1. स्वचालित तरल हैंडलर के लिए प्रोग्रामिंग फ़ाइल मेनू से एक नई विधि बनाएं(फ़ाइल । नई विधि)नोट: दिए गए आदेश में चरणों को पूरा करें। इटालिक फ़ॉन्ट बायोमेक सॉफ्टवेयर में टाइप करने के लिए टेक्स्ट को दर्शाता है। पाइपिंग तकनीकों और टेम्पलेट्स के बारे में जानकारी के लिए लेखकों से संपर्क करें। टेबल 1 में सूचीबद्ध स्टार्ट स्टेप में टाइप स्टेप वेरिएबल ्स और उनके मूल्य शुरू करें। चयनात्मक टिप पाइपिंग के लिए कॉलम सेट करें। चरण 1.3-1.7 के लिए, नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में सेट ग्लोबल स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। सेट ग्लोबल स्टेप का उपयोग करते हुए, वेरिएबल FirstColumn_Globalके लिए वैल्यू =फर्स्टकॉलम सेट करें, वेरिएबल LastColumn_Globalके लिए वैल्यू =लास्टकॉलम, वैल्यू =लास्टकॉलम-फर्स्टकॉलम +1 टू वेरिएबल कॉलम,और वैल्यू =कॉलम * 8 से वेरिएबल वेल्स। नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में स्क्रिप्ट चरण का चयन करें और इसे विधि में खींचें। चित्रा 2में संकेत के रूप में वीबी स्क्रिप्ट टाइप करें । सेट ग्लोबल और समाधान घोला जा सकता है के लिए वॉल्यूम सेट करना। सेट ग्लोबल स्टेप का उपयोग करके, तालिका 2 में दिखाए गए वॉल्यूम मिक्स चर के अनुरूप मूल्यनिर्धारित करें। नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में यदि कदम पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। शर्तों के तहत, ऑटोसैंपलरटाइप करें। तबके तहत, नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में सेट ग्लोबल स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। सेट ग्लोबल स्टेप का उपयोग करते हुए, सेट वैल्यू =(मोबाइलफेज *कॉलम))+10 से वेरिएबल मोबाइलफेजवेलतक।( अन्यकेतहत, कंट्रोल स्टेप्स के तहत टूलबार में सेट ग्लोबल स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। सेट ग्लोबल स्टेप का उपयोग करके, वेरिएबल मोबाइलफेजवेल के लिए मूल्य =0 सेट करें गाइडेड लैबवेयर सेटअप (जीएलएस) कॉन्फ़िगर करना यूटिलिटीजके तहत टूलबार में डेक एडिटर स्टेप पर क्लिक करें । चित्रा 3 में डेक लेआउट के अनुरूप एक नया डेक बनाएं और इसे डेक 1 के रूप में लेबल करें। सेटअप और उपकरणों के तहत टूलबार में गाइडेड सेटअप स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। टेबल 3में इंगित डेक पदों में लैबवेयर प्रकार खींचें और छोड़ दें। इसके बाद टेबल 3 और फिगर 4 (गाइडेड सेटअप सेट अप) में दिखाए गए टैब को टेबल में भरें। टिप गिनती के लिए प्रक्रिया स्थापित करना नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में परिभाषित प्रक्रिया चरण पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। टिपकाउंटके रूप में नाम प्रक्रिया। कंट्रोल स्टेप्स के तहत टूलबार में स्क्रिप्ट स्टेप पर क्लिक करें और उसे विधि पर खींचें। चित्रा 5 (टिप गिनती स्क्रिप्ट) में इंगित के रूप में वीबी स्क्रिप्ट टाइप करें । नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में यदि कदम पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। शर्तों के तहत, टाइप TL5 = 0। इसकेतहत, सेटअप और डिवाइस स्टेप्स के तहत टूलबार में मूव लैबवेयर स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। टीएल5 से टीआर3 तक लैबवेयर ले जाएं। सेटअप और डिवाइस चरणों के तहत टूलबार में मूव लैबवेयर स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। टीएल2 से टीएल5 तक लैबवेयर ले जाएं। अंत में, सेटअप और डिवाइस चरणों के तहत टूलबार में मूव लैबवेयर स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। बीसी90 