مصل الدم البشري المضادة-أقوابورين-4 غلوبيولين مناعي G الكشف بتحليل يستند إلى الخلية
Summary
تحليل يستند إلى الخلية أسلوب مستخدمة على نطاق واسع للكشف عن مصل الغلوبولين المناعي المضادة-أكوابورين-4 غ. ويمكن تطبيق هذا الأسلوب للتشخيص السريري والأبحاث العلمية من اضطرابات الطيف البصري المياليني.
Abstract
غلوبيولين مناعي المضادة-أكوابورين-4 (AQP4) ز (IgG) هو العلامات البيولوجية الأساسية التشخيصية لاضطرابات الطيف البصري المياليني (نموسد). تحليل يستند إلى الخلية (CBA) أسلوب مستخدمة على نطاق واسع لكشف مفتش مكافحة AQP4 في مصل الدم البشري مع حساسية عالية وخصوصية. بإيجاز، المصل مفتش مكافحة AQP4 يتم التقاطها بواسطة الخلية AQP4 transfected ثابتة على biochip ثم الكشف عنها بواسطة جسم ثانوي المسمى فلوريسسين. يستخدم مجهر الأسفار لتصور الأسفار، وشدة الأسفار يتم تقييمها من قبل اثنين على الأقل من الأطباء ذوي الخبرة. يمكن إجراء تشخيص نهائي من نموسد تقوم على المزيج من AQP4 المضادة IgG الكشف عن النتائج والمظاهر السريرية والنتائج نيوروراديولوجيكال. ووفقا للدراسات السابقة، CBA أكثر حساسية وتحديداً من أساليب الكشف عن مفتش مكافحة AQP4 أخرى، وأنه يمكن تطبيقها على كل من التشخيص السريري والدراسات المتعلقة نموسد. يحتوي الأسلوب على القيود؛ على سبيل المثال، لا تزال تفتقر إلى نطاق دولي لتقييم التتر مفتش مكافحة AQP4 المصل. ويرد هنا، بروتوكول مفصل لمصل الدم البشري AQP4 المضادة مفتش الكشف عن استخدام تحليل التكاليف والمنافع.
Introduction
مفتش AQP4 المصل هو العلامات البيولوجية أساسية تشخيص المياليني البصري طيف اضطرابات (نموسد)1. تحليل يستند إلى الخلية (CBA) أسلوب الكشف عن مفتش AQP4 المضادة مستخدمة على نطاق واسع مع حساسية عالية وخصوصية. هنا، هو عرض بروتوكول مفصل لتحليل التكاليف والمنافع.
AQP4، بروتين قناة مياه، ست وحدات تمتد من الغشاء والمجالين حلزونية المحيطة واحد مائي المسامية2. مفتش مكافحة AQP4 تشارك في الآلية المرضية نموسد من خلال الربط إلى هدفها AQP4، التي تقع أساسا في اندفيت أستروسيتيس3. قد تبين أن مفتش مكافحة–AQP4 إيجابية في حوالي ثلثي المرضى نموسد4. في أحدث معايير التشخيص الدولي نموسد، يعتبر مفتش مكافحة AQP4 العلامات البيولوجية تشخيصية أساسية5. وفي هذا الصدد، من الأهمية بمكان وضع بروتوكول يمكن الاعتماد عليها لاكتشاف مصل الدم البشري مفتش مكافحة AQP4 وتيسير التشخيص السريري نموسد.
