Ici, nous présentons des protocoles de culture des sphéroïdes cellulaires du ligament parodontal humain (PDL) par des films chitosan. La culture des sphéroïdes cellulaires tridimensionnels (3D) offre une alternative au système de culture de polystyrène de culture de tissu conventionnel (TCPS).
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Article de méthode
Formation de sphéroïdes cellulaires parodontaux humains sur Chitosan Films
* These authors contributed equally
Dans cet article
Résumé
Résumé
Les cellules parodontales de ligament (PDL) tiennent la grande promesse pour la régénération parodontale de tissu. Traditionnellement, les cellules PDL sont cultivées sur des substrats bidimensionnels (2D) tels que le polystyrène de culture tissulaire (TCPS). Cependant, des changements caractéristiques des cellules de PDL ont été observés pendant la culture in vitro. Ce phénomène est probablement dû au fait que le TCPS 2D diffère du microenvironnement tridimensionnel in vivo (3D). Comparées aux cellules cultivées sur des substrats 2D, les cellules cultivées dans un microenvironnement 3D présentent plus de similitudes aux cellules in vivo. Par conséquent, les modèles de culture de cellules 3D fournissent une alternative prometteuse pour la culture cellulaire 2D conventionnelle de monocouche. Pour améliorer les modèles conventionnels de culture cellulaire PDL, nous avons récemment développé une méthode de culture cellulaire 3D, qui est basée sur la formation sphéroïde de cellules PDL sur les films chitosan. Ici, nous présentons les protocoles détaillés de culture sphéroïde de cellules basés sur des films de chitosan. Le système de culture 3D des sphéroïdes cellulaires de PDL surmontent quelques-unes des limitations liées à la culture cellulaire conventionnelle de monocouche 2D, et peut ainsi être approprié pour produire des cellules de PDL avec une efficacité thérapeutique augmentée pour la régénération parodontale future de tissu.
Introduction
La parodontite, paraphée principalement par la plaque dentaire1, est caractérisée par les dommages des tissus parodontaux comprenant le ligament parodontal (PDL), l'os alvéolaire, et le ciment. Les traitements actuels pour la parodontite sont habituellement réussis à empêcher le progrès de la maladie active, mais la régénération des tissus parodontaux perdus demeure un défi clinique. Récemment, des progrès importants ont été réalisés dans les approches cellulaires pour la régénération des tissus parodontaux pour surmonter les inconvénients des traitements actuels2,3,
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Protocole
Le protocole d'étude a été approuvé par le Comité d'éthique de l'école et de l'hôpital de stomatologie de l'Université Tongji. Tous les patients ont fourni un consentement éclairé écrit.
1. Isolement cellulaire PDL
- Faire le milieu de prolifération pour la culture des cellules de PDL : moyen de '-MEM complété avec 10% FCS et 100 stylo/streptocoque d'U/mL.
- Préparer un récipient avec de la glace pour transférer les troisièmes molaires isolées.
- Stériliser les instruments chirurgicaux à l'aide d'un autoclave.
- Extraire les troisièmes molaires humaines normales d'adultes (18-28 ans) à la clinique dentaire de....
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Résultats
Utilisant le protocole actuel, les sphéroïdes viables de cellules de PDL ont été avec succès formés. La figure 1 a montré que les cellules suspendues ou les sphéroïdes au lieu des cellules attachées étaient principalement observées sur des films de chitosan. Pour la densité d'ensemencement de 0,5 x 104 cellules/cm2, des cellules PDL attachées ont été occasionnellement trouvées le jour 1 et 3, et des sphéroïdes de cellules de PDL ont été .......
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Discussion
La présente étude a introduit un système de culture de cellules 3D pour surmonter certaines limitations liées à la culture cellulaire monocouche 2D conventionnelle. Selon le protocole, les sphéroïdes cellulaires de PDL ont été avec succès formés par des cellules de culture sur des films de chitosan. Notre étude précédente a rapporté que la formation de sphéroïdes a augmenté les capacités d'auto-renouvellement et de différenciation ostéogénique des cellules de PDL14. Au lieu d'utiliser une enzyme p.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n'ont rien à révéler.
Remerciements
Cette étude a été parrainée par la National Natural Science Foundation of China (NSFC 81700978), les Fonds de recherche fondamentale pour les universités centrales (1504219050), la Natural Science Foundation of Shanghai (17ZR1432800) et le Shanghai Medical Exploration Project ( 17411972600).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| &alpha ;-MEM | Gibco | 11900-073 | |
| acide acétique ; | Sigma-Aldrich | 64197 | |
| Gourde de culture cellulaire 25 cm2 | Corning | 430639 | |
| Gourde de culture cellulaire 75 cm2 | Corning | 430641 | |
| Chitosan | Heppe Medical ; Chitosan GmbH | / | poids moléculaire 500 kDa, degré de désacétylation 85 % |
| FCS | Gibco | 26140-079 | |
| Kit de viabilité/cytotoxicité Vivant/mort | Moléculaire ; Sondes | L3224 | |
| NaOH | Sigma-Aldrich | 1310732 | |
| PBS | KeyGen Biotech ; | ||
| stylo/streptocoque | Gibco | 15140-122 | |
| Trypsine/EDTA ; | KeyGen Biotech ; | ||
| tube de centrifugation conique de 15 mL | Corning | 430790 | |
| Plaque à 24 puits | Corning | 3524 |
Références
- Albandar, J. M. Epidemiology and risk factors of periodontal diseases. Dental Clinics of North America. 49 (3), 517-532 (2005).
- Bartold, P. M., McCulloch, C. A., Narayanan, A. S., Pitaru, S. Tissue engineering: a new paradigm for periodo....
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Réimpressions et autorisations