से टीएल2 तक लैबवेयर ले जाएं। इनक्यूबेटर के लिए प्रक्रिया को परिभाषित करना नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में परिभाषित प्रक्रिया चरण पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। इनक्यूबेटर के रूप में नाम प्रक्रिया। हाफटाइम में वेरिएबल नाम के रूप में टाइप करें और 1800 डिफॉल्ट वैल्यू के रूप में। नेक्स्टटेम्प में वेरिएबल नाम के रूप में टाइप करें और डिफ़ॉल्ट वैल्यू के रूप में 22। टेम्प में वेरिएबल नाम के रूप में टाइप करें और डिफॉल्ट वैल्यू के रूप में 60। सेटअप और डिवाइस स्टेप्स के तहत टूलबार में एन्हांस्ड मूव लैबवेयर स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। P11 से INHECO1 के लिए लैबवेयर ले जाएँ। नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में रन प्रक्रिया चरण पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। टिपकाउंट के रूप में नाम प्रक्रिया। इंटीग्रेशन के तहत टूलबार में इनहेको इनक्यूबेट स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। स्थिति में डिवाइस का उपयोग करने के लिए INHECO1 में टाइप करें, = इनक्यूबेट के लिए हाफटाइम, डिग्री सेल्सियस के लिए = अस्थायी और लक्ष्य तापमान के डिग्री सेल्सियस के लिए 3। विकल्प और कक्षीय (दक्षिणावर्त)शेक शैली को इनक्यूबेटकरते हुए शेक का चयन करें। सेटिंग्स के लिए, 1.00 मिमी साइड टू साइड में टाइप करें, 6.6 बार एक सेकंड, 1.00 मिमी आगे विज्ञापन पीछे की ओर और 6.6 बार एक दूसरे।नोट: सुनिश्चित करें कि इनहेको इनक्यूबेटर सॉफ्टवेयर स्थापित किया गया है। इंटीग्रेशन के तहत टूलबार में इनहेको इनक्यूबेट स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। स्थिति में डिवाइस का उपयोग करने के लिए INHECO1 में टाइप करें, = इनक्यूबेट के लिए हाफटाइम, डिग्री सेल्सियस के लिए = अस्थायी और लक्ष्य तापमान के डिग्री सेल्सियस के लिए 3। इनक्यूबेटिंग ऑप्शन और ऑर्बिटल (काउंटर-क्लॉकवाइज)शेक स्टाइल करते हुए शेक का चयन करें। सेटिंग्स के लिए, 1.00 मिमी साइड टू साइड में टाइप करें, 6.6 बार एक सेकंड, 1.00 मिमी आगे और पीछे की ओर 6.6 बार एक सेकंड पर। सेटअप और डिवाइस स्टेप्स के तहत टूलबार में ठहराव चरण पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। 1 एस के लिए पूरी प्रणाली को थामने। नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में परिभाषित प्रक्रिया चरण पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। इनक्यूबेटर के रूप में नाम प्रक्रिया। इंटीग्रेशन के तहत टूलबार में इनहेको इनक्यूबेट स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। स्थिति में डिवाइस का उपयोग करने के लिए INHECO1 में टाइप करें, इनक्यूबेट के लिए 1, डिग्री सेल्सियस के लिए = नेक्स्टटेम्प और लक्ष्य तापमान के डिग्री सेल्सियस के लिए 3। कक्षीय के लिए प्रक्रिया को परिभाषित करना। सेटअप और डिवाइस स्टेप्स के तहत टूलबार में एन्हांस्ड मूव लैबवेयर स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। P11 से ऑर्बिटल1 के लिए लैबवेयर ले जाएँ। नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में रन प्रक्रिया चरण पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। प्रक्रिया टिपकाउंट का चयन करें। सेटअप और डिवाइस स्टेप्स के तहत टूलबार में डिवाइस एक्शन स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। डिवाइस ऑरिटलशेकर0 का चयन करें, कमांड टाइमडिशेक। मिलाते हुए गति 1000दर्ज करें , पूर्ण गति 2तक पहुंचने का समय , 30को हिलाने का समय । सेटअप और डिवाइस स्टेप्स के तहत टूलबार