Méthode Ex Vivo pour évaluer la motilité spontanée de la mouse Reproductive Tract et un algorithme de suivi des mouvements uterus basé sur MATLAB pour l'analyse des données

Résumé

Les contractions utérines sont importantes pour le bien-être des femelles. Cependant, la contractilité pathologiquement accrue peut avoir comme conséquence la dysméorrhea, particulièrement dans les femelles plus jeunes. Ici, nous décrivons une préparation ex vivo simple permettant l'évaluation rapide de l'efficacité des relaxants lisses de muscle qui peuvent être employés pour traiter la dysméorrhea.

Résumé

La dysmémérise, ou crampes douloureuses, est le symptôme le plus commun associé aux règles chez les femmes et sa sévérité peut entraver la vie quotidienne des femmes. Ici, nous présentons une méthode facile et peu coûteuse qui serait instrumentale pour tester de nouveaux médicaments diminuant la contractilité utérine. Cette méthode utilise la capacité unique de l'ensemble de l'appareil reproducteur de la souris à montrer la motilité spontanée lorsqu'il est maintenu ex vivo dans un plat Petri contenant tampon Krebs oxygéné. Cette motilité spontanée ressemble à l'activité myométriale ondulée de l'utérus humain, appelée ondes endométriales. Pour démontrer l'efficacité de la méthode, nous avons employé un médicament relaxant utérin bien connu, l'épinéphrine. Nous démontrons que la motilité spontanée de l'ensemble de l'appareil reproducteur de souris peut être rapidement et réversiblement inhibée par 1 épinéphrine de M dans ce modèle de plat de Petri. Documenter les changements de la motilité utérine peut être facilement fait à l'aide d'un téléphone intelligent ordinaire ou un appareil photo numérique sophistiqué. Nous avons développé un algorithme basé sur MATLAB permettant au suivi de mouvement de quantifier les changements spontanés de motilité utérine en mesurant le taux de mouvements de corne utérine. Un avantage majeur de cette approche ex vivo est que l'appareil reproducteur reste intact tout au long de l'expérience, préservant toutes les interactions cellulaires intra-utérines intrinsèques. La principale limitation de cette approche est que jusqu'à 10-20% de l'utérus peut ne présenter aucune motilité spontanée. Jusqu'à présent, il s'agit de la première méthode quantitative ex vivo pour évaluer la motilité utérine spontanée dans un modèle de plat Petri.

Introduction

En tant qu'organe féminin majeur, l'utérus est crucial pour la reproduction et essentiel pour la nourriture du fœtus¹. L'utérus se compose de trois couches : le perimetrium, le myometrium et l'endomètre. Le myometrium est la couche contractile principale de l'utérus et joue un rôle clé dans l'accouchement du fœtus. L'endomètre est la couche la plus interne qui tapisse la cavité utérine et est essentielle à l'implantation d'embryons. Chez les femelles non enceintes en âge de procréer, la couche endométriale est remise mensuellement au début du cycle menstruel. Le myometrium aide dans ce processus d'excrétion en maintenant les contractions myomét....

Protocole

Toutes les procédures avec des animaux ont été approuvées par le Comité institutionnel de soins et d'utilisation des animaux de l'École de médecine de l'Université de l'Indiana (Indianapolis, IN). Des souris femelles F2-129S-C57BL/6 sexuellement matures ont été utilisées dans l'étude.

MISE EN GARDE: Assurer la sécurité en portant un manteau de laboratoire, un masque et des gants lorsque vous travaillez avec des animaux et des matériaux biodangereux.

1. Préparation de la solution

1. Préparer le Krebs Buffer, qui contient: 130 mM NaCl, 5 mM KCl, 2 mM CaCl₂, 1,2 mM NaH₂P....

Résultats

La figure 1 montre des images représentatives prises pendant toute la procédure d'isolement de l'appareil reproducteur qui est décrite dans ce protocole. Pour éviter de contaminer le tampon avec de la fourrure, ce qui diminuerait la qualité vidéo, nous avons humidifié le corps de la souris avec 70% d'éthanol. La principale référence pour la section de dissection du protocole est de trouver la vessie urinaire. L'utérus et le vagin seront situés inférieurs à la vessie.

Discussion

Ici, nous avons décrit une méthode pour évaluer la contractilité spontanée de l'appareil reproducteur entier de rongeur, qui inclut les ovaires, les oviducts, les cornes utérines, et le vagin. Nous avons utilisé une méthode semblable pour démontrer l'effet relaxant de la phényléphrine sur la motilité utérine spontanée^13,cependant, dans le passé nous n'avons pas pu fournir l'analyse quantitative des données. Dans ce travail, nous avons développé un algorithme pour l'analyse quantitative des données.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Chlorhydrate d’épinéphrine	Sigma-Aldrich	; E4642  ;
de Dulbecco	sur PBS  ;	17-512Q
Éthanol 200 PROOF	Decon Laboratories	2701
NaCl	Sigma-Aldrich	S7653
Glucose	Sigma-Aldrich	G7528
KCl	Sigma-Aldrich	P9333
CaCl2 · ; 2H2O	Sigma-Aldrich	C5080
NaH2PO4	Sigma-Aldrich	S0751
MgCl2  ; · ; 6H2O	Sigma-Aldrich	M9272
NaHCO3	Sigma-Aldrich	S6297
Isoflurane, USP	Patterson Veterinary	07-893-2374
Dissection Pince à éclats de précision à pointes extra-fines	Fisher Sceintific	13-812-42
Ciseaux à iris fins incurvés trempés	Outils de sciences fines	14091-09
Dissection Stéréomicroscope modulaire haute performance	Leica	MZ6  ;
Appareil photo microscope couleur numérique de 5 mégapixels avec système de refroidissement actif	Leica	·s ; DFC425 C
Stereomaster Microscope Sources lumineuses à fibre optique	Fisher Sceintific  ;	12-562-21
Bateau de pesée	Fisher Sceintific  ;
Convertors Astound Standard Surgical Blouse  ;	Santé Cardinal  ;	9515	Petits, moyens ou grands
gants	McKesson Corporation	20-1080	Petits, moyens ou grands ; gants chirurgicaux stériles en latex ou en nitrile non poudrés
; Boîte de Pétri	Corning Falcon	351029	100 mm
; Boîte de Pétri	Corning Falcon	353001	35 mm
95 % O2- 5 % CO2 mélange gazeux	Praxair	; MM OXCD5-K
Masques à boucles d’oreille	Valumax International	5430E-PP
DSLR 24.2 MP Appareil photo	Canon	EOS Rebel T6i
MATLAB	MathWorks	N/A	version 2019 ou ultérieure

Le Fisher Sceintific WB30304