JoVE Journal > Bioengineering
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Résultats
Discussion
Divulgations
Acknowledgements
Materials
References
Traduction automatique
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Bio-ingénierie

דור של Cationic Nanoliposomes למסירה יעיל של במבחנה עיבד RNA שליח

Published: February 01, 2019
doi:
10.3791/58444
, , , , , , ,
1Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery, Clinical Research Laboratory,University Medical Center, 2Atherothrombosis and Vascular Biology,Baker Heart & Diabetes Institute, 3Department of Medicine,Monash University

Summary

כאן נתאר פרוטוקול לדור של cationic nanoliposomes, אשר מבוססת על שיטת יבש-סרט והוא יכול לשמש עבור הכספת, אספקה יעילה של במבחנה עיבד RNA שליח.

Abstract

הפיתוח של RNA שליח (mRNA)-מבוסס הרפוי עבור הטיפול במחלות שונות הופך יותר ויותר חשוב בגלל החיובי מאפייני במבחנה עיבד mRNA (IVT). עם העזרה של IVT mRNA, דה נובו הסינתזה של חלבון הרצוי יכולה להיגרם ללא שינוי מצב פיזיולוגי תא היעד. יתר על כן, חלבון ביוסינטזה אפשר לשלוט בדיוק בגלל ההשפעה ארעית של IVT mRNA.

עבור תרביות תאים יעיל של תאים, nanoliposomes (NLps) עשוי לייצג רכב משלוח בטוח ויעיל עבור mRNA טיפולית. מחקר זה מתאר פרוטוקול ליצירת יעילה ובטוחה cationic NLps המורכב של DC-כולסטרול, 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (סמים) כמו וקטור משלוח עבור IVT mRNA. NLps נתקל מוגדרת גודל, התפלגות אחידה, וקיבולת גבוהה complexation, ולא יכול להיות מיוצר בשיטת סרט יבש. יתר על כן, אנו מציגים מערכות בדיקה שונים כדי לנתח את complexation שלהם, תרביות תאים efficacies באמצעות סינתטי משופרת חלבון פלואורסצנטי ירוק (eGFP) ה-mRNA, כמו גם את השפעתם על יכולת הקיום התא. בסך הכל, פרוטוקול שהוצגו מספקת גישה יעילה ובטוחה mRNA complexation, אשר עשוי לקדם ולשפר את הממשל של mRNA טיפולית.

Introduction

השימוש של mRNA שונה עבור יישומים טיפוליים הראו פוטנציאל גדול האחרונים של שנים. מחלות לב וכלי דם, דלקתיות, monogenetic, כמו גם בפיתוח חיסונים, ה-mRNA הוא מבטיח התרפויטי1.

חלבון בתחליפי עם ה-mRNA מציע כמה יתרונות על פני הטיפול הגנטי הקלאסית, אשר מבוססת על תרביות תאים DNA לתוך תאי היעד2. הפונקציה mRNA יוזם ישירות ב- ציטוזול. למרות את פלסמיד דנ א (pDNA), הבונה של גדילי כפול, מעגלי DNA המכיל אזור יזם רצף גנטי קידוד של חלבון טיפולית3, גם במעשי ציטוזול, זה ניתן רק לשלב לתוך תאים אשר עוברים מיטוזה בזמנו של תרביות תאים. זה מפחית את מספר התאים transfected1,רקמת4. באופן ספציפי, תקנים של רקמות עם פעילות מיטוזה חלש, כגון תאי לב, הוא קשה5. בניגוד pDNA, תרביות תאים של תרגום של mRNA להתרחש mitotic ותאי mitotic ב רקמות1,6. שילוב נגיפי DNA לתוך הגנום המארח עשוי לבוא עם אפקטים מוטגניות או החיסון תגובות7,8, אך לאחר תרביות של תאים תאים עם קידוד החלבון mRNA, דה נובו הסינתזה של החלבון הרצוי מתחיל באופן עצמאי9,10. יתר על כן, ניתן להתאים את סינתזת חלבונים דווקא הצורך של המטופל באמצעות מינונים בודדים, ללא מפריע הגנום ולסכן אפקטים מוטגניות11. הפוטנציאל הפעלת החיסונית של mRNA לאכסון שנוצר יכול להיות הוריד באופן דרמטי באמצעות uridine הדמה ו- 5′-methylcytidine במקום uridine, cytidine12. Uridine מדומה mRNA שונה יש גם הוכח להיות יציבות ביולוגית מוגברת ו translational קיבולת גבוה משמעותית של13.

