여기서, 우리는 마우스의 쇄 골 정 맥 으로부터 혈액 샘플을 채취 하는 프로토콜을 제시 한다.
마우스는 인간의 질병과 인간의 건강을 연구 하기 위한 가장 중요 한 포유류 모델입니다. 그러나, 쥐에서 혈액 샘플 수집은 연구 작업에서 도전적입니다. 꼬리 혈액 수집은 소량의 혈액 샘플이 필요할 때 인기 있는 방법입니다. 많은 양의 혈액이 필요 하지만이 혈액 수집 방법은 윤리적 문제가 있는 경우 궤도 동맥을 고려할 수 있습니다. 이전에는 쥐에서 쇄 골 정 맥 천자를 통해 혈액 샘플 수집의 타당성과 안전성을 입증 했으며, 여기에서이 방법이 쥐에 사용 될 수 있는지 여부를 조사 합니다. 이 방법은 생쥐의 혈액 채취에 안전 하 고 실용적 이라고 보고 합니다. 생쥐의 쇄 골 정 맥 천자를 통한 혈액 채취는 일상적인 연구 작업에서 편리한 방법이 될 수 있다.
마우스에서 혈액 샘플 수집은 대부분의 연구 실험실에서 필수적입니다. 마우스에서 혈액 수집을 위한 종래의 접근법은 샘플의 100 µ L 미만이 필요한 경우 꼬리 절단이 필요하다. 그러나, 비 말단 시간 지점에서 혈액의 100 µ L 이상이 요구 되는 경우에, 레트로바이러스, 턱 밑 출혈 또는 정신 혈액 수집은 가장 일반적으로 고려 되는 기술2입니다. 어떤 경우에, 외과 적 절 개를 통한 경 정 맥 도관은 대안적인 방법3으로 채택 되었다.
그럼에도 불구 하 고, 상기 방법은 생쥐에 게 유해 합니다. 우리의 지식의 최고에, 레트로 궤도 방법은 합병증의 잠재적인 위험 때문에 널리 받아들여지지 않는다4,5. 수술 관련 외상은 가시 영역 (6)에서 발생 뿐만 아니라, 깊이 궤도 내에서6. 게다가, 턱 아래 혈액 수집은 스트레스가8 이 고 과도 한 출혈2,9와 관련 될 수 있습니다. 우리의 이전 연구10,11에 기초 하 여, 여기에 우리는 쥐에 있는 쇄 골 정 맥에서 혈액 수집을 위한 새로운 전략을 소개 합니다. 이 기술을 사용 하 여 안전, 타당성 및 얻은 혈액 부피를 제시 하 고 논의 합니다.
이 보고서는 쥐 (11)에 있는 쇄 골 정 맥 천자를 통한 혈액 샘플링에 대 한 이전 연구의 확장을 나타낸다. 마우스가 가장 일반적으로 사용 되는 연구 동물 이기 때문에,이 기술은 또한 마우스에 적용 할 수 있는지 확인 하는 것이 가치가 있을 것 이다. 도전은 쇄 골 정 맥의 상대적으로 더 작은 직경에서 옵니다.
본 연구에서, 우리는 쥐에 있는 쇄 골 조류 천자가 혈액을 수집 하는 것이 가능 하 고 신뢰할 수 있는 방법 임을 발견 했습니다. 꼬리 정 맥 절단 또는 궤도 혈액 채취와 같은 종래의 방법과 비교 하 여, 본 방법의 윤리적 문제가 없다. 모든 동물은 혈액 추출의 약 200 µ L 후에 액체 보충 없이이 절차 후에 살아 나 고, 동물은 추가 실험 연구를 위해 이용 될 수 있었습니다. 이론적으로, 총 시료 부피 추출은 총 순환 혈 량의 10% 이상에 도달 하지 못하고 성인 동물의 총 부피는 55 내지 70의 몸 무게 이다. 이 연구에서 사용 된 쥐에 대 한 (21.6-28.3 g), 최대 부피 추출은 약 200 µ L 이어야 한다. 우리는 따라서 각 마우스에 대 한 200 µ L 주위 혈액 샘플링 금액을 설정. 혈압, 심 박수 및 기타 스트레스 매개 변수를 측정 할 수 없다는 것이이 보고서의 주요 제한 사항입니다.