में एन्हांस्ड मूव लैबवेयर स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। लैबवेयर ऑर्बिटल1 से P11 तक ले जाएं। पहला मिश्रण स्थापित करना लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। पुनर्व्यवस्थित स्थिति TL4 का चयन करें। इंटीग्रेशन के तहत टूलबार में इनहेको इनक्यूबेट स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। स्थिति में डिवाइस का उपयोग करने के लिए INHECO1 में टाइप करें, इनक्यूबेट के लिए 1, डिग्री सेल्सियस के लिए 60 और लक्ष्य तापमान के डिग्री सेल्सियस के लिए 3। नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में लूप स्टेप पर क्लिक करें और चुनिंदा टिप स्टेप के भीतर इसे विधि पर खींचें। कोल को वेरिएबल के रूप में टाइप करें = स्टार्ट के रूप में फर्स्टकॉलम, = अंत के रूप में लास्टकॉलम, और 1 वेतन वृद्धि के रूप में। लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स लोड टिप्स स्टेप पर क्लिक करें और लूप स्टेप के भीतर इसे विधि पर खींचें। ड्रॉप-डाउन मेनू से BC90 Tips, TL5 स्थान और TL2 बैकअप टिप्स स्थान का चयन करें। सिंगल कॉलम (एस) चुनें और 1में टाइप करें । लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स एस्पिरेट स्टेप पर क्लिक करें और लूप स्टेप के भीतर इसे विधि पर खींचें। BCDeep96Round Labware प्रकार और पुनः एजेंट प्लेट स्थिति का चयन करें। वॉल्यूम = FirstMixमें टाइप करें, कॉलम 1 और पंक्ति 1पर एस्पिरेट। तकनीक ड्रॉप-डाउन मेनू से एक अनुकूलित तकनीक का चयन करें। लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स डिस्पेंस स्टेप पर क्लिक करें लूप स्टेप के भीतर इसे विधि पर खींचें। BCDeep96Round Labware प्रकार और पुनः एजेंट प्लेट स्थिति का चयन करें। वॉल्यूम = FirstMixमें टाइप करें, कॉलम = कर्नल और पंक्ति 1पर बांटें। तकनीक ड्रॉप-डाउन मेनू से एक अनुकूलित तकनीक का चयन करें। लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स अनलोड स्टेप पर क्लिक करें और लूप स्टेप के भीतर इसे विधि पर खींचें। TR1 के लिए अनलोड टिप्स चुनें। नमूनों की स्थापना नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में यदि कदम पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। स्थिति के रूप में नमूना प्लेट टाइप करें। इसके तहत, लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स लोड टिप्स स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। ड्रॉप-डाउन मेनू से BC90 Tips, TL5 स्थान और TL2 बैकअप टिप्स स्थान का चयन करें। सिंगल कॉलम (एस) चुनें और =टिपकॉलममें टाइप करें। लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में चुनिंदा टिप्स एस्पिरेट स्टेप पर क्लिक करें और उसे विधि में खींचें, फिर भी। Greiner96RoundPS लैबवेयर प्रकार और नमूने की स्थिति का चयन करें । मात्रा में टाइप करें = नमूना,कॉलम = FirstColumn और पंक्ति 1पर एस्पिरेट। तकनीक ड्रॉप-डाउन मेनू से एक अनुकूलित तकनीक का चयन करें। लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स डिस्पेंस स्टेप पर क्लिक करें और उसे विधि में खींचें, फिर भी। BCDeep96Round Labware प्रकार और प्रतिक्रिया प्लेट स्थिति का चयन करें। मात्रा में टाइप करें = नमूना,कॉलम = FirstColumn और पंक्ति 1पर बांटना। तकनीक ड्रॉप-डाउन मेनू से एक अनुकूलित तकनीक का चयन करें। लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स अनलोड स्टेप पर क्लिक करें और उसे विधि में खींचें, फिर भी। TR1 के लिए अनलोड टिप्स चुनें। यदि चरण के अंत के बाद, नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में