इस प्रोटोकॉल कोशिकाओं को स्थिर करने के लिए alginate के तेजी से शारीरिक जेलेशन द्वारा एक सेल encapsulation विधि दिखाता है. प्राप्त माइक्रोबीड्स समय के साथ एमिलॉयड-जेड के नियंत्रित और निरंतर स्राव की अनुमति देते हैं और इन विट्रो में और विवो मॉडल में स्रावित एमिलॉयड-जेड के प्रभावों का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
एमिलॉयड झरना परिकल्पना के अनुसार, अल्जाइमर रोग (एडी) के विकास में जल्द से जल्द ट्रिगर विषाक्त एमिलॉयड-जेड (एजेड) टुकड़े का संचय है, जो अंततः बीमारी की शास्त्रीय विशेषताओं के लिए अग्रणी है: एमिलॉयड प्लेक, न्यूरोफाइब्रिलरी उलझनऔर सिनैप्टिक और न्यूरोनल हानि। प्रासंगिक गैर ट्रांसजेनिक पूर्व नैदानिक मॉडल रोग प्रगति के चिंतनशील की कमी प्रभावी दवा उपचार की खोज में बाधा मुख्य कारकों में से एक है। इस उद्देश्य के लिए, हमने पुराने एजेड उत्पादन के प्रभावों के अध्ययन के लिए उपयोगी एमिलॉयड-स्रावित कोशिकाओं वाले ऐजिनेट माइक्रोबीड्स के निर्माण के लिए एक प्रोटोकॉल विकसित किया है।
चीनी हम्सटर अंडाशय कोशिकाओं को पहले एक मानव एपीपी जीन के साथ transfected, एजेड (यानी, 7PA2 कोशिकाओं) स्रावित, इस अध्ययन में इस्तेमाल किया गया. एजेड की निरंतर रिहाई के लिए इन विट्रो मॉडल में एक तीन आयामी (3 डी) alginate में 7PA2 कोशिकाओं के encapsulation द्वारा निर्मित किया गया था. इस प्रक्रिया को विवो अध्ययन में आगे के लिए 500-600 मीटर के मनका व्यास को लक्षित करने के लिए अनुकूलित किया गया था। alginate में 7PA2 सेल encapsulation के अनुकूलन निर्माण मानकों में फेरबदल किया गया था, जैसे, alginate एकाग्रता, जेल प्रवाह दर, स्थिर स्टैकुलिक क्षमता, सिर कंपन आवृत्ति, जेलिंग समाधान. स्रावित एजेड के स्तर का समय के साथ विश्लेषण किया गया और एल्गिनेट मोती और मानक सेल संस्कृति विधियों (96 ज तक) के बीच तुलना की गई।
1.5 x 106 7PA2 कोशिकाओं/एमएल की सांद्रता और 2% (w/v) की एक alginate एकाग्रता HEPES के साथ बफर और बाद में जेलेशन में 0.5 एम कैल्शियम क्लोराइड के लिए 5 मिनट के लिए सबसे स्थिर microbeads गढ़ना पाया गया. गढ़े microbeads थे 1) वर्दी आकार के, 2) 550 डिग्री की एक औसत व्यास के साथ, 3) माइक्रोबीड प्रति 100-150 कोशिकाओं के बारे में युक्त और 4) एजेड स्रावित करने में सक्षम.
अंत में, स्थिर alginate microbeads के उत्पादन के लिए हमारे अनुकूलित विधि amyloid उत्पादक 7PA2 कोशिकाओं युक्त दोनों इन विट्रो में और विवो में ई. के महत्वपूर्ण पहलुओं की मॉडलिंग सक्षम हो सकता है.
