Isolement, caractérisation et différenciation des cellules souches cardiaques du coeur de souris adulte

Santosh K. Yadav; Paras K. Mishra

doi:10.3791/58448

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Article de méthode

Isolement, caractérisation et différenciation des cellules souches cardiaques du coeur de souris adulte

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DOI :

10.3791/58448

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7 janvier 2019

Santosh K. Yadav¹ , Paras K. Mishra¹^,²

¹Department of Cellular and Integrative Physiology, University of Nebraska Medical Center, ²Department of Anesthesiology, University of Nebraska Medical Center

Dans cet article

Résumé

L’objectif général du présent article est de normaliser le protocole pour l’isolement, caractérisation et différenciation des cellules souches cardiaques (CSCs) du coeur de souris adulte. Nous décrivons ici une méthode de centrifugation en gradient de densité d’isoler CCS murins et les méthodes élaborées pour la culture, la prolifération et la différenciation dans les cardiomyocytes CSC.

Résumé

Infarctus du myocarde (im) est des principales causes de morbidité et de mortalité dans le monde entier. Un objectif majeur de la médecine régénérative est de reconstituer le myocarde mort après MI. Bien que plusieurs stratégies ont été utilisées pour régénérer le myocarde, la thérapie de cellules souches reste une approche importante pour reconstituer le myocarde mort d’un cœur de MI. Accumuler des preuves suggère la présence de résidents des cellules souches cardiaques (CSCs) au coeur adult et leurs effets endocriniens et/ou paracrine sur la régénération cardiaque. Isolement de CSC et leur caractérisation et différentiation vers des cellules myocardiques, surtout les cardiomyocytes, reste toutefois un défi technique. Dans la présente étude, nous avons fourni une méthode simple pour l’isolation, la caractérisation et la différenciation des CSC du coeur de souris adulte. Nous décrivons ici une méthode de gradient de densité pour l’isolement des CSC, où le cœur est digéré par une solution II de collagénase de 0,2 %. Afin de caractériser les CCF isolés, nous avons évalué l’expression des marqueurs de la CCS/cardiaque Sca-1, NKX2-5 et GATA4 et marqueurs pluripotence/stemness OCT4, SOX2 et Nanog. Nous avons également déterminé le potentiel de prolifération des CSC isolées en les cultivant dans une boîte de Pétri et en évaluant l’expression du marqueur de prolifération Ki-67. Pour évaluer le potentiel de différenciation des CSC, nous avons sélectionné sept à dix jours cultivées CSCs. Nous transférés à une nouvelle plaque avec un moyen de différenciation du cardiomyocyte. Ils sont incubés dans un incubateur de culture cellulaire pendant 12 jours, alors que le milieu de différenciation est changé tous les trois jours. Les CCF différenciées expriment marqueurs spécifiques des myocytes cardiaques : actinine et la troponine I. Ainsi, CSCs isolés avec ce protocole ont stemness et marqueurs cardiaques, et ils ont un potentiel de prolifération et de différenciation vers la lignée cardiomyocyte.

Introduction

Maladie cardiaque ischémique, y compris des infarctus du myocarde (im), est une cause majeure de décès dans le monde¹. Thérapie de cellules souches pour régénérer le myocarde mort reste une approche importante pour améliorer la fonction cardiaque de MI coeur²^,³^,⁴^,⁵. Différents types de cellules souches ont servi à reconstituer le myocarde mort et d’améliorer la fonction cardiaque d’un cœur de MI. Ils peuvent être classés sur les cellules souches⁶ et adulte des cellules souches embryonnaires. Da....