Определение анти Аквапорин-4 иммуноглобулина G сыворотку крови человека по Cell-based Assay

Summary

На основе клеток пробирного является широко используемым методом для обнаружения сыворотка анти Аквапорин-4 иммуноглобулина G. Этот метод может применяться для клинической диагностики и научных исследований нейромиелит оптического спектра расстройств.

Abstract

Анти Аквапорин-4 (AQP4) иммуноглобулина G (IgG) является основной диагностики biomarker для нейромиелит optica спектра расстройств (NMOSD). На основе клеток пробирного (ЦБА) является широко используемым методом для обнаружения анти AQP4 IgG в сыворотке крови человека с высокой чувствительностью и специфичностью. Вкратце, сыворотка анти AQP4 IgG захвачен AQP4-transfected клеток, что является фиксированной на биочип затем определяется флуоресцеин, меченного вторичное антитело. Микроскопии флуоресцирования используется для визуализации флюоресценция, и интенсивность флуоресценции оценивается по крайней мере два опытных клиницистов. Окончательный диагноз NMOSD может производиться на основе на комбинации результаты обнаружения анти AQP4 IgG, клинические проявления и перенёс выводов. По данным предыдущих исследований ЦБА чувствительными, чем другие методы обнаружения анти AQP4 IgG, и оно может применяться для клинической диагностики и исследования NMOSD. Этот метод имеет ограничения; например в международном масштабе по оценке сыворотке крови анти AQP4 IgG титры по-прежнему отсутствует. Здесь описан подробный протокол для сыворотки крови человека анти AQP4 IgG обнаружения с помощью ЦБА.

Introduction

Сыворотка AQP4 IgG-это основные диагностические biomarker для нейромиелит optica спектра расстройств (NMOSD)¹. Пробирного ячейки на основе (ЦБА) является широко используемым анти AQP4 метод обнаружения IgG с высокой чувствительностью и специфичностью. Здесь представлен подробный протокол для АЗВ.

AQP4, белок канала воды, имеет шесть единиц, охватывающих мембраны и два винтовых доменов, вокруг один водный поры². Анти-AQP4 IgG участвует в патогенезе NMOSD через привязку к ее целевому объекту AQP4, который расположен главным образом на endfeet астроциты³. Было показано, что анти AQP4 IgG положительный примерно две трети пациентов NMOSD⁴. В самых последних международных диагностические критерии для NMOSD считается, что основные диагностические биомаркер⁵анти AQP4 IgG. В этой связи крайне важно создать надежный протокол обнаружить сыворотке человека анти AQP4 IgG и облегчения клинический диагноз NMOSD.

В настоящее время доступны различные методы обнаружения анти AQP4 IgG, такие как ЦБА, на основе ткани пробирного, энзим соединенный assay иммуносорбента и потока цитометрии^6,7. ЦБ Азербайджана занято EU90 клетки, которые являются transfected с человеческой AQP4, чтобы захватить анти AQP4 IgG. Захваченные анти AQP4 IgG обнаружены флуоресцентные вторичные антитела и впоследствии визуализированное микроскопии. Накопление доказательств показал, что АЗВ является более чувствительной, чем другие анти AQP4 IgG определение методов^6,7. По словам мета анализ чувствительность и специфичность ЦБА было показано, что 76% и 99%, которые были выше, чем на основе ткани и иммуноферментного assays⁶. Кроме того многоцентровое Сравнение диагностических анализов анти AQP4 IgG был проведены⁷. В общей сложности 193 исследования, предметы из 15 европейских диагностических центров были зачислены⁷. Четыре различные методы были использованы для выявления сыворотка анти AQP4 IgG⁷. Было продемонстрировано, что куб был чувствительными, чем другие методы⁷. Как AQP4 выражается в виде двух основных изоформ (AQP4-M1 и AQP4-M23), анти AQP4 IgG захват клеток является transfected с AQP4-M1 или AQP4-M23. Однако какой тип захвата клеток — лучше остается спорным. Одно расследование поддерживает AQP4-M1 на базе ЦБ⁸, в то время как другие указали, что AQP4-M23 основе АЗВ является более^7,9,10. Однако на основе AQP4-M23 ЦБА может дать ложные положительные результаты благодаря неспецифических IgG привязки⁸. Jarius и др.. ¹¹ сообщили, что не было никаких существенных различий в показатели выявления IgG анти AQP4 AQP4-M1 и на основе AQP4-M23 КТД.

В резюме, сыворотка анти AQP4 IgG-это ядро biomarker для NMOSD. КУБ имеет выше специфичность и чувствительность, чем другие методы обнаружения анти AQP4 IgG. Она остается спорным ли AQP4-M1 – или AQP4-M23-на основе ЦБА лучше. В этой статье описан подробный протокол для АЗВ, основанные на AQP4-M1, которые можно применить к клинической диагностики и исследования NMOSD.

Protocol

Эта процедура была утверждена Комитетом этики первой больнице Цзилинь университета и была исполнена на примерно 1500 темы. 1. пациент подачи и забора образца крови Примените Лаборатория обнаружения сыворотки, анти AQP4 IgG к клинике пациентов с главным жалобы и симптомы,…

Representative Results

Используя процедуру, описанную здесь, конкретных анти AQP4 IgG в сыворотке крови является обнаруживаемой. Во время процедуры, предварительно разбавленного образцов, положительный контроль и отрицательный контроль были добавлены к реакции полям, которые содержат transfected ?…

Discussion

Мы описали широко доступный метод для обнаружения анти AQP4 IgG в сыворотке крови человека. Анти-AQP4 IgG тесно связана с NMOSD, и создание надежных анти AQP4 метод обнаружения IgG имеет решающее значение для клинической диагностики NMOSD. Во-первых анти AQP4 IgG специфичен для NMOSD. Рассеянный склероз явля?…

Materials

Anti-aquaporin-4 IIFT	Euroimmun	FA 1128-2005-50	Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium.
CellSens Dimension	OLYMPUS	N/A	photograph software
Gel & clot activator tube	Improve medical	623040202	From a local Chinese company