כדי שתוכל להפיק תועלת מן המאפיינים המבטיח של מבוסס ה-mRNA טיפול ביישומים רפואיים, זה חיוני כדי ליצור הרכב המתאים עבור הובלה של mRNA לתוך התא. הרכב הזה צריך לשאת רעיל מאפיינים במבחנה ויוו, להגן על ה-mRNA נגד נוקלאז השפלה וספק ספיגת הסלולר מספקת זמינות ממושך, תרגום של mRNA14.

בין כל סוגי נושא אפשרי למסירה ויוו סמים, כגון פחמן, נקודות קוונטיות ליפוזומים, האחרון היה למד ביותר15,16. ליפוזומים הם שלפוחית המורכב השומנים bilayer10. הם amphiphilic עם הידרופוביות וכן מקטע הידרופיליות, דרך הסדר עצמית של מולקולות אלה, שכבה כפולה כדורית הוא בנוי17. בתוך ליפוזומים, סוכני טיפולית או סמים יכול להיות אנקפסולציה, לפיכך, מוגן מפני השפלה אנזימטי18. ליפוזומים המכיל N-[1-(2,3-dioleyloxy)propyl]-N,N,N-trimethylammonium כלוריד (DOTMA)19[1, 2-bis (oleoyloxy)-3-פרופאן (trimethylammonio)] (DOTAP)20ו- dioctadecylamidoglycylspermine (כלבים)21, או DC-כולסטרול22, ובכן מאופיין, שימוש תכוף עבור תרביות תאים סלולריים עם ה-DNA או RNA.

ליפוזומים cationic מהווים ליפופרוטאין הטעון חיובית של פוספוליפיד לא טעונים23. תרביות תאים באמצעות ליפוזומים cationic הוא אחת השיטות הנפוצות ביותר עבור הובלה של חומצות גרעין לתוך תאים24,25. החלקיקים השומנים cationic בצורה מתחמי עם קבוצות פוספט טעונים שלילית עמוד השדרה של מולקולות של חומצות גרעין26. אלה lipoplexes כביכול לצרף פני השטח של קרום התא והזן את התא באמצעות אנדוציטוזה או אנדוציטוזה-כמו-מנגנונים27.

בשנת 1989, מאלון ואח. בהצלחה תיאר cationic בתיווך השומנים mRNA תרביות תאים28. אולם, באמצעות תערובת של DOTMA ושל 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (סמים), הקבוצה מצאו כי DOTMA בא לידי ביטוי תופעות ציטוטוקסיות28. בנוסף, Zohra. et al. הראה כי DOTAP (1, 2-dioleoyloxy-3-trimethylammonium-פרופאן כלוריד) יכול לשמש ריאגנט תרביות תאים mRNA29. עם זאת, עבור תרביות תאים יעיל של תאים, DOTAP אמור לשמש בשילוב עם חומרים כימיים אחרים, כגון fibronectin29 או סמים30. עד כה, DOTMA היה השומנים cationic הראשונה בשוק המשמש עבור משלוח ג’ין31. ליפידים אחרים משמשים להגנה טיפולית או במקצועות בשלבים שונים של ניסויים קליניים (למשל, EndoTAG-אני, המכיל DOTAP כנשא שומנים בדם), כעת נחקרת ב שלב-II קליניים משפט32.

עבודה זו מתארת את פרוטוקול עבור הדור של NLps המכיל כולסטרול DC וסמים. שיטה זו מקלה על ביצוע ומאפשר את הדור של NLps בגדלים שונים. המטרה הכללית של דור NLp שימוש בשיטת סרט יבש היא ליצור ליפוזומים עבור complexation mRNA, ובכך מאפשר את תרביות תאים תאים מסתיימים ויעילה במבחנה14,33.