حاليا مختلف أساليب الكشف مفتش مكافحة AQP4 المتاحة، مثل المصرف المركزي والتحليل القائم على الأنسجة والمرتبط بالانزيم المرتبط بالانزيم والتدفق الخلوي6،7. وتوظف CBA EU90 الخلايا التي يتم transfected مع AQP4 البشرية، للقبض على مفتش مكافحة AQP4. مفتش مكافحة–AQP4 القبض على الكشف عنها بواسطة الأجسام المضادة الثانوية الفلورسنت وتصور بعد ذلك بالفحص المجهري. تتراكم الأدلة أظهرت أن المصرف المركزي أكثر حساسية وتحديداً من الأخرى المضادة AQP4 كشف مفتش أساليب6،7. ووفقا لتحليل تلوي، حساسية وخصوصية CBA قد تبين أن 76 في المائة و 99 في المائة، التي كانت أعلى من النسيج المستندة والمرتبط بالانزيم المرتبط فحوصات6. وعلاوة على ذلك، تمت مقارنة متعددة المراكز لفحوصات تشخيصية لمفتش مكافحة–AQP4 أجرى7. التحق ما مجموعة 193 دراسة المواضيع من مراكز التشخيص الأوروبية 157. واستخدمت أربعة أساليب مختلفة لكشف مفتش مكافحة AQP4 المصل7. وثبت أن المصرف المركزي كان أكثر حساسية وتحديداً من الأساليب الأخرى7. كما يتم التعبير عن AQP4 باثنين من isoforms الرئيسية (AQP4-M1 و AQP4-M23)، هو ترانسفيكتيد AQP4 المضادة مفتش القبض على خلية مع AQP4 M1 أو AQP4-M23. ومع ذلك، هو أي نوع من القبض على خلية أفضل ما زال مثيرا للجدل. ودعمت التحقيق واحد AQP4-M1 على أساس CBA8، بينما قد أشار آخرون إلى أن أساس AQP4-M23 CBA هو أفضل7،،من910. ومع ذلك، قد تسفر عن CBA AQP4-M23-تعتمد نتائج إيجابية كاذبة بسبب مفتش غير محدد ملزم8. Jarius et al. 11 أفادت بأنه لا يوجد اختلاف كبير في معدلات الكشف عن مفتش مكافحة AQP4 بين AQP4-M1 والتحرشات AQP4-M23-تعتمد.
في موجزة، الأمصال المضادة-AQP4 IgG هو العلامات البيولوجية أساسية نموسد. وقد CBA أعلى من خصوصية وحساسية من أساليب الكشف عن مفتش مكافحة AQP4 أخرى. ويبقى المثير للجدل عما إذا كان AQP4-M1-أو AQP4-M23-تعتمد CBA أفضل. في هذه المقالة، بروتوكول مفصل ل CBA AQP4-M1-تعتمد يرد، التي يمكن أن تنطبق على الدراسات نموسد والتشخيص السريري.
Protocol
Representative Results
Discussion
لقد قمنا بوصف طريقة متاحة على نطاق واسع لكشف مفتش مكافحة AQP4 في مصل الدم البشري. مفتش مكافحة AQP4 يرتبط ارتباطاً وثيقا نموسد، وإنشاء أسلوب الكشف عن مفتش AQP4 المضادة موثوق بها أمر حاسم للتشخيص السريري نموسد. أولاً، مفتش مكافحة AQP4 محددة نموسد. التصلب المتعدد هو أيضا مرض المناعة بوساطة من الجهاز ?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
الكتاب ممتنون للدعم من المنح المقدمة من مؤسسة العلوم الصينية الوطنية (رقم 31600820)، وأن الصحة ولجنة تنظيم الأسرة لمقاطعة جيلين (لا 2016Q036)، والعلم والتكنولوجيا تخطيط المشروع من مقاطعة جيلين (رقم 20180520110JH).
Materials
| Anti-aquaporin-4 IIFT | Euroimmun | FA 1128-2005-50 | Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium. |
| CellSens Dimension | OLYMPUS | N/A | photograph software |
| Gel & clot activator tube | Improve medical | 623040202 | From a local Chinese company |
References
- Zekeridou, A., Lennon, V. A. Aquaporin-4 autoimmunity. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 2 (4), 110 (2015).
- Ho, J. D., et al. Crystal structure of human aquaporin 4 at 1.8 A and its mechanism of conductance. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (18), 7437-7442 (2009).
- Takeshita, Y., et al. Effects of neuromyelitis optica-IgG at the blood-brain barrier in vitro. in vitro.Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (1), 311 (2016).