रन प्रक्रिया चरण पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। प्रक्रिया इनक्यूबेटर का चयन करें। हाफटाइम में वेरिएबल नाम के रूप में टाइप करें और 1800 डिफॉल्ट वैल्यू के रूप में। नेक्स्टटेम्प में वेरिएबल नाम के रूप में टाइप करें और डिफ़ॉल्ट वैल्यू के रूप में 22। टेम्प में वेरिएबल नाम के रूप में टाइप करें और डिफॉल्ट वैल्यू के रूप में 60। साइस्टीन ब्लॉक की स्थापना नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में लूप स्टेप पर क्लिक करें और चुनिंदा टिप स्टेप के भीतर इसे विधि पर खींचें। कोल को वेरिएबल के रूप में टाइप करें = स्टार्ट के रूप में फर्स्टकॉलम, = अंतिम कॉलम अंत के रूप में और 1 वेतन वृद्धि के रूप में। लूपके तहत, लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स लोड टिप्स स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। ड्रॉप-डाउन मेनू से BC90 Tips, TL5 स्थान और TL2 बैकअप टिप्स स्थान का चयन करें। सिंगल कॉलम (एस) चुनें और 1में टाइप करें । लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में चुनिंदा टिप्स एस्पिरेट स्टेप पर क्लिक करें और लूप के भीतर इसे विधि पर खींचें। BCDeep96Round Labware प्रकार और पुनः एजेंट प्लेट स्थिति का चयन करें। वॉल्यूम = साइस्टीनमिक्समें टाइप करें, कॉलम 2 और पंक्ति 1पर एस्पिरेट। तकनीक ड्रॉप-डाउन मेनू से एक अनुकूलित तकनीक का चयन करें। लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स डिस्पेंस स्टेप पर क्लिक करें और लूप के भीतर इसे विधि पर खींचें। BCDeep96Round Labware प्रकार और प्रतिक्रिया प्लेट स्थितिका चयन करें । मात्रा में टाइप = साइस्टीनमिक्स,कॉलम = कर्नल और पंक्ति 1पर बांटना। तकनीक ड्रॉप-डाउन मेनू से एक अनुकूलित तकनीक का चयन करें। लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स अनलोड स्टेप पर क्लिक करें और उसे विधि में खींचें, फिर भी। TR1 के लिए अनलोड टिप्स चुनें। यदि लूप के अंत के बाद, नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में रन प्रक्रिया चरण पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। प्रक्रिया इनक्यूबेटर का चयन करें। हाफटाइम में वेरिएबल नाम के रूप में टाइप करें और डिफॉल्ट वैल्यू के रूप में 300। नेक्स्टटेम्प में वेरिएबल नाम के रूप में टाइप करें और डिफॉल्ट वैल्यू के रूप में 43। टेम्प में वेरिएबल नाम के रूप में टाइप करें और डिफ़ॉल्ट वैल्यू के रूप में 25। दूसरा मिश्रण स्थापित करना नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में लूप स्टेप पर क्लिक करें और चुनिंदा टिप स्टेप के भीतर इसे विधि पर खींचें। कोल को वेरिएबल के रूप में टाइप करें = स्टार्ट के रूप में फर्स्टकॉलम, = अंतिम कॉलम अंत के रूप में और 1 वेतन वृद्धि के रूप में। लूप के तहत, लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स लोड टिप्स स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। ड्रॉप-डाउन मेनू से BC90 Tips, TL5 स्थान और TL2 बैकअप टिप्स स्थान का चयन करें। सिंगल कॉलम (एस) चुनें और 1में टाइप करें । लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में चुनिंदा टिप्स एस्पिरेट स्टेप पर क्लिक करें और लूप के भीतर इसे विधि पर खींचें। BCDeep96Round Labware प्रकार और पुनः एजेंट प्लेट स्थिति का चयन करें। वॉल्यूम में टाइप करें = सेकेंडमिक्स,कॉलम 3 और पंक्ति 1पर एस्पिरेट। तकनीक ड्रॉप-डाउन मेनू से एक अनुकूलित तकनीक का चयन करें। लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स डिस्पेंस स्टेप पर क्लिक करें और लूप के भीतर इसे विधि पर