मॉडलिंग neurodegenerative रोग मस्तिष्क के जटिल और जटिल प्रकृति के कारण चुनौतीपूर्ण है. अल्जाइमर रोग (एडी) में, synaptic समारोह और न्यूरॉन्स की मौत के प्रगतिशील नुकसान के लिए निरंतर overproduction और एमिलॉयड बीटा के संचय के एक downstream प्रभाव माना जाता है (एजेड) पेप्टाइड्स एमिलॉयड अग्रदूत की असामान्य प्रसंस्करण के बाद प्रोटीन (एपीपी) एमिलॉयड झरना परिकल्पना के अनुसार1|
इस एमिलॉयड प्रेरित विकृति के तंत्र को समझने के लिए और उपन्यास उपचार लक्ष्यों की पहचान में सहायता करने के लिए, वैज्ञानिकों ने विवो पूर्व नैदानिक मॉडलों में विभिन्न विकसित किए हैं। मॉडलों की एक श्रेणी चूहे मस्तिष्क2,3,4में सिंथेटिक एजेड पेप्टाइड के एक बोलस इंजेक्शन का इस्तेमाल करती है . इस तरह के मॉडल की मुख्य सीमा यह है कि वे एक ही बार में जमा उच्च सांद्रता में एजेड पेप्टाइड्स के साथ एक एकल बिंदु या दोहराया उपचार पर भरोसा करते हैं। यह रोग5में एजेड की रिहाई की पुरानी, निरंतर प्रकृति के साथ असंगत है। विवो मॉडल ों की एक अन्य श्रेणी ट्रांसजेनिक पशु मॉडल है जो रोगकेपारिवारिक रूपों से जुड़े एक या अधिक आनुवंशिक उत्परिवर्तनों को व्यक्त करता है 6 ,7,8,9, 10.हालांकि, पारिवारिक ई. के बाद से केवल सभी अल्जाइमर मामलों11के 5% से कम के लिए खातों , मनुष्यों में छिटपुट ई . के लिए अनुवाद में इन मॉडलों की प्रासंगिकता संदिग्ध12है . ट्रांसजेनिक दृष्टिकोण का एक और दोष जन्म से त्वरित एजेड गठन है, जो संज्ञानात्मक समारोह में घाटे में तब्दील हो जाता है और पैथोलॉजिकल परिवर्तन बहुत जल्दी और आक्रामक रूप से रोगियों में छिटपुट विज्ञापन में रोग प्रगति के समान12 . उदाहरण के लिए, 5x एफएडी मॉडल 13 महीने13के रूप में छोटे से प्लेक का उत्पादन करता है।
दिलचस्प है, इन दोनों श्रेणियोंई. अनुसंधान2, 3,4,5,6, और कभी कभी वे के साथ कर रहे हैं करने के लिए प्रासंगिकता के संज्ञानात्मक समारोह में परिवर्तन में परिणाम रोग की रोग पहचान की उपस्थिति जैसे एमिलॉयड प्लेक6,8, ताऊ फॉस्फोरिलेशन6,7 और/या सिनाप्टिक और न्यूरोनल हानि7,9, 14. लेकिन जब मॉडल के इन प्रकार के हमें मस्तिष्क में amyloid के उच्च स्तर के प्रभाव में एक अंतर्दृष्टि दे सकता है, जो अक्सर ई. के बाद के चरणों के साथ जुड़े रहे हैं, वे पुराने और निरंतर जोखिम के जवाब में प्रदर्शित पहले परिवर्तन को प्रतिबिंबित करने में विफल एजेड पेप्टाइड12, जैसे कि synaptic मार्करों की परिवर्तित अभिव्यक्ति15 और extracellular मैट्रिक्स16में घटकों . इसलिए, वहाँ अभी भी एक पुरानी मॉडल है कि और अधिक सही vivo अनुभूति में पर निरंतर एजेड स्राव के प्रभाव दिखाता है बनाने के लिए एक की जरूरत बनी हुई है और विकृति में परिवर्तन दिखाता है.
यह अंत करने के लिए, हम एक प्रणाली है जो hydrogel microbeads के भीतर amyloid-secreting कोशिकाओं को स्थिर करके एक नियंत्रित तरीके से एजेड के निरंतर, निरंतर स्राव की अनुमति देता है विकसित किया है, जो बाद में मॉडल पहलुओं के लिए वयस्क चूहे मस्तिष्क के भीतर प्रत्यारोपित किया जा सकता है छिटपुट ई. की.
