यहां, हम एक प्रोटोकॉल वर्तमान सामांय पेशीजनक प्रजनक कोशिकाओं से व्युत्पंन exosomes प्रत्यारोपण द्वारा ड्यूचेनने पेशी dystrophy चूहों में कार्डिएक समारोह में सुधार करने के लिए प्रस्तुत ।
ड्यूसीन पेशी Dystrophy (DMD) कार्यात्मक dystrophin प्रोटीन की कमी के कारण एक एक्स-लिंक्ड अप्रभावी आनुवंशिक रोग है । रोग ठीक नहीं किया जा सकता है, और रोग की प्रगति के रूप में, रोगी फैली cardiomyopathy, अतालता, और कोंजेस्टिव दिल की विफलता के लक्षण विकसित करता है । DMDMDX उत्परिवर्ती चूहों dystrophin व्यक्त नहीं करते हैं, और सामान्यतः dmd के एक माउस मॉडल के रूप में उपयोग किया जाता है । हमारे हाल के अध्ययन में, हमने देखा कि intramyocardial व्यापक प्रकार के इंजेक्शन (WT)-मायोजेनिक प्रजनक कोशिकाओं-व्युत्पन्न exosomes (एमपीसी-Exo) संक्रामक DMD के मायोकार्डियम में dystrophin की अभिव्यक्ति बहालMDX उत्परिवर्ती चूहों, जो जुड़ा हुआ था कार्डियक समारोह में एक क्षणिक सुधार के साथ सुझाव है कि WT-MPC-Exo DMD के कार्डियक लक्षणों को राहत देने के लिए एक विकल्प प्रदान कर सकते हैं । यह लेख एमपीसी-Exo शुद्धि और DMD के दिलों में प्रत्यारोपण की तकनीक का वर्णन करता हैMDX उत्परिवर्ती चूहों ।
ड्यूचेनने पेशी dystrophy (DMD) एक एक्स-लिंक्ड अप्रभावी, प्रगतिशील neuromuscular रोग DMD जीन में एक उत्परिवर्तन और कार्यात्मक dystrophin1के नुकसान के कारण होता है । Dystrophin मुख्य रूप से कंकाल की मांसपेशी और मायोकार्डियम में व्यक्त की है, और कम चिकनी मांसपेशी, अंत: स्रावी ग्रंथियों और ंयूरॉंस2,3में व्यक्त की है । Dmd ३,५०० प्रति ५,००० नवजात लड़कों को दुनिया भर में4,5एक की घटना के साथ पेशी dystrophy का सबसे आम प्रकार है । व्यक्तियों को आम तौर पर प्रगतिशील मांसपेशियों परिगलन, जल्दी किशोरावस्था से स्वतंत्र चलने के नुकसान का विकास, और दिल की विफलता और श्वसन विफलता6के कारण अपने जीवन के तीसरे दशक में दूसरी मौत ।
फैली cardiomyopathy, अतालता और कोंजेस्टिव दिल विफलता dmd7,8के आम हृदय अभिव्यक्तियाँ हैं । रोग ठीक नहीं किया जा सकता, सहायक उपचार लक्षणों में सुधार या दिल की विफलता की प्रगति में देरी हो सकती है, लेकिन यह दिल समारोह9,10में सुधार करने के लिए बहुत मुश्किल है ।
DMD रोगियों के लिए इसी तरह, एक्स से जुड़े पेशी dystrophy (MDX) चूहों dystrophin प्रोटीन में कमी कर रहे हैं और cardiomyopathy के वर्तमान लक्षण11, और इसलिए व्यापक रूप से dmd जुड़े cardiomyopathy अनुसंधान में इस्तेमाल कर रहे हैं. आदेश में प्रभावित मांसपेशियों में dystrophin बहाल करने के लिए, allogeneic स्टेम सेल थेरेपी dmd12,13,14के लिए एक प्रभावी उपचार साबित हो गया है । Exosomes, 30-150 एनएम झिल्ली पीव विभिंन प्रकार के सेल द्वारा स्रावित, कोशिका से सेल संचार में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाने के माध्यम से आनुवंशिक सामग्री परिवहन, जैसे दूत आरएनए (mrna) और गैर कोडिंग rna15,16,17 ,18,19,20,21.