खींचें। BCDeep96Round Labware प्रकार और प्रतिक्रिया प्लेट स्थिति का चयन करें। मात्रा में टाइप करें = सेकेंडमिक्स,कॉलम = कर्नल और पंक्ति 1पर बांटें । तकनीक ड्रॉप-डाउन मेनू से एक अनुकूलित तकनीक का चयन करें। लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स अनलोड स्टेप पर क्लिक करें और उसे विधि में खींचें, फिर भी। TR1 के लिए अनलोड टिप्स चुनें। लूप के अंत के बाद, नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में रन प्रक्रिया चरण पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। प्रक्रिया कक्षीय का चयन करें। सेटअप और डिवाइस स्टेप्स के तहत टूलबार में ठहराव चरण पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। 1 एस के लिए पूरी प्रणाली को थामने। ट्रिप्सिन इसके अलावा स्थापित करना नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में लूप स्टेप पर क्लिक करें और चुनिंदा टिप स्टेप के भीतर इसे विधि पर खींचें। कोल को वेरिएबल के रूप में टाइप करें = स्टार्ट के रूप में फर्स्टकॉलम, = अंतिम कॉलम अंत के रूप में और 1 वेतन वृद्धि के रूप में। लूपके तहत, लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स लोड टिप्स स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। ड्रॉप-डाउन मेनू से BC90 Tips, TL5 स्थान और TL2 बैकअप टिप्स स्थान चुनें। सिंगल कॉलम (एस) चुनें और 1में टाइप करें । लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में चुनिंदा टिप्स एस्पिरेट स्टेप पर क्लिक करें और लूप के भीतर इसे विधि पर खींचें। BCDeep96Round Labware प्रकार और पुनः एजेंट प्लेट स्थिति का चयन करें। वॉल्यूम = ट्रिप्सिन,कॉलम 4 और पंक्ति 1पर एस्पिरेट में टाइप करें। तकनीक ड्रॉप-डाउन मेनू से एक अनुकूलित तकनीक का चयन करें। लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स डिस्पेंस स्टेप पर क्लिक करें और लूप के भीतर इसे विधि में खींचें। BCDeep96Round Labware प्रकार और प्रतिक्रिया प्लेट स्थिति का चयन करें। मात्रा में टाइप करें = ट्रिप्सिन,कॉलम = कर्नल और पंक्ति 1पर बांटें। तकनीक ड्रॉप-डाउन मेनू से एक अनुकूलित तकनीक का चयन करें। लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स अनलोड स्टेप पर क्लिक करें और उसे विधि में खींचें, फिर भी। TR1 के लिए अनलोड टिप्स चुनें। यदि लूप के अंत के बाद, नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में रन प्रक्रिया चरण पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। प्रक्रिया इनक्यूबेटर का चयन करें। हाफटाइम में वेरिएबल नाम के रूप में टाइप करें और डिफॉल्ट वैल्यू के रूप में 3600। नेक्स्टटेम्प में वेरिएबल नाम के रूप में और 25 को डिफॉल्ट वैल्यू के रूप में टाइप करें। टेम्प में वेरिएबल नाम के रूप में टाइप करें और डिफॉल्ट वैल्यू के रूप में 43। इंटीग्रेशन के तहत टूलबार में इनहेको इनक्यूबेट स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। सुनिश्चित करें कि इनहेको इनक्यूबेटर सॉफ्टवेयर स्थापित है। स्थिति में डिवाइस का उपयोग करने के लिए INHECO1 में टाइप करें, इनक्यूबेट के लिए 1, डिग्री सेल्सियस के लिए 25 और लक्ष्य तापमान के डिग्री सेल्सियस के लिए 5। शमन की स्थापना नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में लूप स्टेप पर क्लिक करें और चुनिंदा टिप स्टेप के भीतर इसे विधि पर खींचें। कोल को वेरिएबल के रूप में टाइप करें = स्टार्ट के रूप में फर्स्टकॉलम, = अंतिम कॉलम अंत के रूप में और 1 वेतन वृद्धि के रूप में। लूपके तहत, लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स लोड