अल्गिनेट चयनित जैव सामग्री था क्योंकि यह जैव संगत है और विवो17में प्रत्यारोपित होने पर कोई प्रतिकूल प्रतिक्रिया उत्पन्न नहीं करता है . पिछले चार दशकों में एल्गिनेट हाइड्रोगेल्स में सेल एनकैप्सुलेशन अच्छी तरह से स्थापित किया गया है। क्लिनिक में इसके अनुवाद का पहला उदाहरण टाइप 1 मधुमेह मेलिटस17के उपचार के लिए सूचित किया गया . Langerhans के islets के सफल encapsulation की जल्द से जल्द रिपोर्ट 1980 के लिए वापस तिथियाँ. इंसुलिन-स्रावी कोशिकाओं युक्त माइक्रोबीड्स के प्रत्यारोपण ने मधुमेह के रोगियों के लिए उपचार विकल्पों में क्रांति ला दी क्योंकि यह अग्नाशय के कार्य को बहाल करता है, जिससे इंसुलिन इंजेक्शन थेरेपी की आवश्यकता18हो जाती है। ये कैसे सेल encapsulation उन्हें बाहरी तनाव से रक्षा कर सकते हैं पर रिपोर्ट काम करता है, चाहे यांत्रिक या रासायनिक. वास्तव में, alginate मोती एक बाधा के रूप में कार्य और आसपास के वातावरण से कोशिकाओं को अलग उनके phenotype संरक्षण, पोषक तत्वों और सेलुलर उपोत्पादों की निकासी के लिए आसपास के मीडिया के लिए पर्याप्त पहुँच की अनुमति whilst19. इसके अलावा, alginate का उपयोग नरम ऊतक20के यांत्रिक गुणों के मिलान की अनुमति देता है. Alginate hydrogels 1-30 kPa की कठोरता के लिए देखसकते जा सकते हैं, बस alginate एकाग्रता और पार से जोड़ने घनत्व20,21अलग करके. यह एक आवश्यक पहलू है, न केवल इन विट्रो में encapsulated कोशिकाओं के phenotypic अभिव्यक्ति बनाए रखने के लिए, लेकिन यह भी vivo22में engraftment के बाद किसी भी भड़काऊ प्रभाव से बचने के लिए.
इस प्रोटोकॉल में, 7PA2 कोशिकाओं – एक चीनी हम्सटर अंडाशय सेल लाइन है कि एक मानव एपीपी V717F उत्परिवर्तित जीन23 के साथ stably transfected है – उपयोग किया जाता है. इन कोशिकाओं को लगातार एपीपी के उत्प्रेरक उत्पादों का उत्पादन, एजेड1-4224,25सहित , और पूर्व नैदानिक में सिंथेटिक उत्पादन के लिए एक विकल्प के रूप में एजेड उत्पन्न करने के लिए इस्तेमाल किया गया है, विवो अध्ययन में तीव्र26. हम जैव अणुओं के निरंतर स्राव की अनुमति देने के लिए डिज़ाइन किए गए ‘सॉफ्ट’ एल्जिनेट माइक्रोबीड्स के भीतर 7PA2 कोशिकाओं को स्थिर करने के लिए एक निर्माण विधि का वर्णन करते हैं। अवधारणा का एक सबूत के रूप में, हम समय के साथ एजेड1-42 पेप्टाइड की रिहाई पर रिपोर्ट. अल्जिनेट जिसका उपयोग किया जाता है, वह 120,000-190,000 ग्राम/मोल के आण्विक भार और 1.56 (एम/जी) के गुलुरोनिक अनुपात के लिए एक मैनुरोनिक के साथ कम विस्सिता एल्जिनेट है।
आगे के अध्ययनों में, इन microbeads सुरक्षित रूप से ई. (जैसे, हिप्पोकैम्पस) के लिए प्रासंगिकता के चूहे मस्तिष्क के क्षेत्रों के भीतर प्रत्यारोपित किया जा सकता है vivo और पैथोलॉजी पूर्व vivo में व्यवहार पर पुरानी एजेड स्राव के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए. इसके अलावा, इस प्रणाली को इन विट्रो और ex vivo अनुप्रयोगों में पुरानी एजेड रिलीज के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. उदाहरण के लिए, 7PA2 युक्त alginate microbeads न्यूरोनल या एस्ट्रोसाइटिक संस्कृतियों के साथ इन विट्रो में सह-संस्कृत किया जा सकता है विज्ञापन के साथ जुड़े सेलुलर तंत्र पर पुरानी एजेड जोखिम के प्रभाव का आकलन करने के लिए. इसके अलावा, इस विधि के लिए पुरानी एजेड उत्पादन और पूर्व vivo electrophysiology में दीर्घकालिक potentiation के बीच संबंधों की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
इस प्रोटोकॉल का मुख्य आकर्षण मॉड्यूलरता और निर्माण विधि का लचीलापन है, जो ठीक ट्यूनिंग निर्माण मापदंडों द्वारा एक लक्ष्य आयाम के साथ alginate मोती के निर्माण में सक्षम बनाता है। आवेदन के आधार पर, प्रोटोकॉल microbead आकार, encapsulated कोशिकाओं के घनत्व, और microbead कठोरता के संबंध के साथ bespoke लक्ष्य प्राप्त करने के लिए समायोजित किया जा सकता है. इस प्रोटोकॉल सेल प्रकार की एक किस्म के encapsulation के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, विभिन्न रोगों का अध्ययन करने के लिए इन विट्रो मॉडल में अधिक प्रासंगिक तीन आयामी (3 डी) के विकास. हम हाल ही में कैसे alginate-encapsulated कोशिकाओं कैंसर प्रगति20के प्रारंभिक चरणों मॉडल के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है पर सूचना दी.
