使用 En 面免疫荧光染色直接观察血管内皮细胞
Summary
在这里，我们提出了免疫荧光染色方案，以直接观察小鼠主尾的内皮细胞。该技术在研究不同流动模式的内皮细胞细胞和分子表型以及动脉粥样硬化的发展时非常有用。
Abstract
内皮表型和形态的异常变化被认为是动脉粥样硬化发病机制的初始事件。直接观察完整的内皮，为了解功能失调的内皮细胞的细胞和分子事件提供有价值的信息。在这里，我们描述了一种经过修饰的面免疫荧光染色技术，使科学家能够获得完整的内皮表面的清晰图像，并原位分析分子表达模式。该方法简单可靠，用于观察主塔不同部位的整个内皮单层。这项技术可能是了解动脉粥样硬化病理生理学的有前途的工具，特别是在早期阶段。
Introduction
血管的早期变化主要在内皮内展开，内皮球在血液和血管壁之间具有选择性屏障，其细胞间紧密结复合物1。大量证据表明，血流在调节内皮功能2中的机械作用起着关键作用。流体剪切应力，一种由血流产生的摩擦力，根据不同血管位点2、3的特定流动模式，不同形状内皮细胞形态和功能。与稳定流动（s-flow）区域（如动脉的直线段）相比，动脉粥样硬化病变优先发生在血流紊乱（d-flow）部位，如血管曲率、流量分频和分支点。因此，直接观察内皮形态和分子表达模式，应有助于深入了解不同流动范式下内皮细胞的结构和功能表型。
培养的内皮细胞可能无法像在体内那样表达实际表型，部分原因是流体剪切应力、周围细胞因子和细胞细胞细胞外基质相互作用的影响。为了达到这个目的，可以使用传统的免疫组织化学在横截面研究完整的内皮细胞单层。然而，内皮单层是如此薄和脆弱，它通常无法清楚地观察到。En 面部免疫组织化学已用于观察内皮内表面，但结果要么复杂或不稳定，因为内皮容易从底层组织剥离，或者只是大鼠或兔子动脉壁的一部分，其壁厚，安装4，5。
老鼠模型在许多方面比其他动物有相当大的优势。在这里，我们采用一种经过修饰的面内免疫荧光技术来分析C57BL/6小鼠的主动脉和胸主动脉的内皮细胞。这种技术已被广泛用于研究不同流动模式的内皮病理生理学，以及动脉粥样硬化6、7、8、9、10的发展。这种方法使科学家能够清楚地观察内皮的整个表面，并比较不同流体剪切应力下区域中特定蛋白质的表达模式。
Protocol
Representative Results
Discussion
内皮液暴露于许多原生因子，包括脂质、炎症中介和流体剪切应激1，11，12。直接观察原位内皮细胞为分析细胞形态、细胞间结和分子表达模式的变化，以响应损伤刺激具有特殊优势。
以前的研究提供了两种不同的面免疫性化学技术来观察动脉壁4，5的内皮。其?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项研究得到了国家自然科学基金（授权号81670451，81770430）、上海新星计划（授权号17QA1403000）和上海市政府科学技术委员会（授权号81670451）的支持。14441903002, 15411963700).
Materials
| Antifade mountant | Servicebio | G1401 | |
| Delicate Forceps | RWD Life Science | F11001-11 | |
| Delicate Scissors | RWD Life Science | S12003-09 | |
| Dissecting Forceps | RWD Life Science | F12005-10 | |
| Mciro Spring Scissors | RWD Life Science | S11001-08 | |
| Polyoxyethylene octyl phenyl ether (Triton X-100) | Amresco | M143 | |
| Polysorbate 20 (Tween 20) | Amresco | 0777 | |
| VCAM-1 antibody | Abcam | ab134047 | |
| VE-Cadherin antibody | BD Biosciences | 555289 | |
| Alexa Fluor 555 labeled anti-rabbit IgG | invitrogen | A-31572 | |
| Alexa Fluor 488 labeled anti-rat IgG | invitrogen | A-21208 | |
| Laser Scanning Microscope | Carl Zeiss |
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