टिप्स स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। ड्रॉप-डाउन मेनू से BC90 Tips, TL5 स्थान और TL2 बैकअप टिप्स स्थान का चयन करें। सिंगल कॉलम (एस) चुनें और 1में टाइप करें । लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में चुनिंदा टिप्स एस्पिरेट स्टेप पर क्लिक करें और लूप के भीतर इसे विधि पर खींचें। BCDeep96Round Labware प्रकार और पुनः एजेंट प्लेट स्थिति का चयन करें। मात्रा = बुझाना,कॉलम 5 और पंक्ति 1पर एस्पिरेट में टाइप करें। तकनीक ड्रॉप-डाउन मेनू से एक अनुकूलित तकनीक का चयन करें। लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स डिस्पेंस स्टेप पर क्लिक करें और लूप के भीतर इसे विधि पर खींचें। BCDeep96Round Labware प्रकार और प्रतिक्रिया प्लेट स्थितिका चयन करें । मात्रा = बुझानामें टाइप करें, कॉलम = कर्नल और पंक्ति 1पर बांटें। तकनीक ड्रॉप-डाउन मेनू से एक अनुकूलित तकनीक का चयन करें। लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में चुनिंदा टिप्स अनलोड स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि में खींचें, फिरके भीतर । TR1 के लिए अनलोड टिप्स चुनें। लूप के अंत के बाद, नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में रन प्रक्रिया चरण पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। प्रक्रिया कक्षीयका चयन करें । सेटअप और डिवाइस स्टेप्स के तहत टूलबार में ठहराव चरण पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। 1 एसके लिए पूरी प्रणाली को थामने । सेटअप और डिवाइस स्टेप्स के तहत टूलबार में ठहराव चरण पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। पूरी व्यवस्था को थामने काचयन करें और इस संदेश को प्रदर्शित करें । संदेश में टाइप करें ‘सेंट्रलाइज्ड के बाद जारी रखें’। ऑटोसैंपलर के लिए प्लेट स्थापित करना नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में यदि चरण पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें, चुनें टिप चरण के भीतर। स्थिति के रूप में ऑटोसैंपलर टाइप करें। तबके तहत, नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में लूप स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। कोल को वेरिएबल के रूप में टाइप करें = स्टार्ट के रूप में फर्स्टकॉलम, = अंतिम कॉलम अंत के रूप में और 1 वेतन वृद्धि के रूप में। लूपके तहत, लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स लोड टिप्स स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। ड्रॉप-डाउन मेनू से BC230 टिप्स, TL6 स्थान और TL2 बैकअप टिप्स स्थान का चयन करें। सिंगल कॉलम (एस) चुनें और 1में टाइप करें । लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में चुनिंदा टिप्स एस्पिरेट स्टेप पर क्लिक करें और लूप के भीतर इसे विधि पर खींचें। BCDeep96Round Labware प्रकार और पुनः एजेंट प्लेट स्थितिका चयन करें । वॉल्यूम =मोबाइलफेज,कॉलम 6 और पंक्ति 1पर एस्पिरेट में टाइप करें। तकनीक ड्रॉप-डाउन मेनू से एक अनुकूलित तकनीक का चयन करें। लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स डिस्पेंस स्टेप पर क्लिक करें और लूप के भीतर इसे विधि पर खींचें। लैबवेयर टाइप और ऑटोसैंपलर प्लेट पोजीशन Bio_RadPCR96 चुनें। मात्रा में टाइप = मोबाइलफेज,कॉलम = कर्नल और पंक्ति 1पर बांटना । तकनीक ड्रॉप-डाउन मेनू से एक अनुकूलित तकनीक का चयन करें। लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में चुनिंदा टिप्स अनलोड स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि में खींचें, फिरके भीतर । TR1 के लिए अनलोड