encapsulation प्रक्रिया की अवधारणा एक नोजल के माध्यम से alginate समाधान में निलंबित कोशिकाओं के एक laminar जेट के बाहर निकालना पर आधारित है. एक हिल सिर एक नियंत्रित आवृत्ति के साथ जेट को बाधित करता है जिसके परिणामस्वरूप समान रूप से आकार alginate आधारित बूंदों में. एक बाहरी विद्युत क्षेत्र का गठन ऐल्जिनेट-आधारित बूंदों को अलग करने की अनुमति देता है, जो डाइवेलेंट आयनों में समृद्ध समाधान के संपर्क में आने पर, जैसे कि कैल्शियम आयन, अपने गोलाकार आकार को बनाए रखते हुए जल्दी से लिंक कर सकते हैं। जेलेशन समाधान में इनक्यूबेशन एक सजातीय भौतिक हाइड्रोजेल27के भीतर कोशिकाओं से युक्त गोलाकार माइक्रोबीड्स के गठन की अनुमति देता है । microbeads और alginate hydrogels के लक्ष्य आकार समय की लंबी अवधि के लिए सेल संस्कृति मीडिया के साथ पोषक तत्वों और ऑक्सीजन विनिमय की अनुमति देता है (सप्ताह). चित्र 1 एक शो encapsulation उपकरण का एक योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व इस्तेमाल किया (चित्र 1बी) .
चित्र 1 : encapsulation प्रणाली. (क) encapsulation प्रणाली के Schematic प्रतिनिधित्व. एक alginate सेल निलंबन एक सिरिंज में भरी हुई है (2) और सिरिंज पंप (1) पर सेट एक बाहर निकालना गति पर एक जलाशय के माध्यम से खिलाया. जलाशय में, एक कंपन टोपी (3) समान अंतराल पर धारा को बाधित करने के लिए एक तरंग जनरेटर (4) द्वारा निर्धारित आवृत्ति पर vibrates, समान रूप से आकार की बूंदों के गठन. के रूप में समाधान एक नोजल के माध्यम से खिलाया जाता है (5) और बूंदों का गठन कर रहे हैं, एक इलेक्ट्रोड भर में एक इलेक्ट्रोड लागू किया जाता है (7) एक वोल्टेज जनरेटर द्वारा निर्धारित (6), जो थोड़ा बूंदों की सतह चार्ज, धारा repelling का एक परिणाम के रूप में फैल करने के लिए अनुमति देता है स्थिर वैद्युत बल। के रूप में बूंदों gelation स्नान (8) के साथ संलग्न हैं, Ca2 +– प्रेरित पार alginate के परस्पर जोड़ने गोलाकार microbeads के गठन में परिणाम. (बी) एल्जिनेट माइक्रोबीड्स के निर्माण से पहले एनकैप्स्युलेटर का फोटो। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
Microbead आकार इच्छित उपयोग के आधार पर बदला जा सकता है. माइक्रोबीड के आकार को नियंत्रित करने के लिए, चित्र 1क और प्रोटोकॉल में उल्लिखित विभिन्न पैरामीटरों को तदनुसार समायोजित किया जाता है। इस्तेमाल किया नोजल के आंतरिक व्यास बूंदों के आकार पर एक पर्याप्त प्रभाव पड़ता है; आगे समायोजन encapsulation मानकों, अर्थात् बाहर निकालना गति, कंपन आवृत्ति और वोल्टेज, एक सुसंगत आकार वितरण को प्राप्त करने के लिए महत्वपूर्ण है. तालिका 1 रूपरेखा कैसे विभिन्न मानकों microbeads इस प्रणाली के साथ प्राप्त के आकार को बदल सकते हैं.
