Modèle robuste induit par la ligature de la parodontite de Murine pour l'évaluation des neutrophiles oraux

Summary

Cet article présente un protocole pour établir un modèle ligature-induit de la parodontite de murine impliquant les molaires maxillaires multiples, ayant pour résultat de plus grandes zones du tissu et de l'os gingival impliqués pour l'analyse suivante aussi bien que l'utilisation animale réduite. Une technique pour évaluer les neutrophiles oraux d'une manière analogue aux sujets humains est également décrite.

Abstract

Les principaux avantages de l'étude de la pathophysiologie de la maladie parodontale en utilisant des modèles murins sont le coût réduit des animaux, l'éventail de souches génétiquement modifiées, le grand nombre d'analyses qui peuvent être effectuées sur les tissus mous et durs récoltés. Cependant, bon nombre de ces systèmes font l'objet de critiques procédurales. Comme alternative, le modèle ligature-induit de la maladie parodontale, conduit par le développement localisé et la conservation d'un microbiome oral dysbiotique, peut être employé, qui est rapidement induit et relativement fiable. Malheureusement, les variantes du protocole de parodontite murine-induite de ligature sont isolées aux régions focales du parodontium et soumises à l'avulsion prématurée de la ligature installée. Cela minimise la quantité de tissu disponible pour les analyses ultérieures et augmente le nombre d'animaux requis pour l'étude. Ce protocole décrit les manipulations précises nécessaires pour placer les ligatures molaires prolongées avec la conservation et l'utilisation améliorées d'une technique de rinçage nouvelle pour récupérer les neutrophiles oraux chez les souris avec une approche alternative qui atténue ce qui précède défis techniques.

Introduction

La maladie parodontale (PD) est une condition ostéolytique liée à la morbidité et au fardeau économique significatifs d'hôte, qui se manifeste par l'inflammation gingivale et la perte de l'attachement mou de tissu et du soutien osseux pour la dentition affectée^1,2,3,4. Ce processus est régi par les interactions entre le microbiote oral et le système immunitaire inné de l'hôte. Il est également associé à l'exacerbation d'autres maladies inflammatoires systémiques, y compris le diabète, les maladies cardiovasculaires, et le cancer

Protocol

Toutes les études sur les murines étaient conformes aux règlements éthiques pertinents et ont été approuvées par le Comité des soins aux animaux de l'Université de Toronto et le Research Ethics Board (Protocol 20011930).

1. Installation de Ligature

REMARQUE: Il s'agit d'une intervention chirurgicale non stérile qui peut être effectuée dans un bloc opératoire standard. L'utilisation d'animaux exempts de germes (non couverts ici) exige la manipulation dans un cabinet de biosécurité, l'utilisation d'instruments stériles et l'inoculation de la cavité buccale avec des agents pathogènes parodontaux pour provoquer les man....

Results

Des données représentatives de cytométrie de flux provenant d'échantillons de rinçantoral d'une cavité buccale naïve (figure 3A) et enflammée (figure 3B) de cavité buccale murine secondaire à la parodontite induite par la ligature sont fournies. La récupération des PMN à partir d'une ligature installée est également démontrée (figure 3C). Les tensions de canal de cytomètre de flux o.......

Discussion

L'élément le plus critique associé à l'utilisation du modèle de la parodontite induit par la ligature murine est centré autour de la rétention de la ligature jusqu'au moment du sacrifice ou de l'ablation intentionnelle. La ligature biofilm-retentive installée est capable d'induire une perte significative de la hauteur alvéolaire d'os en aussi peu que 6 jours, plafonnant entre la période de 11-16 jours^39. La décision de sacrifier les sujets animaux avant la période maximale de perte osseuse, ce qui.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anticorps anti-souris F4/80	BioLegend	123131	BV421, Clone BM8
Anticorps anti-souris Ly6G	BD	560602	PerCP-Cy5.5, Clone 1A8
C57BL/6 Souris mâles	Charles River		8 à 12 semaines
Tube de centrifugeuse conique	FroggaBio	TB15-500	15 mL
Tube de centrifugeuse conique	FroggaBio	TB50-500	50 ml
Tampon FACS	Multiple		1 % BSA (BioShop), 2mM EDTA (Merck), 1x HBSS-/- (Gibco)
FACSDiva	BD		v8.0.1
Fibre-Lite	Dolan-Jenner		Modèle 180
FlowJo	Tree Star		v10.0.8R1
Pompe de thérapie thermique	Hallowell		HTP-1500
Stérilisateur à billes de verre chaud	Microscopie électronique Sciences	66118-10	Germinateur 500
Ciseaux à iris	Almedic	7602-A8-684
Kétamine	Vetoquinol		100mg/mL
LSRFortessa	BD		X-20
Sérum de souris	Sigma	M5905-5ML
Filtre à mailles en nylon	Fisher Scientific	22-363-547	40 & micro; m
Paraformaldéhyde	Fisher Scientific	28908	16 % (p/v), sans méthanol
Phosphate Saline Sagma		D1408-500ML	Sans CaCl2 et MgCl2, 10x
Seringues jetables en plastique	BD	309659	1 mL
Sérum de rat	Sigma	R9759-5ML
Suture	en soieCovidien	SS652	C13 USP 5-0
Pince à échardes	Almedic	7726-A10-700	#1
Pince à échardes	Almedic	7727-A10-704	#5
Microscope stéréo de dissection	Carl Zeiss	28865	Photo-Zusatz
Aiguille Hypodémique Stérile	BD	305111	26G X 1/2"
Seringue	BD	309659	1 mL
Xylazine	Rompun		20mg/mL