Ultra-som de alta frequência para a análise do desenvolvimento Fetal e placentário na Vivo
Summary
Aqui descrevemos a técnica de ultra-som de alta frequência para análise na vivo de fetos em camundongos. Esse método permite o acompanhamento de fetos e a análise dos parâmetros da placenta, bem como o fluxo de sangue materno e fetal durante a gravidez.
Abstract
Ecografia é um método usado para detectar anomalias de órgãos e tumores nos tecidos humanos e animais. O método é não-invasivo, indolor e inofensivo, e a aplicação é fácil, rápido e pode ser feita em qualquer lugar, mesmo com dispositivos móveis. Durante a gravidez, o ecografia canonicamente é usada para acompanhar atentamente o desenvolvimento fetal. A técnica é importante para avaliar a restrição de crescimento intra-uterino (IUGR), uma complicação de gravidez com a curto e longo prazo consequências da saúde para a mãe e o feto. Compreender o processo de IUGR é indispensável para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas eficazes.
O sistema de ultra-som utilizado neste manuscrito é um dispositivo de ultra-som produzido para a análise de pequenos animais e pode ser usado em várias áreas de pesquisa, incluindo a investigação de gravidez. Aqui nós descrevemos o uso do sistema de análise em vivo de fetos de natural killer (NK) célula/mastócito (MC)-deficientes mães que dão à luz filhotes crescimento restrito. O protocolo inclui a preparação do sistema, manipulação dos ratos antes e durante as medições e o uso do modo-B, color doppler e modo doppler de onda de pulso. Foram analisados tamanho fetal, tamanho da placenta e fornecimento de sangue para o feto. Encontramos tamanhos reduzidos de implantação e menores placentas em camundongos NK/MC-deficiente do meio da gestação em diante. Além disso, MC/NK-deficiência foi associado ausente e inverteu o fluxo de diastólica final no fetal umbilicalis mesentéricos(UmA) e um índice de resistência elevada. Os métodos descritos no protocolo podem ser facilmente usados para tópicos relacionados e não relacionados à pesquisa.
Introduction
Ultra-som é ondas sonoras com frequências acima da faixa audível do ouvido humano, superior a cerca de 20 kHz1. Animais como morcegos, país de Gales, golfinhos2,3, ratos4, ratos5, e lémures rato6 todos usar ultra-som para orientação ou comunicação. Seres humanos aproveitam-se do ultra-som para diversas aplicações técnicas e médicas. Um aparelho de ultra-som é capaz de criar a onda sonora e distribuir e representar o sinal. Se o ultra-som encontra um obstáculo, o som é refletido, absorvido ou atravessá-la. A aplicação do ultra-som como um método de imagem, chamada ecografia, é usada para a análise dos tecidos orgânicos em humanos ou medicina veterinária como o coração (ecocardiografia)7,8, pulmão9, glândula tireoide10 , rins11e13.12,o trato urinário e reprodutivo; detecção de cálculos biliares tumores de14 e15; e a avaliação da perfusão dos vasos sanguíneos ou órgãos de16,17. Ultrassom é um método padrão no pré-natal durante a gravidez, e fetal do desenvolvimento incapacidades ou deficiências podem ser reconhecidas cedo. Especificamente, o crescimento de um feto é estreitamente monitorado em intervalos regulares para reconhecer um possível IUGR. Finalmente, o fluxo sanguíneo fetal pode ser monitorado, como isto pode apontar crescimento restrições18,19,20,21.
Uma grande vantagem da ultra-sonografia em comparação com outros métodos, como radiografia é a inocuidade do som dos tecidos para ser analisado. Este método fácil e rápido é não-invasivo, indolor e pode ser usado várias vezes. O gasto inicial de um aparelho de ultra-som é caro; no entanto, os materiais consumíveis necessários são baratos. O sistema de ultra-som utilizado neste manuscrito é apropriado para uma variedade de modelos animais (i.e., ratos e peixes) enquanto que para os seres humanos, um dispositivo de ultra-som requer uma frequência de 3-15 mHz, uma frequência de 15-70 mHz é necessária para os ratos.
O presente manuscrito descreve um protocolo para o uso do modo B, modo doppler cor e modo de onda de pulso doppler. A descrição inclui preparação de ratos, bem como desempenho, aquisição de dados e armazenamento. Este método foi cepas de rato com êxito aplicada para diferentes gestacional em todos os dias e pode ser usado para investigar o desenvolvimento fetal e da placenta, bem como os parâmetros do sangue materno e fetal. Aqui, todos os aplicativos estão explicados com base em nossos estudos empregando ratos grávidas MC/NK-deficiente e controle.
Protocol
Representative Results
Discussion
Usando nosso sistema de ultra-som, demonstrámos restrição de crescimento fetal em mães MC/NK-deficiente de gd10 na. Além disso, no gd10 e 12, observamos dimensões reduzidas da placenta e no gd14 a ausência ou a reversão de fluxo diastólico de final nas UmAs de alguns fetos de ratos uMC/uNK-deficiente. Este sinal de vascularização pobre foi associado com um índice de resistência significativa das artérias indicando IUGR. Resultados confirmam o papel importante das uMCs e uNKs durante a gravidez e o bem-estar…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Muitos agradecimentos a empresa de instrumento Imaging (especialmente a Magdalena Steiner, Katrin Suppelt e Sandra Meyer) pelo seu apoio rápido e agradável e por responder todas as perguntas sobre o sistema de imagem e seu uso rapidamente e completamente. Nós estamos gratos ao Prof Hans-Reimer Rodewald e Dr. Thorsten Feyerabend (DKFZ Heidelberg, Alemanha) para fornecer a colônia Cpa3. Além disso, agradecemos a Stefanie Langwisch, quem estava encarregado das colônias de rato e quem gerou as imagens na Figura 1.
O trabalho e o sistema da imagem latente foram financiados por subsídios da Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) para A.C.Z (ZE526/6-1 e AZ526/6-2) que eram projetos incorporados em DFG prioridade programa 1394 “mastócitos na saúde e na doença.”
Materials
| LEAF anti-Maus CD122 (IL-2Rb) | BioLegend | 123204 | Klon TM-β1; 500 µg |
| Vevo 2100 System | FujiFilm VisualSonics Inc. | Transducer MS550D-0421 | |
| Vevo LAB Software | FujiFilm VisualSonics Inc. | ||
| Isoflurane | Baxter | PZN: 6497131 | |
| Electrode gel | Parker | 12_8 | |
| Surgical tape | 3M Transpore | 1527-1 | |
| Eye cream | Bayer | PZN: 1578675 | |
| Cotton tipped applicators | Raucotupf | 11969 | 100 pieces |
| Depilatory cream | Reckitt Benckiser | 2077626 | |
| Compresses | Nobamed Paul Danz AG | 856110 | 10 x 10 cm |
| Ultrasound gel | Gello GmbH | 246000 |
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