हमारे पिछले अध्ययनों से पता चला है कि इस तरह के C2C12 सेल लाइन के रूप में पेशीजनक प्रजनक कोशिकाओं (MPC) से व्युत्पंन exosomes, dystrophin एमआरएनए को प्रत्यक्ष कार्डियक इंजेक्शन22के बाद की मेजबानी cardiomyocytes हस्तांतरण कर सकते हैं, यह दर्शाता है कि allogeneic वितरण MPC-व्युत्पन्न exosomes (एमपीसी-Exo) सकर्मतापूर्वक MDX चूहों में DMD जीन अभिव्यक्ति को बहाल कर सकते हैं । यह लेख MPC-Exo शोधन और प्रत्यारोपण तकनीकों पर केंद्रित है ।
शुद्ध exosomes अलग करने की विधि exosomes के समारोह का अध्ययन करने के लिए आवश्यक है । Exosome अलगाव के लिए आम तकनीकों में से एक पॉलीथीन glycols (खूंटे) औसत वर्षा17,18,25है । Exosomes खूंटे में उपजी जा ?…
The authors have nothing to disclose.
तांग आंशिक रूप से अमेरिकी हार्ट एसोसिएशन द्वारा समर्थित थे: GRNT31430008, nih-AR070029, एनआईएच-HL086555, NIH-HL134354 ।
0.22-μm Filter | Fisherbrand | 09-720-004 | |
15-cm Cell Culture Dish | Thermo Fisher Scientific | 157150 | |
24-gauge catheter | TERUMO | SR-OX2419CA | |
31-gauge insulin needle | BD | 328291 | |
4% paraformaldehyde | Affymetrix | AAJ19943K2 | |
50 mL Centrifuge Tubes | Thermo Fisher Scientific | 339652 | |
6-0 suture | Pro Advantage by NDC | P420697 | |
Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit IgG | Thermo Fisher Scientific | A-11008 | |
Antibiotic Antimycotic Solution | Corning | 30-004-CI | |
Anti-Dystrophin antibody | Abcam | ab15277 | |
Antigen retriever | Aptum Biologics | R2100-US | Antigen recovery |
Autofluorescence Quenching Kit | Vector Laboratories | SP-8400 | |
C2C12 cell line | ATCC | CRL-1772 | |
Centrifuge | Unico | C8606 | |
Change-A-Tip High Temp Cauteries | Bovie Medical Corporation | HIT | |
Confocal microscopy | Zeiss | Zeiss 780 Upright Confocal | |
DBA/2J-mdx mice | The Jackson Laboratory | 013141 | |
DMEM | Corning | 10-013-CM | |
Fetal Bovine Serum (FBS) | Corning | 35-011-CV | |
Goat serum | MP Biomedicals, LLC | 191356 | |
Isoflurane | Patterson Veterinary | 07-893-1389 | |
Ketamine | Henry Schein | 056344 | |
Mounting Medium with DAPI | Vector Laboratories | H-1500 | |
Mouse Retractor Set | Kent Scientific | SURGI-5001 | |
Polyethylene glycol tert-octylphenyl ether | Fisher Scientific | BP151-100 | |
Rodent ventilator | Harvard Apparatus | 55-7066 | |
SW-28 Ti rotor | Beckman | 342207 | |
The Vevo 2100 Imaging Platform | FUJIFILM VisualSonics | Vevo 2100 | Ultrasound System |
Ultracentrifuge | Beckman | 365672 | |
Ultra-Clear Tubes | Beckman | 344058 | |
Xylazine (XylaMed) | Bimeda-MTC Animal Health Inc. | 1XYL003 8XYL006 |