Protocol

1. דור של Cationic Nanoliposomes (איור 1) להמיס ליפידים DC-כולסטרול (3β-[N-(N′,N′-dimethylaminoethane)-carbamoyl] כולסטרול הידרוכלוריד) וסמים (dioleoyl phosphatidylethanolamine), נמסר כאבקה, ב כלורופורם להשגת ריכוז סופי של 25 מ”ג/מ”ל.הערה: אחסן את שומנים מומסים ב-20 ° C. לעבוד עם תמיסת ליפידים שתי מניות 25 מ”ג/מ”ל. µL…

Representative Results

באמצעות פרוטוקול כמתואר, NLps המורכב של ליפידים DC-כולסטרול וסמים הוכנו באמצעות השיטה יבש-סרט (איור 1). במהלך ההכנות, הפתרון nanoliposome מציג שלבים שונים עכירות (איור 2). ניתן ואז לנתח את היעילות כימוס של NLps לאחר העטי…

Discussion

פרוטוקול הציג מתאר את הדור של NLps עם יעילות גבוהה כימוס של mRNA לאכסון שונה, כמו גם של תרביות תאים אמין של תאים במבחנה. יתר על כן, NLps להבטיח את שחרורו של mRNA, אשר בתורו, מתורגם חלבון פונקציונלי בתוך התאים. בנוסף, transfections באמצעות NLps יכול להתבצע במדיום תא רגיל, וכתוצאה מכך גבוהה תא viabilities במהלך ת…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

אף אחד

Materials

(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) AppliChem, Darmstadt, Germany A2231
(3β-[N-(N′,N′-dimethylaminoethane)-carbamoyl]cholesterol hydrochloride (DC-Cholesterol) Avanti, Alabama, USA 700001
4 ′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany D1306
BD FACScan system BD Biosciences, Heidelberg, Germany
Cell Fix (10x) BD Biosciences, Heidelberg, Germany 340181
Chloroform Merck, Darmstadt, Germany 102445
Dimethyl sulfoxid (DMSO) Serva Electrophoresis GmbH, Heidelberg, Germany 20385.02
Dioleoyl phosphatidylethanolamine (DOPE) Avanti, Alabama, USA 850725
Fluorescence microscope Zeiss Axio, Oberkochen, Germany
Lipofectamine 2000 Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany 11668019
Mini extruder Avanti, Alabama, USA
Nuclease-free water Qiagen, Hilden, Germany 129114
Opti-Mem Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany 11058021
PBS buffer (w/o Ca2+/Mg2+) Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany 70011044
Quant-iT Ribo Green RNA reagent kit Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany Q33140
RPMI (w/o phenol red) Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany 11835030
Silica gel Carl Roth, Karlsruhe, Germany P077
Trypsin/EDTA (0.05%) Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany 25300054
HotStar HiFidelity Polymerase Kit Qiagen, Hilden, Germany 202602
QIAquick PCR Purification Kit Qiagen, Hilden, Germany 28104