충분 한 전신 마 취는 펑크의 성공을 보장 하는 또 다른 중요 한 문제입니다. 쥐는 바늘에 의해 혈관을 인 발 하는 리스크를 피하기 위하여 펑크 절차 도중 조용히 남아 있어야 합니다. 우리는 pentobarbital 나트륨에서 전신 마 취를 위한 60 밀리 그램/kg의 이상적인 마 취 깊이를 만족 시킬 수 있음을 발견 했습니다. 이 에이전트의 단점은 상대적으로 긴 복구 시간 (평균 약 30 분)입니다. 몇몇 기관에서, 아이 소 루 레인 흡입은 짧은 회복 시간을 위해 이용 되 고 대체 무감각 선택15로 고려 되어야 합니다.
쇄 골 정 맥의 위치는 도 4에 나타내 었 다. 정 맥의 얇은 벽과 저압 때문에, 쇄 골 정 맥의 전방 및 후방 벽은 바늘이 전진 하는 동안 바늘의 압력 하에 서로 부착 됩니다 (그림 5a). 플런저를 천천히 거꾸로 철회 하는 동안, 부착 된 벽은 자발적으로 분리 되 고, 바늘의 끝이 용기의 진정한 공동에 진입 할 수 있었고 혈액은 지속적인 부 압 하에서 주사기로 배출 될 수 있습니다 (그림 5b). 진공 혈액 수집 시스템의 사용16 또한 혈액 수집을 선호 수 있습니다. 생쥐의 쇄 골 정 맥의 직경이 상대적으로 작기 때문에 숙련 된 운전자 에게도 고장이 발생할 수 있습니다. 초보자를 위해, 우리는 보고 된 쥐에 쇄 골 정 맥 천자를 권장11. 쥐에서 여러 성공적인 펑크 시도 후, 쥐에서 쇄 골 정 맥 천자의 성공률은 크게 향상 될 수 있었다. 정확한 천공 위치는 쇄 골 뼈의 중간에 꼬리 있는지 확인. 위쪽으로 움직이는 바늘과 우수한 흉 골에 두개골은 성공적인 펑크를 보장 하는 다른 핵심 포인트입니다.
결론적으로, 쇄 골 정 맥 천자는 생쥐의 혈액 채취를 위한 안전 하 고 효과적인 방법입니다. 꼬리 정 맥 절단 및 복고풍 궤도 신경 총 혈액 수집 외에도이 방법은 실행 가능 하 고 안전 하며 마우스의 여러 시간 지점에서 관측 연구에 적합 합니다.
The authors have nothing to disclose.
이 작품은 중국의 국립 자연 과학 재단에서 보조금에 의해 지원 되었다 81670269, No. 81500355 및 81500226.
1.0 mL syringe | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd (Weihai, Shandong Province, China) | 20163151593 | |
75% ethanol | Department of Pharmacy, The Second Xiangya Hospital of Central South University | made in Department of Pharmacy,The Second Xiangya Hospital of Central South Univesity | |
adhesive tape | 3M Deutschland GmbH (Kamen, Germany) | 1534-1 | |
canvas gloves | for anesthesia | ||
electronic scale | Dongguan Shengheng Electronics Co. Ltd (Dongguan, Guangdong Province, China) | KP-3000 | |
epilating agent | France Yi Sha Cosmetics Co. Ltd (Guangzhou, Guangdong Province, China) | 8281744 | |
heparin (used concentration 10 U/mL, 2 mL, 12500 IU) | Nanjing Xinbai Pharmaceutical Co. Limited (Nanjing, Jiangsu Province, China) | H32025851 | |
mice | Hunan SJA Laboratory Animal Co. Ltd (Changsha, Hunan Province, China) | Kunming spcies | |
needle, 26G, 0.45 mm x 16 mm | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co. Ltd (Weihai, Shandong Province, China) | 20163151593 | |
pentobarbital sodium (used solution 1%) | Merck | P-010-1ML | |
physiological saline, 100 mL | Hunan Kelun Pharmaceutical Co. Ltd (Yueyang, Hunan Province,China) | H43020454 | |
stastical software | International Business Machines | SPSS Statistics 25 | |
tube, 2 mL | Hubei Jinxing Technology & Development Co. Ltd (Wuhan Hubei Province, China) | MCT-150-C |