टिप्स चुनें। यदि लूप के अंत के बाद, नियंत्रण चरणों के तहत टूलबार में रन प्रक्रिया चरण पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। प्रक्रिया टिपकाउंटका चयन करें। लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स लोड टिप्स स्टेप पर क्लिक करें और इसे विधि पर खींचें। ड्रॉप-डाउन मेनू से BC90 Tips, TL5 स्थान और TL2 बैकअप टिप्स स्थान चुनें। सिंगल कॉलम (एस) चुनें और =टिपकॉलममें टाइप करें। लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स एस्पिरेट स्टेप पर क्लिक करें और लूप के भीतर विधि पर खींचें। BCDeep96Round Labware प्रकार और प्रतिक्रिया प्लेट स्थितिका चयन करें । मात्रा में टाइप करें = डाइजेस्टट्रांसफर,कॉलम = फर्स्टकॉलम और पंक्ति 1पर एस्पिरेट। तकनीक ड्रॉप-डाउन मेनू से एक अनुकूलित तकनीक का चयन करें। लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में सेलेक्ट टिप्स डिस्पेंस स्टेप पर क्लिक करें और लूप के भीतर इसे विधि पर खींचें। लैबवेयर टाइप और ऑटोसैंपलर प्लेट पोजीशन Bio_RadPCR96 चुनें। वॉल्यूम =मोबाइलफेजमें टाइप करें, कॉलम = फर्स्टकॉलम और पंक्ति 1पर बांटें। तकनीक ड्रॉप-डाउन मेनू से एक अनुकूलित तकनीक का चयन करें। लिक्विड हैंडलिंग स्टेप्स के तहत टूलबार में चुनिंदा टिप्स अनलोड स्टेप पर क्लिक करें और फिर इसे विधिमें खींचें । TR1 के लिए अनलोड टिप्स चुनें। चुनिंदा टिप्स स्टेप यहीं खत्म होता है। सहेजें और विधि का नाम। 2. नमूना, लैबवेयर, और अभिकर्मक तैयार करें पूल्ड स्वस्थ मानव प्लाज्मा के 5 μL को पॉलीप्रोपाइलीन, 96-राउंड डीप वेल प्लेट में स्थानांतरित करें।नोट: इस प्रोटोकॉल में उपयोग किए जाने वाले अभिकर्मकों और आपूर्ति के लिए सामग्री की तालिका देखें। टीपीके इलाज ट्राइप्सिन खरीदा गया था और अनुपात को सब्सट्रेट करने के लिए ट्रिप्सिन और ऊष्मायन समय को विशेष रूप से अनुकूलित किया गया था। यदि ट्राइप्सिन के एक अलग ग्रेड का उपयोग किया जाता है, जैसे अनुक्रम ग्रेड पुनः संयोजन ट्राइप्सिन, एंजाइम को सब्सट्रेस्ट अनुपात और ऊष्मायन समय का परीक्षण और अनुकूलित किया जाना चाहिए। 3. ऑपरेटिंग प्रक्रिया सॉफ्टवेयर आइकन पर डबल क्लिक करें। विधि टैब के तहत, स्वचालित तरल हैंडलर को उन्मुख करने और तैयार करने के लिए होम ऑल एक्स का चयन करें। सुनिश्चित करें कि सभी वर्कस्टेशन सीरिंज में कोई दृश्यमान हवा के बुलबुले नहीं होते हैं। फाइलके तहत, ओपन चुनें । विधि। विधि का चयन करें(चित्र 6)। हरे त्रिकोण के आकार के रन आइकन पर क्लिक करके विधि शुरू करें। विधि के अंत में एक ऑटोसैंपलर प्लेट तैयार करने के लिए, ‘ऑटोसैंपलर’ प्रॉम्प्ट के लिए उपयोग करने के लिए एक मूल्य दर्ज करें और फिर ओकेपर क्लिक करें। यदि एक ऑटोसैंपलर प्लेट तैयार नहीं की जा रही है, तो मूल्य ‘झूठी’ दर्ज करें, और फिर ओकेपर क्लिक करें। ‘firstcolumn’ प्रॉम्प्ट के लिए उपयोग करने के लिए एक मूल्य दर्ज करें और फिर ठीकक्लिक करें। ‘लास्टकॉलम’ प्रॉम्प्ट के लिए उपयोग करने के लिए एक मूल्य दर्ज करें, और फिर ओकेपर क्लिक करें।नोट: यह कदम और चरण ४.७ वर्कस्टेशन को ९६-अच्छी तरह से प्लेट के 12 स्तंभों पर पाचन करने के लिए कहते हैं, जिसके परिणामस्वरूप प्लेट के सभी कुओं का उपयोग पाचन के लिए किया जा रहा है यदि कम से कम 20 माइक्रोन के नमूना मात्रा के साथ एक नमूना प्लेट का उपयोग किया जा रहा है, तो ‘सैंपलप्लेट’ त्वरित के लिए उपयोग करने के लिए एक मूल्य दर्ज करें, और फिर ओकेपर क्लिक करें। यदि एक नमूना प्लेट का उपयोग नहीं किया जा रहा है, तो मूल्य ‘झूठा’ दर्ज करें, और फिर ओकेपर क्लिक करें।