Protokollen beskriver bruk av wire myography å evaluere transmuralt isometrisk spenning av chrezbryzheechno arterier isolert fra mus, med spesiell vurdering av modulering av faktorer løslatt fra endothelial celler og inflammasjon fettvev.
Endret vaskulær tone respons til patofysiologiske stimuli bidrar til utvikling av et bredt spekter av hjerte-og metabolske sykdommer. Endothelial dysfunksjon representerer en stor gjerningsmann for den reduserte vasodilatasjon og forbedret vasokonstriksjon av arterier. Fett (fett) vev rundt arteriene spille viktige roller i regulering av endotelet-avhengige avslapping og/eller sammentrekning av vaskulære glatte muskelceller. Korset-forhandlingene mellom endotelet og inflammasjon fettvev kan vurderes ex vivo bruke montert blodkar av en wire myography system. Imidlertid bør optimale innstillinger etableres for arterier avledet fra dyr av forskjellige arter, aldre, genetisk bakgrunn og/eller patofysiologiske forhold.
Dilatations og constrictions av arterier oppnås ved relaxations og sammentrekninger, henholdsvis av deres vaskulære glatte muskelceller. Endringer i vaskulær respons av små arterier bidra til homøostatisk regulering av arteriell blodtrykk av autonome nerver og hormoner som finnes i blodet (f. eks, katekolaminer, angiotensin II, serotonin, vasopressin). På lokalt nivå, den vaskulære reaksjoner av glatte muskelceller er modulert av signaler fra både endothelial cellene i intima og fettvev rundt arteriene (figur 1).
Endotelet er ikke bare en passiv barriere, men fungerer også som en overflate for å utveksle signaler mellom blodet og de underliggende vaskulære glatte muskel cellene. Ved å slippe ulike vasoactive stoffer, spiller endotelet en avgjørende rolle i den lokale kontrollen av vaskulær tone svar1. For eksempel, som følge av acetylkolin, aktiveres endothelial nitrogenoksid syntase (eNOS) i endotelet for å produsere nitrogenoksid (NO), som induserer avslapping av underliggende vaskulær glatt muskel ved å aktivere løselig guanylyl cyclase (sGC) 2. andre vasoactive stoffer inkluderer produkter av cyclooxygenases (f. eks, prostasyklin og Thromboxane A2), lipoksygenase (f. eks, 12-hydroxyeicosatetraenoic syrer, 12-hete), og cytokrom P450 monooxygenases (HETEs og epoxyeicosatrienoic syrer, EETs), reaktive oksygen arter (ROS) og vasoactive peptider (f. eks endothelin-1 og angiotensin II), og endotelet-avledede hyperpolarizing faktorer (EDHF)3. En delikat balanse mellom endotelet-avledet vasodilatorer og vasoconstrictors opprettholde den lokale vasomotorisk tone4,5.
Endothelial dysfunksjon er karakterisert ved svekkelse i endotelet-avhengige vasodilatasjon6, et kjennetegn på vaskulær aldring7. Med alderen reduseres endotelet evne til å fremme vasodilatasjon gradvis, skyldes i stor grad en redusert NO biotilgjengelighet, samt unormal uttrykk og funksjon av eNOS i endotelet og sGC i vaskulære glatte muskelceller8 , 9 andre priser , 10. redusert ingen biotilgjengelighet potenserer produksjonen av endotelet-avhengige vasoconstrictors11,12. I alderen arterier, endothelial dysfunksjon forårsaker trykk i Media, som gjenspeiles av den markerte økningen i veggtykkelse, antall mellomliggende kjerner, som minner om arteriell tykkelse i hypertensjon og aterosklerose observert i humant pasienter13,14. I tillegg patofysiologiske forhold som fedme, diabetes eller hypertensjon akselerere utviklingen av endothelial dysfunksjon15,16.
Inflammasjon fettvev (PVAT) utgivelser mange adipokines å regulere Vaskulær struktur og funksjon17. Den anti-kontraktile effekten av PVAT er mediert av avslappende faktorer, slik som adiponectin, nei, hydrogenperoksid og hydrogensulfid18,19,20. Imidlertid, avhenger på plasseringen og patofysiologiske forfatning, PVAT likeledes kanne forsterke kontraktile svar inne forskjellige arterier21. De Pro-kontraktile stoffene som produseres av PVAT inkluderer angiotensin-II, leptin, resistin, og ros22,23. I de fleste studier på isolerte blodårer har PVAT blitt betraktet som en enkel strukturell støtte for blodkar og dermed fjernet under utarbeidelse av blod fartøy ring segmenter. Siden fett dysfunksjon representerer en uavhengig risikofaktor for hypertensjon og tilhørende kardiovaskulære komplikasjoner24, den PVAT rundt blodkarene bør vurderes ved undersøkelse av vaskulær respons på forskjellige arterier.
Multi wire myograph systemer har blitt mye brukt til å undersøke vasomotorisk funksjoner av en rekke blodkar, inkludert aorta, chrezbryzheechno, nyre, lår, cerebral og koronar arterier25,26. Protokollene beskrevet her vil bruke wire myography å evaluere vaskulær respons i chrezbryzheechno arterier isolert fra genmodifiserte mus modeller, med et spesielt fokus på modulering av PVAT.
Bortsett fra de endothelial cellene, signaler avledet fra PVAT spille en viktig rolle i regulering av glatt muskeltonus reaktivitet30. Sunn PVAT utgivelser nei og anti-inflammatorisk adiponectin å utøve en anti-kontraktile effekt på arterier, som er tapt under patologiske tilstander som fedme og Metabolsk syndrom31,32. I sykdomstilstander, PVAT bidrar til utvikling av endothelial dysfunksjon og andre kardiovaskulære unormalt<sup class=…
The authors have nothing to disclose.
Dette arbeidet ble økonomisk støtte av tilskudd fra Research Grant Council of Hong Kong [17124718 og 17121714], Hong Kong Health and Medical Research Fund [13142651 og 13142641], Collaborative Research Fund of Hong Kong [C7055-14G], og National Basic Forskningsprogrammet i Kina [973 program 2015CB553603].
Acetylcholine | Sigma-Aldrich | A6625 | Stock concentration: 10-1 M Working concentration: 10-10 to 10-5 M |
L-NAME (Nω-nitro-L-arginine methyl ester) | Sigma-Aldrich | N5751 | Stock concentration: 3 x 10-2 M Working concentration: 10-4 M |
Phenylephrine | Sigma-Aldrich | P6126 | Stock concentration: 10-2 M Working concentration: 10-10 to 10-5 M |
U46619 (9,11-dideoxy-9α,11αmethanoepoxy prostaglandin F2α) | Enzo | BML-PG023-0001 | Stock concentration: 10-5 M Working concentration: 1-3 x 10-8 M |
Multiwire myograph | Danish MyoTechnology (DMT) | 620M | |
PowerLab 4/26 | ADInstruments | ML848 | |
Labchart7 | ADInstruments | – | |
Adipo-SIRT1 wild type mice | Laboratory Animal Unit, The University of Hong Kong | CULATR NO.: 4085-16 | |
Silicon-coated Petri dishes | Danish MyoTechnology (DMT) | ||
Tungsten wires | Danish MyoTechnology (DMT) | 300331 | |
Surgical tools |