Pseudouridine-5'-Triphosphate (Ψ-UTP)		 TriLink Biotechnologies, San Diego, USA N-1019
5-Methylcytidine-5'-Triphosphate (Methyl-CTP) TriLink Biotechnologies, San Diego, USA N-1014
Cyanine 3-CTP PerkinElmer, Baesweiler, Germany NEL580001EA
RNeasy Mini Kit Qiagen, Hilden, Germany 74104
MEGAscript T7 Transcription Kit Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany AM1333
3´-O-Me-m7G(5')ppp(5')G RNA Cap Structure Analog New England Biolabs, Ipswich, USA S1411L
Antarctic Phosphatase New England Biolabs, Ipswich, USA M0289S
Agarose Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany 16500-500
GelRed Biotium, Fremont, USA 41003
peqGOLD DNA ladder mix VWR, Pennsylvania, USA 25-2040
Invitrogen 0.5-10kb RNA ladder Fisher Scientific, Göteborg,
Sweden		 11528766
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Sahin, U., Kariko, K., Tureci, O. mRNA-based therapeutics–developing a new class of drugs. Nature Reviews Drug Discovery. 13 (10), 759-780 (2014).
  2. Yamamoto, A., Kormann, M., Rosenecker, J., Rudolph, C. Current prospoects for mRNA gene delivery. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 71 (3), 484-489 (2009).
  3. Williams, P. D., Kingston, P. A. Plasmid-mediated gene therapy for cardiovascular disease. Cardiovascular Research. 91 (4), 565-576 (2011).
  4. Devoldere, J., Dewitte, H., De Smedt, S. C., Remaut, K. Evading innate immunity in nonviral mRNA delivery: don’t shoot the messenger. Drug Discovery Today. 21 (1), 11-25 (2016).
  5. Laguens, R. P., Crottogini, A. J. Cardiac regeneration: the gene therapy approach. Expert Opinion on Biological Therapy. 9 (4), 411-425 (2009).
  6. Hadas, Y., Katz, M. G., Bridges, C. R., Zangi, L. Modified mRNA as a therapeutic tool to induce cardiac regeneration in ischemic heart disease. Wiley Interdisciplinary Reviews: Systems Biology and Medicine. 9 (1), (2017).
  7. Zohra, F. T., Chowdhury, E. H., Akaike, T. High performance mRNA transfection through carbonate apatite-cationic liposome conjugates. Biomaterials. 30 (23-24), 4006-4013 (2009).
  8. Youn, H., Chung, J. -. K. Modified mRNA as an alternative to plasmid DNA (pDNA) for transcript replacement and vaccination therapy. Expert Opinion on Biological Therapy. 15 (9), 1337-1348 (2015).
  9. Avci-Adali, M., et al. Optimized conditions for successful transfection of human endothelial cells with in vitro synthesized and modified mRNA for induction of protein expression. Journal of Biological Engineering. 8 (1), 8 (2014).
  10. Akbarzadeh, A., et al. Liposome: classification, preparation, and applications. Nanoscale Research Letters. 8 (1), 102 (2013).
  11. Michel, T., Wendel, H. -. P., Krajewski, S., Kormann, M. Next-generation Therapeutics: mRNA as a Novel Therapeutic Option for Single-gene Disorders. Modern Tools for Genetic Engineering. , 3-20 (2016).
  12. Karikó, K., et al. Incorporation of pseudouridine into mRNA yields superior nonimmunogenic vector with increased translational capacity and biological stability. Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 16 (11), 1833-1840 (2008).
  13. Anderson, B. R., et al. Incorporation of pseudouridine into mRNA enhances translation by diminishing PKR activation. Nucleic Acids Research. 38 (17), 5884-5892 (2010).
  14. Michel, T., et al. Cationic Nanoliposomes Meet mRNA: Efficient Delivery of Modified mRNA Using Hemocompatible and Stable Vectors for Therapeutic Applications. Molecular Therapy – Nucleic Acids. 8 (September), 459-468 (2017).
  15. Tran, M. A., Watts, R. J., Robertson, G. P. Use of Liposomes as Drug Delivery Vehicles for Treatment of Melanoma. Pigment Cell & Melanoma Research. 22 (4), 388-399 (2009).
  16. Immordino, M. L., Dosio, F., Cattel, L. Stealth liposomes: review of the basic science, rationale, and clinical applications, existing and potential. International Journal of Nanomedicine. 1 (3), 297-315 (2006).
  17. Ross, P. C., Hui, S. W. Lipoplex size is a major determinant of in vitro lipofection efficiency. Gene Therapy. 6 (4), 651-659 (1999).
  18. Xing, H., Hwang, K., Lu, Y. Recent Developments of Liposomes as Nanocarriers for Theranostic Applications. Theranostics. 6 (9), 1336-1352 (2016).