- Sato, D. K., et al. Distinction between MOG antibody-positive and AQP4 antibody-positive NMO spectrum disorders. Neurology. 82 (6), 474-481 (2014).
- Wingerchuk, D. M., et al. International consensus diagnostic criteria for neuromyelitis optica spectrum disorders. Neurology. 85 (2), 177-189 (2015).
- Ruiz-Gaviria, R., et al. Specificity and sensitivity of aquaporin 4 antibody detection tests in patients with neuromyelitis optica: A meta-analysis. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 4 (4), 345-349 (2015).
- Waters, P., et al. Multicentre comparison of a diagnostic assay: aquaporin-4 antibodies in neuromyelitis optica. Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 87 (9), 1005-1015 (2016).
- Fryer, J. P., et al. AQP4 autoantibody assay performance in clinical laboratory service. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 1 (1), 11 (2014).
- Long, Y., et al. Aquaporin-4 antibody in neuromyelitis optica: re-testing study in a large population from China. The International Journal of Neuroscience. 127 (9), 790-799 (2017).
- Pisani, F., et al. Aquaporin-4 autoantibodies in Neuromyelitis Optica: AQP4 isoform-dependent sensitivity and specificity. PloS One. 8 (11), 79185 (2013).
- Jarius, S., et al. Aquaporin-4 antibody testing: direct comparison of M1-AQP4-DNA-transfected cells with leaky scanning versus M23-AQP4-DNA-transfected cells as antigenic substrate. Journal of Neuroinflammation. 11, 129 (2014).
- Juryńczyk, M., Craner, M., Palace, J. Overlapping CNS inflammatory diseases: differentiating features of NMO and MS. Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 86 (1), 20-25 (2015).
- Chen, H., et al. Clinical Features of Patients with Multiple Sclerosis and Neuromyelitis Optica Spectrum Disorders. Chinese Medical Journal. 129 (17), 2079-2084 (2016).
- Majed, M., Fryer, J. P., McKeon, A., Lennon, V. A., Pittock, S. J. Clinical utility of testing AQP4-IgG in CSF: Guidance for physicians. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 3 (3), 231 (2016).
- Jarius, S., et al. Cerebrospinal fluid antibodies to aquaporin-4 in neuromyelitis optica and related disorders: frequency, origin, and diagnostic relevance. Journal of Neuroinflammation. 7, 52 (2010).
- Asgari, N., et al. Disruption of the leptomeningeal blood barrier in neuromyelitis optica spectrum disorder. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (4), 343 (2017).
- Kim, H. J., et al. MRI characteristics of neuromyelitis optica spectrum disorder: an international update. Neurology. 84 (11), 1165-1173 (2015).
- Jarius, S., et al. MOG encephalomyelitis: international recommendations on diagnosis and antibody testing. Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 134 (2018).
- Narayan, R., et al. MOG antibody disease: A review of MOG antibody seropositive neuromyelitis optica spectrum disorder. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 25, 66-72 (2018).
- Ogawa, R., et al. MOG antibody-positive, benign, unilateral, cerebral cortical encephalitis with epilepsy. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (2), 322 (2017).
- Valentino, P., Marnetto, F., Granieri, L., Capobianco, M., Bertolotto, A. Aquaporin-4 antibody titration in NMO patients treated with rituximab: A retrospective study. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (2), 317 (2016).
- Kessler, R. A., et al. Anti-aquaporin-4 titer is not predictive of disease course in neuromyelitis optica spectrum disorder: A multicenter cohort study. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 17, 198-201 (2017).
- Mealy, M. A., et al. Aquaporin-4 serostatus does not predict response to immunotherapy in neuromyelitis optica spectrum disorders. Multiple Sclerosis. , (2017).
- Yang, Y., et al. The role of aquaporin-4 antibodies in Chinese patients with neuromyelitis optica. Journal of Clinical Neuroscience. 20 (1), 94-98 (2013).
- Kitley, J., et al. Prognostic factors and disease course in aquaporin-4 antibody-positive patients with neuromyelitis optica spectrum disorder from the United Kingdom and Japan. Brain. 135 (6), 1834-1849 (2012).