नोट: यदि एक नमूना प्लेट का उपयोग नहीं किया जा रहा है, तो रिएक्शन प्लेट के प्रत्येक समान कुएं में नमूना के 5 μL जोड़ें। गाइडेड लैबवेयर सेटअप विंडो में निर्देशों का पालन करें और जारी रखें।नोट: अगली खिड़की “रिएजेंट प्लेट” के लिए लेआउट का वर्णन तैयार किया जाना है(चित्रा 7, पूरक तालिका 1)। निम्नलिखित खंडों को 1 एमएल डीप राउंड 96-वेल प्लेट में एक कॉलम के 8 कुओं में से प्रत्येक में बहाया जाएगा:कॉलम 1: रिएक्शन मिक्स 1 का 540 माइक्रोन।कॉलम 2: साइस्टीन ब्लॉक का 50 माइक्रोन।कॉलम 3: रिएक्शन मिक्स 2 का 730 माइक्रोन।कॉलम 4: ट्रिप्सिन का 130 माइक्रोन।कॉलम 5: शमन समाधान के 130 μL।कॉलम 5: मोबाइल चरण समाधान का 1090 माइक्रोन (यदि उपयोगकर्ता चरण 6 में ‘सच’ में प्रवेश करता है)। अगले क्लिक करें और निम्नलिखित खिड़की नमूना प्लेट में aliquot ed करने के लिए आवश्यक न्यूनतम मात्रा (20 μL) का वर्णन करता है । यदि उपयोगकर्ता ने नमूना प्लेट (चरण 9) को शामिल करने वाले त्वरित के लिए मूल्य ‘झूठा’ दर्ज किया है, तो उपयोगकर्ता को रिएक्शन प्लेट में 5 माइक्रोन नमूना जोड़ने के लिए कहा जाएगा। आगेक्लिक करें ।नोट: अगली खिड़की से पता चलता है कि एक खाली 90 μL टिप बॉक्स स्वचालित तरल हैंडलर डेक पर रखा जाना चाहिए। अगले फिर से क्लिक करें, निर्दिष्ट और सचित्र के रूप में स्वचालित तरल हैंडलर डेक बिछाने(चित्रा 8)रिएजेंट प्लेट, प्रतिक्रिया प्लेट, नमूना प्लेट, Autosampler प्लेट, 6 पूर्ण ९० μL टिप बक्से, एक खाली ९० μL टिप बॉक्स, और एक पूर्ण २३० μL टिप बॉक्स सहित । विधि शुरू करने के लिए खत्म पर क्लिक करें।नोट: खत्मक्लिक करने के बाद, उपयोगकर्ता स्वचालित तरल हैंडलर में नहीं पहुंच सकता है। इससे मशीन का ‘ हल्का पर्दा टूट जाएगा ‘ और सुरक्षा एहतियात के तौर पर लिक्विड हैंडलर को बंद कर देगा । केंद्रीकरण के तुरंत बाद जारी रखें, रिएक्शन प्लेट को पुनः प्राप्त करें और इसे 3,000 आरपीएम पर 30 मिनट के लिए अपकेंद्री करें। केंद्रीकरण पूरा होने के बाद, प्रतिक्रिया प्लेट को स्वचालित तरल हैंडलर को उस स्थिति में लौटा दें जो केंद्रीकरण से पहले थी, और जारी रखें।नोट: विधि पूरी होने पर स्वचालित तरल हैंडलर फिर से बंद हो जाएगा। यदि उपयोगकर्ता ने चरण 6 के लिए ‘ट्रू’ में प्रवेश किया, तो ऑटोसैंपलर प्लेट को वर्कस्टेशन से हटाया जा सकता है और विश्लेषण के लिए तरल क्रोमेटोग्राफी इंस्ट्रूमेंट के ऑटोसैंपलर में रखा जा सकता है। 4. एलसी-एमएसएमएस एक उच्च प्रवाह एचपीएलसी पर पेप्टाइड्स को हल करें जिसमें सी18 2.1 मिमी x 100 मिमी, 0.25 मीटर/मिन की प्रवाह दर के साथ 3.5 माइक्रोन कॉलम शामिल है और ट्रिपल क्वारुपोल मास स्पेक्ट्रोमीटर पर इनलाइन का विश्लेषण किया गया है।नोट: पेप्टाइड पाचन के बाद, रोबोटिक तैयार नमूनों से पेप्टाइड्स की मात्रा निर्धारित करने के लिए लक्षित एलसी-एमएसएमएस विधि को एलसी-एमएसएमएस के संक्षिप्त विवरण के बाद विस्तारसे वर्णित किया गया है। कॉलम ओवन तापमान को 40 डिग्री सेल्सियस तक सेट करें। दो मोबाइल चरणों के रूप में बफर ए (2% एसीएन, 98% पानी, 0.1% फोरमिक एसिड) और बफर बी (95% एसीएन, 5% पानी, 0.1% फोरमिक एसिड) का उपयोग करें। लोडिंग के बाद 5 मिनट के लिए 5% बी के साथ कॉलम को समतुल्य करें। 30 मिनट से अधिक पेप्टाइड्स को एक रैखिक 5% से 35% बफर बी के ढाल के साथ एलुट करें। 10 मिनट के लिए 98% बी के साथ धोने और फिर 5% बी के साथ 5 मिनट के लिए अगले नमूना लोड करने से पहले कॉलम को रीसायकल कर दें। ऑन-लाइन डायवर्जन के लिए, दो चरण स्विचिंग वाल्व का उपयोग करके आयन स्रोत में प्रवेश करने से पहले कचरे के लिए पोस्ट-कॉलम एल्यूंट को डायवर्ट करें। एमआरएम डेटा प्रोसेस करें।