  19. Felgner, P. L., et al. Lipofection: a highly efficient, lipid-mediated DNA-transfection procedure. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 84 (21), 7413-7417 (1987).
  20. Leventis, R., Silvius, J. R. Interactions of mammalian cells with lipid dispersions containing novel metabolizable cationic amphiphiles. Biochimica et Biophysica Acta. 1023 (1), 124-132 (1990).
  21. Behr, J. P., Demeneix, B., Loeffler, J. P., Perez-Mutul, J. Efficient gene transfer into mammalian primary endocrine cells with lipopolyamine-coated DNA. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 86 (18), 6982-6986 (1989).
  22. Gao, X., Huang, L. A novel cationic liposome reagent for efficient transfection of mammalian cells. Biochemical and Biophysical Research Communications. 179 (1), 280-285 (1991).
  23. Martin, B., et al. The design of cationic lipids for gene delivery. Current Pharmaceutical Design. 11 (3), 375-394 (2005).
  24. Yang, S. Y., et al. Comprehensive study of cationic liposomes composed of DC-Chol and cholesterol with different mole ratios for gene transfection. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 101, 6-13 (2013).
  25. Bennett, M. J., Nantz, M. H., Balasubramaniam, R. P., Gruenert, D. C., Malone, R. W. Cholesterol enhances cationic liposome-mediated DNA transfection of human respiratory epithelial cells. Bioscience Reports. 15 (1), 47-53 (1995).
  26. Son, K. K., Patel, D. H., Tkach, D., Park, A. Cationic liposome and plasmid DNA complexes formed in serum-free medium under optimum transfection condition are negatively charged. Biochimica et Biophysica Acta. 1466 (1-2), 11-15 (2000).
  27. Lonez, C., Vandenbranden, M., Ruysschaert, J. M. Cationic lipids activate intracellular signaling pathways. Advanced Drug Delivery Reviews. 64 (15), 1749-1758 (2012).
  28. Malone, R. W., Felgner, P. L., Verma, I. M. Cationic liposome-mediated RNA transfection. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 86 (16), 6077-6081 (1989).
  29. Zohra, F. T., Maitani, Y., Akaike, T. mRNA delivery through fibronectin associated liposome-apatite particles: a new approach for enhanced mRNA transfection to mammalian cell. Biological and Pharmaceutical Bulletin. 35 (1), 111-115 (2012).
  30. Rejman, J., Tavernier, G., Bavarsad, N., Demeester, J., De Smedt, S. C. mRNA transfection of cervical carcinoma and mesenchymal stem cells mediated by cationic carriers. Journal of Controlled Release. 147 (3), 385-391 (2010).
  31. Balazs, D. A., Godbey, W. Liposomes for use in gene delivery. Journal of Drug Delivery. 2011, 326497 (2011).
  32. Bulbake, U., Doppalapudi, S., Kommineni, N., Khan, W. Liposomal Formulations in Clinical Use: An Updated Review. Pharmaceutics. 9 (2), (2017).
  33. Abraham, M. K., et al. Nanoliposomes for Safe and Efficient Therapeutic mRNA Delivery: A Step Toward Nanotheranostics in Inflammatory and Cardiovascular Diseases as well as Cancer. Nanotheranostics. 1 (2), 154-165 (2017).
  34. Avci-Adali, M., et al. In vitro synthesis of modified mRNA for induction of protein expression in human cells. Journal of Visualized Experiments. 93 (93), e51943 (2014).
  35. Yang, S., Chen, J., Zhao, D., Han, D., Chen, X. Comparative study on preparative methods of DC-Chol/DOPE liposomes and formulation optimization by determining encapsulation efficiency. International Journal of Pharmaceutics. 434 (1-2), 155-160 (2012).
  36. Caracciolo, G., Amenitsch, H. Cationic liposome/DNA complexes: from structure to interactions with cellular membranes. European Biophysics Journal. 41 (10), 815-829 (2012).
  37. Farhood, H., Serbina, N., Huang, L. The role of dioleoyl phosphatidylethanolamine in cationic liposome mediated gene transfer. Biochimica et Biophysica Acta. 1235 (2), 289-295 (1995).
  38. Zhang, Y., et al. DC-Chol/DOPE cationic liposomes: a comparative study of the influence factors on plasmid pDNA and siRNA gene delivery. International Journal of Pharmaceutics. 390 (2), 198-207 (2010).
  39. Klein, R. A. The detection of oxidation in liposome preparations. Biochimica et Biophysica Acta. 210 (3), 486-489 (1970).
  40. Ming-Ren Toh, G. N. C. C. Liposomes as sterile preparations and limitations of sterilisation techniques in liposomal manufacturing. Asian Journal of Pharmaceutical Sciences. 8 (2), 88-95 (2013).
