Isolation, Fixation et l’Immunofluorescence imagerie des glandes surrénales de souris

Isabella Finco; Gary D. Hammer

doi:10.3791/58530

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Article de méthode

Isolation, Fixation et l’Immunofluorescence imagerie des glandes surrénales de souris

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DOI :

10.3791/58530

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2 octobre 2018

Isabella Finco¹ , Gary D. Hammer¹^,²^,³^,⁴^,⁵

¹Department of Internal Medicine (Division of Metabolism, Endocrinology, and Diabetes), University of Michigan Health System, ²Department of Cell and Developmental Biology, University of Michigan Health System, ³Department of Molecular and Integrative Physiology, University of Michigan Health System, ⁴Endocrine Oncology Program, University of Michigan Health System, ⁵Comprehensive Cancer Center, University of Michigan Health System

Dans cet article

Résumé

Nous présentons ici une méthode pour isoler les glandes surrénales de souris, difficulté les tissus, leur section et effectuez l’immunofluorescence souillant.

Résumé

Immunofluorescence est une technique bien établie pour la détection des antigènes dans les tissus avec l’emploi d’anticorps conjugués fluorochrome et dispose d’un large éventail d’applications. Détection d’antigènes permet la caractérisation et l’identification de plusieurs types de cellules. Située au-dessus des reins et encapsulé par une couche de cellules mésenchymateuses, la glande surrénale est un organe endocrine composé de deux tissus différents avec différentes origines embryologiques, le cortex externe mésonéphriques dérivés mesoderm intermédiaire et les neurones medulla interne dérivée de crête. La corticosurrénale sécrète des stéroïdes (c.-à-d., les minéralocorticoïdes, glucocorticoïdes, hormones sexuelles), tandis que la médullosurrénale produit des catécholamines (c.-à-d., adrénaline, noradrénaline). En effectuant une recherche surrénalienne, il est important d’être capable de distinguer les cellules uniques avec des fonctions différentes. Ici, nous fournissons un protocole mis au point dans notre laboratoire qui décrit une série d’étapes séquentielles requises pour l’obtention d’immunofluorescence souillant pour caractériser les types de cellules de la glande surrénale. Nous nous concentrons d’abord sur la dissection des souris les glandes surrénales, l’élimination microscopique des graisses periadrenal suivie de la fixation, le traitement et la paraffine incorporant des tissus. Nous décrivons ensuite la découpe des blocs de tissus avec un microtome rotatif. Enfin, nous détaillons un protocole pour l’immunofluorescence des glandes surrénales que nous avons élaborée pour minimiser les anticorps non-spécifiques et autofluorescence afin d’obtenir un signal optimal.

Introduction

Immunohistochemistry est une technique de détection de composants tissulaires avec l’utilisation d’anticorps dirigés contre des molécules cellulaires spécifiques et des techniques de coloration ultérieures pour détecter les anticorps conjugués¹. Cette procédure d’immunohistochemical nécessite une fixation spécifique et traitement des tissus qui sont souvent empiriquement déterminées pour l’antigène spécifique, les tissus et les anticorps utilisés². La fixation est essentielle préserver l’état « original » du tissu et ainsi maintenir intact cellulaires et des structures subcellulaires et profils d’expression. Plus de trai....