Évaluation de l’imagerie par résonance magnétique des tumeurs de vessie Murine induite par la substance cancérigène

Résumé

Les tumeurs de vessie murin sont induits avec l’agent cancérigène la nitrosamine N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) (BBN). Génération de tumeur de la vessie est hétérogène ; par conséquent, une évaluation exacte du fardeau de la tumeur est nécessaire avant la randomisation au traitement expérimental. Nous présentons ici un protocole de MRI rapide et fiable pour évaluer le stade et la taille de la tumeur.

Résumé

Modèles de tumeur de vessie murin sont essentiels pour l’évaluation de nouvelles options thérapeutiques. Tumeurs de la vessie provoquées par l’agent cancérigène nitrosamines (BBN) de N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) sont avantageuses par rapport aux modèles basés sur des lignes cellulaires car ils répliquent étroitement le profil génomique des tumeurs humaines, et, contrairement aux modèles cellulaires et xénogreffes, ils fournissent une bonne occasion pour l’étude des immunothérapies. Cependant, la génération de tumeur de la vessie est hétérogène ; par conséquent, une évaluation exacte du fardeau de la tumeur est nécessaire avant la randomisation au traitement expérimental. Décrit ici est un modèle de souris BBN protocole pour évaluer la vessie cancer tumeur fardeau in vivo à l’aide d’une séquence rapide et fiable par résonance magnétique (RM) (true FISP). Cette méthode est simple et fiable, parce que, contrairement à l’échographie, Monsieur est indépendant de l’opérateur et permet l’examen et le traitement des simples images après l’acquisition. Analyse des régions d’intérêt le long de la paroi vésicale et la tumeur en utilisant des images axiales de la vessie, permettent le calcul de superficie mur et tumeur de la vessie. Cette mesure est en corrélation avec l’ex vivo le poids de la vessie (r,_s= 0,37, p = 0,009) et le stade de la tumeur (p = 0,0003). En conclusion, BBN génère des tumeurs hétérogènes qui sont idéales pour l’évaluation des immunothérapies et IRM peut rapidement et sûrement évaluer la charge de la tumeur avant la randomisation de bras de traitement expérimental.

Introduction

Cancer de la vessie est le cancer le cinquième le plus répandu dans l’ensemble, responsables d’environ 80 000 nouveaux cas et 16 000 décès aux Etats-Unis en 2017¹. Après une trentaine d’années sans progrès significatifs dans le traitement systémique du cancer de la vessie², récents procès inhibiteur de point de contrôle anti-PD-1 et anti-PD-L1 ont démontré des réponses intéressantes et parfois durables chez les patients avec avancé ^3,de carcinome urothélial^4,5. Cependant, seulement environ 20 % des patients montrent une réponse ....

Protocole

Toutes les méthodes décrites ici ont été approuvés par l’animalier institutionnel et utilisation Comité (IACUC) de l’Université Northwestern.

1. l’induction de tumeurs avec BBN

1. Obtenir des souris C57/BL6 mâles, chacun au moins 6 semaines.
   NOTE : Souris mâles développent un cancer de la vessie plus rapidement et plus uniformément que les souris femelles^14,15.
2. Ajouter N-nitrosobutyl(4-hydroxybutyl) amine (BBN) à une dose de 0,05 % à l’eau potable. Entreposer dans un contenant opaque et remet ad libitum comme eau potable jusqu'à¹⁶....

Résultats

En utilisant le protocole décrit (Figure 1), les tumeurs de la vessie ont été induites chez les souris mâles C57/B6. MRI a été réalisée à 16 semaines, et la souris ont été euthanasiés à 20 semaines. Ex vivo poids de la vessie (BW), pour chacune des souris ont été enregistrés. Lames sont colorées à l’hématoxyline et éosine, et toutes les lames histologiques ont été examinés pour le stade de la tumeur.

Discussion

Une imagerie précise des modèles de la tumeur est nécessaire pour approprié avant l’euthanasie mise en scène et à la randomisation animale avant le début du traitement expérimental. À l’aide de la procédure présentée ici, nous démontrons méthodologie afin de générer des tumeurs de la vessie à l’aide de l’agent cancérigène BBN (1) et (2) fardeau de tumeur de la vessie grâce à l’utilisation de dérivé de MR. M. une zone mesure (BLA_mur) est corrélée significativement avec stratifier ex vivo le poids de la.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
C57BL/6 souris	The Jackson Laboratory	664	Souris
N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine cancérogène (BBN)	TCI American	B0938	Cancérogène
0,9 % de solution saline normale	Hospira, Inc	NDC 0409-488-02
Isoflurane	Piramal HealthCare	60307-120-25	Anesthésique
7Tesla ClinScan	MRI Bruker	NA	Dedicated Small Animal Imaging MRI
Syngo	Siemens	NA	MR Logiciel d’imagerie intégré
Model 1030 Monitoring & Système de porte	Small Animal Instruments, Inc. (SAII)	NA	Surveillance physiologique des petits animaux
Formalin, tampon neutre, 10 %	Sigma	HT501128	Fixateur
d’éosine Y	Fisher Scientific	NC1093844	Agent de coloration histologique
Hématoxyline	Fisher Scientific	23-245651	Agent de coloration histologique
Jim7	Xinapse Systems	NA	Logiciel d’analyse d’images médicales
GraphPad Prism v7.04	Graphpad	NA	Logiciel graphique
R v3.4.2	Le projet R pour le calcul statistique	NA	Logiciel statistique
R package pROC v1.10.0.	Le projet R pour l’analyse NA ROC de calcul statistique