  41. Torchilin, V. P., Omelyanenko, V. G., Lukyanov, A. N. Temperature-dependent aggregation of pH-sensitive phosphatidyl ethanolamine-oleic acid-cholesterol liposomes as measured by fluorescent spectroscopy. Analytical Biochemistry. 207 (1), 109-113 (1992).
  42. Rabinovich, P. M., Weissman, S. M. Cell engineering with synthetic messenger RNA. Methods in Molecular Biology. 969, 3-28 (2013).
  43. Ishida, T., Harashima, H., Kiwada, H. Liposome clearance. Bioscience Reports. 22 (2), 197-224 (2002).
  44. Freise, J., Muller, W. H., Brolsch, C., Schmidt, F. W. “In vivo” distribution of liposomes between parenchymal and non parenchymal cells in rat liver. Biomedicine. 32 (3), 118-123 (1980).
  45. Roerdink, F., Dijkstra, J., Hartman, G., Bolscher, B., Scherphof, G. The involvement of parenchymal, Kupffer and endothelial liver cells in the hepatic uptake of intravenously injected liposomes. Effects of lanthanum and gadolinium salts. Biochimica et Biophysica Acta. 677 (1), 79-89 (1981).
  46. Wang, X., et al. Dual-Targeted Theranostic Delivery of miRs Arrests Abdominal Aortic Aneurysm Development. Molecular Therapy. 26 (4), 1056-1065 (2018).
  47. Flierl, U., et al. Phosphorothioate backbone modifications of nucleotide-based drugs are potent platelet activators. Journal of Experimental Medicine. 212 (2), 129-137 (2015).
  48. Woodle, M. C. Controlling liposome blood clearance by surface-grafted polymers. Advanced Drug Delivery Reviews. 32 (1-2), 139-152 (1998).
  49. Sawant, R. R., Torchilin, V. P. Challenges in development of targeted liposomal therapeutics. The AAPS Journal. 14 (2), 303-315 (2012).
  50. Ewert, K. K., Evans, H. M., Bouxsein, N. F., Safinya, C. R. Dendritic cationic lipids with highly charged headgroups for efficient gene delivery. Bioconjugate Chemistry. 17 (4), 877-888 (2006).
  51. Elouahabi, A., Ruysschaert, J. M. Formation and intracellular trafficking of lipoplexes and polyplexes. Molecular Therapy. 11 (3), 336-347 (2005).
  52. Hoekstra, D., Rejman, J., Wasungu, L., Shi, F., Zuhorn, I. Gene delivery by cationic lipids: in and out of an endosome. Biochemical Society Transactions. 35 (Pt 1), 68-71 (2007).
  53. Lonez, C., Vandenbranden, M., Ruysschaert, J. M. Cationic liposomal lipids: from gene carriers to cell signaling. Progress in Lipid Research. 47 (5), 340-347 (2008).
  54. Filion, M. C., Phillips, N. C. Toxicity and immunomodulatory activity of liposomal vectors formulated with cationic lipids toward immune effector cells. Biochimica et Biophysica Acta. 1329 (2), 345-356 (1997).
  55. Takano, S., Aramaki, Y., Tsuchiya, S. Physicochemical properties of liposomes affecting apoptosis induced by cationic liposomes in macrophages. Pharmaceutical Research. 20 (7), 962-968 (2003).
  56. Ciani, L., et al. DOTAP/DOPE and DC-Chol/DOPE lipoplexes for gene delivery studied by circular dichroism and other biophysical techniques. Biophysical Chemistry. 127 (3), 213-220 (2007).
  57. Benson, H. A. Elastic Liposomes for Topical and Transdermal Drug Delivery. Methods in Molecular Biology. 1522, 107-117 (2017).
  58. Johler, S. M., Rejman, J., Guan, S., Rosenecker, J. Nebulisation of IVT mRNA Complexes for Intrapulmonary Administration. PLoS One. 10 (9), e0137504 (2015).
  59. Mays, L. E., et al. Modified Foxp3 mRNA protects against asthma through an IL-10-dependent mechanism. Journal of Clinical Investigation. 123 (3), 1216-1228 (2013).
  60. Kormann, M. S., et al. Expression of therapeutic proteins after delivery of chemically modified mRNA in mice. Nature Biotechnology. 29 (2), 154-157 (2011).

Tags

Cationic NanoliposomesMRNA DeliveryTransfectionNanoparticleLipid FilmExtrusionNanolipoplexA549 Cells
check_url/fr/58444?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Citer Cet Article
Michel, T., Link, A., Abraham, M., Schlensak, C., Peter, K., Wendel, H., Wang, X., Krajewski, S. Generation of Cationic Nanoliposomes for the Efficient Delivery of In Vitro Transcribed Messenger RNA. J. Vis. Exp. (144), e58444, doi:10.3791/58444 (2019).
Télécharger la Citation
Réimpressions et Autorisations

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image