पैरामीटर | नोज़ल आकार | कंपन आवृत्ति | प्रवाह दर | इलेक्ट्रोड वोल्टता |
बीड आकार | – |
तालिका 1: निर्माण मानकों और microbead आकार पर उनके प्रभाव. तालिका दिखाता है कि कैसे प्रत्येक पैरामीटर निर्मित microbeads के परिणामी आकार को प्रभावित कर सकते हैं, नोजल और इस्तेमाल किया समाधान की चिपचिपापन पर ध्यान दिए बिना.
इस आलेख में उल्लिखित विधि कोशिकाओं को एल्जिनेट माइक्रोबीड्स27के संकीर्ण आकार के वितरण को प्राप्त करने के लिए उपयोगी है . यह भी एक प्रतिरक्षा अलग वातावरण में बढ़ती कोशिकाओं का लाभ affords17,19,उन्हें बाहरी तनाव से बचाने के. इसके अतिरिक्त, alginate में कोशिकाओं के encapsulation और अधिक बारीकी से शारीरिक स्थितियों की नकल, विशेष रूप से सेल से सेल बातचीत और मैट्रिक्स कठोरता20के संबंध में. ये सभी कारक प्रासंगिक अनुप्रयोगों में बाद में उपयोग के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण हैं, जैसे विवो engraftment में, आसपास के ऊतकों में संभावित प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को रोकना17. इसके अलावा, इस प्रोटोकॉल का एक प्रमुख लाभ ब्याज के आवेदन के अनुसार आसान tuneability है: यह प्रोटोकॉल को संशोधित करने और बड़े या छोटे के निर्माण के लिए मानकों का अनुकूलन संभव है, और नरम या stiffer मोती. वर्णित विधि कम से कम इनवेसिव तरीकों के साथ इंजेक्शन किया जा करने के लिए पर्याप्त छोटे मोती बनाने के लिए प्रयोग किया जाता है, और पर्याप्त रूप से कोशिकाओं की एक संख्या की मेजबानी और अवलोकन व्यवहार और रोग प्रभाव में परिणाम के लिए एजेड की एक पर्याप्त रिलीज प्रदान करने के लिए पर्याप्त बड़ी पशु मॉडल में इंजेक्शन पर.
इस प्रोटोकॉल की सफलता महत्वपूर्ण चरणों की एक संख्या पर निर्भर है. सेल व्यवहार्यता बनाए रखने और कार्य20,28को बनाए रखने के लिए सावधान सेल हैंडलिंग और इष्टतम सेल पुलिंग तकनीकें महत्वपूर्ण हैं . मानक संस्कृति की स्थिति का उपयोग 7PA2 कोशिकाओं के सामान्य समारोह के संरक्षण सुनिश्चित करता है, के रूप में मनाया. यह 2D संस्कृतियों के साथ तुलना करते समय encapsulated कोशिकाओं से A$1-42 के लिए एक समान रिलीज़ प्रोफ़ाइल की अनुमति देता है। इसके अलावा, प्रोटोकॉल के लिए बेहतर काम करने के लिए, एक कम viscosity alginate समाधान एक उच्च चिपचिपापन alginate समाधान के साथ तुलना में बेहतर परिणाम की गारंटी देता है. यह सुनिश्चित करता है कि एक समरूप स्तरीय जेट नोजल के माध्यम से बाहर निकाल दिया जाता है और गढ़े हुए मोती27के मैट्रिक्स के भीतर कोशिकाओं का भी वितरण होता है . कोशिकाओं encapsulate करने के लिए इस्तेमाल सामग्री एक बहुत तेजी से जेलेशन तंत्र होना चाहिए, आकार की अवधारण की अनुमति.
