Protéine Kinase C-delta inhibiteur Peptide Formulation utilisant des nanoparticules d’or

Summary

Nous avons déjà utilisé un hybride de peptide or nanoparticule à livrer par voie intraveineuse un peptide synthétique, un inhibiteur de protéine kinase C-delta, qui a réduit la lésion pulmonaire aiguë induite par l’ischémie-reperfusion. Ici, nous montrons le protocole détaillé de la formulation de médicaments. Autres peptides intracellulaires peuvent être formulées de la même façon.

Abstract

Inhibiteur de la protéine kinase C-delta (PKCδi) est un médicament prometteur pour prévenir toute blessure induite par l’ischémie-reperfusion orgue. Il est souvent conjugué à un peptide pénétration cellulaire, TAT, pour la délivrance intracellulaire. TAT a toutefois montré des activités biologiques non spécifiques. Nanoparticules d’or (PNB) peuvent servir comme entreprises de livraison de drogue sans toxicité reconnue. Par conséquent, nous avons utilisé un hybride de GNP/peptide pour livrer PKCδi. Deux courtes peptides (P2 : CAAAAE et P4 : CAAAAW), dans une proportion de 95 : 5, ont été utilisées pour modifier les propriétés de surface du PNB. PNB conjugués avec PKCδi (GNP/PKCi) sont stables dans l’eau distillée, 0,9 % NaCl et une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) contenant de l’albumine de sérum bovin ou de sérum de veau fœtal. Une injection intraveineuse de GNP-PKCi a déjà été démontrée pour prévenir l’ischémie-reperfusion du poumon. Cet article décrit un protocole pour formuler le GNP/PKCi et évaluer les propriétés physico-chimiques du GNP/PKCi. Nous avons utilisé des méthodes similaires à formuler d’autres médicaments à base de peptides dont le PNB. Cet article sera je l’espère attirer davantage l’attention à cette technologie de délivrance intracellulaire de nouveaux médicaments et de ses applications in vivo.

Introduction

Transplantation pulmonaire enregistre les patients avec la phase terminale de maladie pulmonaire¹. Toutefois, des complications graves après une greffe de poumon restent un obstacle. Dans les premiers stades, consécutive à une transplantation pulmonaire, dysfonction du greffon primaire est le plus nocif de la complication¹, et sa cause principale est l’ischémie-reperfusion (IR)-induite de lésion pulmonaire aiguë².

Sous conservation froide, métabolisme dans un poumon de donneur est limité à un niveau très bas. Toutefois, les espèces réactives de l’oxygène et la synthèse ....

Protocol

1. préparation des Solutions de Peptide

1. Récupérer les peptides (P2 : CAAAAE, P4 : CAAAAW, PKCδi : CSFNSYELGSL) du congélateur-20 ° C et décongélation à température ambiante (RT).
   Remarque : Conservez la bouteille fermée pour empêcher l’humidité de condensation sur les peptides.
2. Peser 0,01 g de chaque peptide sur un microscopique. Mettre chaque peptide dans un tube conique séparé de 50 mL.
3. Ajouter 18,74 mL d’eau désionisée de (DI) dans le tube de P2.
4. Ajouter 16,93 mL de l’eau distillée dans le tube de P4.
5. Ajouter 8,21 mL d’acétonitrile 50 % dilué dans l’eau distillée au tube PKCδi.
6. Vortex brièvement les sol....

Results

Il faut pour évaluer les propriétés biophysiques de l’hybride de GNP/PKCi, comme GNP tend à agrégat dans le solvant. Lorsque GNP est agrégé, la couleur de la solution passe du rose au violet (Figure 1 a). Spectrophotomètre UV-Vis est capable de détecter les changements plus sensiblement. Si le GNP/PKCi n’est pas agrégé le pic d’absorption doit être à 525 nm (Figure 1 b). Si le PNB est agrégé, le pic d’absorption sera déplacé vers.......

Discussion

Afin d’assurer la bonne formulation, il est crucial que la solution de δPKCi subit l’étape de sonication décrite au point 1.6. Séquence peptidique δPKCi contient des portions hydrophobes, donc un sonicateur aide à dissoudre PKCi dans la solution de 50 % d’acétonitrile. En outre, il est très important de mélanger le solvant méticuleusement, comme indiqué dans l’étape 2.7.  Le GNP/PKCi hybride ne sera pas bien formulé si ces étapes ne sont pas faites correctement, en raison de l’agrégation du peptide δPKCi

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Peptide d’acide glutamique chargé négativement (P2)	CanPeptide		Séquence : CAAAAE-NH2 Durée : 6aa Modification : C-terminal amidation Quantité : 50mg Pureté : >95 %
peptide tryptophane hydrophobe (P4)	CanPeptide		Séquence : CAAAAW-NH2 Longueur : 6aa Modification : C-terminal amidation Quantité : 50mg Pureté : >95 %
&delta ; Peptide PKCi	CanPeptide		Seqeuence : CSFNSYELGSL-NH2 Longueur : 11aa Modification : C-terminal amidation Quantité : 50mg Pureté : >95 %
Tube conique(50ml)	Corning Life Sciences	3582070
Tube conique(15ml)	Corning Life Sciences	3582096
Acetonitrile	Sigma-Aldrich	271004-100ML
Sonicateur	Branson Ultrasonics Corp.	Branson 2510MTH
Microtube	Diamed.ca	AD 150-N
Solution de nanoparticules	d’or Ted Pella	15705-5	La taille d’une particule est de 20nm
Plate-forme à bascule shaker	VWR international	40000-304  ;
Microcentrifugeuse	Eppendorf	5417R
Cuvette Acryl	SARSREDT	67.758
Spectrophotomètre UV-Vis	Agilent	Caty 60 UV-Vis