Rilevamento di immunoglobulina Anti-acquaporina-4 G di siero umano dall'analisi Cell-based

Summary

Test basati su celle è un metodo ampiamente utilizzato per rilevare l’immunoglobulina del siero anti-acquaporina-4 G. Questo metodo potrebbe essere applicato a diagnosi clinica e ricerche scientifiche di neuromielite ottica dello spettro autistico.

Abstract

Anti-acquaporina-4 (AQP4) dell’immunoglobulina G (IgG) è il biomarcatore diagnostico di nucleo per disordini di spettro di optica di neuromyelitis (NMOSD). L’analisi basata sulle celle (CBA) è un metodo ampiamente usato per rilevare anti-AQP4 IgG nel siero umano con alta sensibilità e specificità. Brevemente, siero anti-AQP4 IgG è catturato dai cellule trasfettate con AQP4 che sono fissata sul biochip poi rilevata da un anticorpo secondario marcato con fluoresceina. Microscopia di fluorescenza è utilizzata per visualizzare la fluorescenza e l’intensità di fluorescenza viene valutato da almeno due esperti clinici. Una diagnosi finale di NMOSD può essere fatta basata sulla combinazione di risultati di rilevamento di IgG anti-AQP4, manifestazioni cliniche e risultati neuroradiological. Secondo studi precedenti, CBA è più sensibile e specifico rispetto ad altri metodi di rilevamento di IgG anti-AQP4 e può essere applicato alla diagnosi clinica e di studi di NMOSD. Il metodo presenta limitazioni; ad esempio, la scala internazionale per valutare i titoli di IgG del siero anti-AQP4 è ancora carente. Qui, un protocollo dettagliato per il rilevamento di IgG anti-AQP4 siero umano utilizzando CBA è descritto.

Introduction

Siero AQP4 IgG è un biomarcatore diagnostico di nucleo per neuromielite optica spettro disturbi (NMOSD)¹. L’analisi basata sulle celle (CBA) è un metodo di rilevamento di IgG anti-AQP4 ampiamente usato con alta sensibilità e specificità. Qui, è stato introdotto un protocollo dettagliato per CBA.

AQP4, una proteina di canale di acqua, ha sei unità dimisurazione e due domini elicoidale che circonda uno acquosa²del poro. IgG anti-AQP4 è coinvolto nella patogenesi della NMOSD tramite l’associazione alla relativa destinazione AQP4, che si trova principalmente su endfeet di astrociti³. Esso ha dimostrato che le IgG anti-AQP4 è positivo in circa due terzi di NMOSD pazienti⁴. Nei più recenti criteri diagnostici internazionali per NMOSD, IgG anti-AQP4 è considerato essere un biomarcatore diagnostico core⁵. A questo proposito, è fondamentale stabilire un protocollo affidabile per rilevare siero umano IgG anti-AQP4 e facilitare la diagnosi clinica di NMOSD.

Attualmente, diversi metodi di rilevamento di IgG anti-AQP4 sono disponibili, come CBA, analisi tissutali, analisi enzima-collegata dell’immunosorbente e flusso cytometry^6,7. CBA impiega celle EU90, che transfected con AQP4 umana, per catturare le IgG anti-AQP4. Le IgG anti-AQP4 catturato viene rilevata da fluorescenti anticorpi secondari e successivamente visualizzate da microscopia. Raccogliendo la prova ha dimostrato che CBA è più sensibile e specifico rispetto altri anti-AQP4 IgG rilevamento metodi^6,7. Secondo una meta-analisi, la sensibilità e la specificità del CBA sono stati indicati per essere 76% e 99%, che erano superiori di tissutali e⁶di analisi enzima-collegata dell’immunosorbente. Inoltre, un confronto multicentrico di saggi diagnostici di IgG anti-AQP4 era condotto⁷. Un totale di 193 Studio soggetti da 15 centri diagnostici europei sono stati arruolati⁷. Quattro diversi metodi sono stati utilizzati per rilevare siero anti-AQP4 IgG⁷. È stato dimostrato che la CBA era più sensibile e specifico rispetto gli altri metodi⁷. AQP4 è espressa come due isoforme principali (AQP4-M1 e AQP4-M23), delle cellule di cattura di IgG anti-AQP4 sono trasfettate con AQP4-M1 o AQP4-M23. Tuttavia, quale tipo di cella di cattura è migliore rimane discutibile. Una ricerca ha sostenuto AQP4-M1 basata CBA⁸, mentre altri hanno indicato che l’AQP4-M23 basato CBA è meglio^7,9,10. Tuttavia, basati su AQP4-M23 CBA può dare risultati falsamente positivi a causa di non specifico IgG associazione⁸. Jarius et al.. ¹¹ ha riferito che non c’era differenza significativa nei tassi di rilevamento di IgG anti-AQP4 tra AQP4-M1 ed eventuali CBA AQP4-M23-basato.

In sintesi, siero anti-AQP4 IgG è un biomarcatore di nucleo per NMOSD. CBA ha maggiore specificità e sensibilità rispetto ad altri metodi di rilevamento di IgG anti-AQP4. Rimane controverso se AQP4-M1 AQP4 M23-basato o CBA è meglio. In questo articolo, è descritto un protocollo dettagliato per CBA AQP4-M1-base, che può essere applicato a diagnosi clinica e studi di NMOSD.

Protocol

Questa procedura è stata approvata dal comitato etico dell’Università ospedale prima di Jilin ed è stata effettuata su circa 1.500 soggetti. 1. paziente iscrizione e raccolta campioni ematici Applicare il rilevamento in laboratorio del siero di che IgG anti-AQP4 ai pazienti della clinica con i reclami principali ed i sintomi elencati di seguito. Eseguire esami fisici pure.Neurite ottica: pazienti soffrono di deficit visivi, come la perdita del campo visivo e riduzione dell…

Representative Results

Utilizzando la procedura descritta qui, IgG specifiche anti-AQP4 nel siero è rilevabile. Durante la procedura, campioni pre-diluiti, un controllo positivo e un controllo negativo sono state aggiunte per i campi di reazione, che contengono aree trasfettate e untransfected (Figura 2). Fluorescenza del controllo negativo in una zona trasfettata principalmente indicato il legame non specifico dell’anticorpo secondario alle cellule trasfettate il biochip (<strong…

Discussion

Abbiamo descritto un metodo ampiamente accessibile per rilevare anti-AQP4 IgG nel siero umano. IgG anti-AQP4 è strettamente correlata alla NMOSD, e stabilire un metodo di rilevamento di IgG anti-AQP4 affidabile è fondamentale per la diagnosi clinica di NMOSD. In primo luogo, IgG anti-AQP4 è specifico per NMOSD. La sclerosi multipla è una malattia immune-mediata del sistema nervoso centrale e condivide molte somiglianze con NMOSD¹². Tuttavia, IgG anti-AQP4 è solo positivo in NMOSD<sup class="x…

Materials

Anti-aquaporin-4 IIFT	Euroimmun	FA 1128-2005-50	Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium.
CellSens Dimension	OLYMPUS	N/A	photograph software
Gel & clot activator tube	Improve medical	623040202	From a local Chinese company