इस प्रोटोकॉल में एक और महत्वपूर्ण कदम gelation के बाद गढ़े microbeads की हैंडलिंग है. यहाँ, हम मोती हस्तांतरण करने के लिए एक बड़े एपर्चर प्लास्टिक पाइपेट का उपयोग करके microbeads की पुनर्प्राप्ति दिखा. वैकल्पिक रूप से, एक जाल फिल्टर में microbeads युक्त कैल्शियम क्लोराइड समाधान डालने मनका पुनर्प्राप्ति के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. एक बड़े (5, 10 या 25 एमएल) serological pipette microbeads आकर्षित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और फिर डालने के बजाय जाल फिल्टर के माध्यम से धोया. इस का लाभ डालने की तुलना में प्रक्रिया की बाँझपन में एक उच्च विश्वास है. हालांकि, सीमाओं की है कि कुछ मोती विकृत हो सकता है अगर वे pippette द्वारा संकुचित कर रहे हैं, एक कम उपज जोखिम के अलावा अगर microbeads का एक बड़ा अनुपात बचाया नहीं कर रहे हैं.
इस दृष्टिकोण मॉडल और विभिन्न रोगों का अध्ययन करने के लिए विभिन्न सेल लाइनों encapsulate करने के लिए इस्तेमाल किया गया है (जैसे, इंसुलिन की रिहाई से encapsulated अग्नाशयी islet). हमारे दृष्टिकोण की नवीनता vivo में अल्जाइमर रोग के महत्वपूर्ण पहलुओं मॉडलिंग में एक उपयोगी विधि के रूप में इस प्रोटोकॉल का उपयोग कर उत्पन्न microbeads के engraftment है. जब एक बोलस इंजेक्शन द्वारा उत्पन्न एजेड के स्तर तक (चित्र 4) से एजेड की रिलीज़ प्रोफ़ाइल की तुलना करते समय (जैसे कि अन्य अध्ययनों में रिपोर्ट किया गया3,26), एजेड का अधिक पुराना और निरंतर रिलीज हो सकता है अपेक्षित. चित्र 6 में उन अनुमानित प्रवृत्ति को दिखाया गया है जो प्राप्त की जा सकती हैं। विवो मॉडलिंग में इस प्रणाली का उपयोग करने के लिए जिस तरह से रोग की प्रगति के लिए और अधिक उपयोगी हो सकता है दवा की खोज और विकास के लिए प्रासंगिक है.
चित्र 6 : एक बोलस इंजेक्शन के साथ तुलना में encapsulated 7PA2 कोशिकाओं से एजेड1-42 की अनुमानित रिलीज प्रोफ़ाइल। engrafted 7PA2 युक्त microbeads से एजेड रिलीज की प्रोफ़ाइल ई. के लिए प्रासंगिकता के एक पशु मॉडल में पुरानी और निरंतर एजेड के प्रभाव के परीक्षण की अनुमति देता है. इसके विपरीत, एक बोलस इंजेक्शन समय की एक छोटी अवधि में एजेड स्तर में एक कील पैदा करेगा, मस्तिष्क से एजेड की एक तेजी से निकासी के बाद. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
The authors have nothing to disclose.
लेखकों को श्री काजेन Suresparan, डॉ जोनाथन Wubetu, श्री Dominik Grudzinski, मिस चेन झाओ, और डॉ Thierry पायलट alginate microbead निर्माण, सेल संस्कृति और एजेड का पता लगाने के अनुकूलन में उनकी मदद के लिए धन्यवाद करना चाहते हैं, और उपयोगी वैज्ञानिक चर्चा.
µManager software | Vale Lab, UCSF, USA | v.1.46 | |
0.22 um PES filter | Merck, UK | SLGP033RS | |
15mm Netwell insert 74 um mesh filter | Constar, usa | #3477 | |
Alginic acid sodium salt from brown algae | Sigma-Aldrich,uk | A0682 | |
Calcium chloride | Sigma-Aldrich,uk | C1016 | |
CellTiter96 AQueous One Solution cell proliferation assay | Promega, USA | G3580 | |
Encapsulator | Inotech | IE-50 | serial no. 05.002.01-2005 |
HEPES | Sigma-Aldrich,uk | H4024 | |
Hu Aβ 1-42 ELISA | ThermoFisher, UK | KHB3441 | |
ImageJ software | ImageJ | v1.49p | |
Inverted light microscope | Olympus | CKX41 | |
Leica microscope | Leica microsystems, UK | DMI6000B | |
Neo sCMOS Camera | Ander, UK | 5.5 | |
Phosphate buffered saline | Sigma-Aldrich,uk | D1408 | |
Sodium chloride | Sigma-Aldrich,uk | 433209 | |
Trispdium citrate dihydrate | Sigma-Aldrich,uk | W302600-K | |
Trypsin-EDTA solution | Sigma-Aldrich,uk | T4049 |