. Estas glândulas pareadas localizadas na cabeça da abelha são altamente sensíveis à quantidade e qualidade de pólen e pólen substitutos que a enfermeira abelha consome. As glândulas ficam menores quando as enfermeiras são alimentadas com dietas deficientes e são grandes, quando eles são alimentados com dietas completas. Porque a enfermeira hipofaringe glândula tamanho é um indicador robusto da enfermeira nutrição, é essencial que os que estudam a nutrição de abelhas de mel sabem como medir essas glândulas. Aqui, nós fornecemos métodos detalhados para dissecando, coloração, imagem latente e glândulas de hipofaringe enfermeira abelha de medição. Apresentamos as comparações de dados que foram usados para estudar o impacto do pólen no tamanho da glândula e tecido imaculado e manchado. Este método tem sido usado para testar como dieta afeta o tamanho de glândula de hipofaringe, mas tem mais uso para compreender o papel dessas glândulas na saúde de colmeia.
Introduction
As abelhas são essenciais para a agricultura porque eles polinizam uma variedade de culturas que são consumidos por seres humanos e animais. Muita atenção para o declínio das populações de abelhas de mel como focalizar de perdas de colônia em torno de 30-40% anualmente no Estados Unidos1 e 10-15% na Europa,2,3. Múltiplos fatores, incluindo o acesso reduzido a alta qualidade de forragem, provável ato juntos para afetar negativamente a saúde das abelhas de mel. Monocultura, seca, práticas insustentáveis de apicultura e outros fatores diminuem a diversidade e a quantidade de pólens naturais disponíveis para colônias4,5. Porque as abelhas derivam quase todas as suas proteínas dietéticas e lipídios de pólen, acesso reduzido ao pólen pode limitar severamente a saúde individual e colônia.
As glândulas de hipofaringe são estruturas secretoras, localizadas na cabeça da abelha, entre os olhos e o cérebro6. Em circunstâncias normais, a trajetória do desenvolvimento e funcional das glândulas espelho que da abelha estão localizados no. Com aproximadamente 5-10 dias de idade, a abelha realiza comportamentos de enfermagem na colmeia. Neste mesmo momento, as glândulas de hipofaringe atingir seu pico e capacidade secretora, produzindo a fração de proteína principal do alimento ninhado ou geleia alimentado para o desenvolvimento de larvas e outros adultos, como a rainha. Neste tamanho de pico as glândulas se assemelhar a um cacho de uvas, onde cada uva é uma estrutura discreta lobo conhecida como o acinus (plural: acinar). Como a abelha operária, idades e assume diferentes tarefas na colmeia, as glândulas de hipofaringe encolhem e assumem diferentes funções, como quebrar açúcares no néctar7,8. As glândulas de hipofaringe, portanto, estão correlacionadas com a idade da abelha e sua tarefa associada a idade.
Tamanho de glândula enfermeira hipofaringe é sensível à quantidade e qualidade de proteína em sua dieta9,10,11. Quando a enfermeira abelhas são bem nutridas, suas glândulas são grandes. Considerando que, as glândulas são pequenas quando a abelha é privada de pólen, particularmente na primeira semana do desenvolvimento adulto. Para determinar o estado nutricional de uma abelha de enfermeira, pesquisadores normalmente medem as glândulas de hipofaringe, ou medindo diretamente a glândula acinus tamanho11,12,13,14 ou proteína15,16 de conteúdo ou medindo-se a proteína11 de conteúdo ou peso fresco17 de cabeça inteira onde eles estão localizados. Cada método tem suas próprias vantagens e desvantagens. Nós preferimos a resolução Obtida de medição ácinos da glândula, embora esse método pode ser um desafio de duas maneiras principais. O primeiro desafio é identificar e dissecar a glândula corretamente. O segundo é a obtenção de uma medida exata de cada acinus. Sob um microscópio de luz dissecação, as glândulas aparecem transparente ou leitoso branco e as fronteiras dos ácinos podem ser difícil de definir. Ter ferramentas para definir melhor a borda da acinar e aumentar a probabilidade de obter medições precisas da glândula é benéfica a ninguém estudar nutrição de abelha de mel.
Aqui, nós mostramos pesquisadores interessados como dissecar, mancha, imagem e medir a hipofaringe glândulas para que as medidas exatas de tamanho acinus podem ser alcançadas. O método que descrevemos oferece pesquisadores um método fácil, preciso e replicável para alcançar várias medições de glândula em um período relativamente curto de tempo, uma vez que o experimentador é suficientemente praticado. Um com confiança poderia medir as glândulas de quase 10 pessoas em mais de uma hora. Oferecemos detalhes sobre o método e materiais necessários para obter estas medidas. Os aspectos mais importantes dos métodos indicados abaixo são a dissecação adequada e coloração das glândulas. Apesar de capturar as imagens ampliadas e medir os ácinos com software comercial, os métodos que apresentamos podem ser facilmente adaptados para outras plataformas,18.
Protocol
Representative Results
Discussion
Tamanho de glândula de hipofaringe é sensível à quantidade de proteína e pólen na dieta e um marcador crítico de nutrição em abelhas adultas jovens. Aqui, vamos demonstrar uma maneira barata e reprodutível para dissecar e medir este tecido. Estes tecidos podem ser difíceis de dissecar, mas com a prática, um pode obter cada vez mais limpas dissecações com o tecido relativamente intacta. A principal vantagem do método apresentado aqui é que o tecido é manchado, o que permite que o pesquisador Visualizar cl…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado por fundos internos a partir do USDA-ARS (número do projeto: 2022-21000-017-00-D). O USDA/ARS é um empregador que oferece oportunidades iguais e provedor.
Materials
| Cool setting wax | Grobet USA | 21.450 | |
| Glass petri dish, small | VWR | 89000-310 | |
| Glass petri dish, large | VWR | 89000-314 | |
| Super Max Wax Pen | Eurotool | PEN-520.00 | |
| Breakable razor blades | Electron Microscopy Sciences | 72004 | |
| pin vise | BioQuip | 4845 | |
| 2A-SA flat/rounded tip forceps | Rubis/BioQuip | 4522 | |
| Fine point forceps | Rubis/BioQuip | 4523 | |
| 5A-SA super fine point forceps | Rubis/BioQuip | 4525 | |
| 10 mm micro spring scissors | BioQuip | 4715 | |
| 3 mm micro spring Vannas scissors | Roboz | RS-5610 | |
| Glass Depression Slides, Single Cavity | GSC International | 4-13057-DZ-12 | |
| PBS tablets | VWR | 97062-730 | |
| Giemsa stain, modified solution | Sigma Aldrich | 32884 | |
| Insect pins | ENTO SPHINX S.R.O. | 02.02 | |
| Leica Applications Suite measurement software | Leica Microsystems | any measurement software, including free software, can be used |
References
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