इम्यूनोडिफिएंट चूहों में लिवर ऑर्थोटोपिक ह्यूमन यूवील मेलानोमा ज़ेनोबेड़ा प्लेटफॉर्म की पीढ़ी
Summary
ऑर्थोटोपिक ह्यूमन लिवर मेटास्टैटिक यूवील मेलानोमा ज़ेनोबेड़ा माउस मॉडल को रोगी-व्युत्पन्न ट्यूमर का हिस्सा और सुई इंजेक्शन तकनीकों के साथ सर्जिकल ऑर्थोटोपिक इम्प्लांटेशन तकनीकों का उपयोग करके बनाया गया था।
Abstract
हाल के दशकों में, चमड़े के नीचे प्रत्यारोपित रोगी-व्युत्पन्न विद्वेष ट्यूमर या सुसंस्कृत मानव सेल लाइनों को पारंपरिक स्थापित मानव कोशिका की तुलना में इम्यूनोडेफिडेंट चूहों में मानव कैंसर का अध्ययन करने के लिए अधिक प्रतिनिधि मॉडल के रूप में तेजी से पहचाना गया है लाइनें इन विट्रो। हाल ही में, ऑर्थोटोपरिक रूप से प्रत्यारोपित रोगी-व्युत्पन्न ट्यूमर विद्वेष (पीडीएक्स) चूहों में मॉडल रोगी ट्यूमर की सुविधाओं को बेहतर ढंग से दोहराने के लिए विकसित किए गए हैं। एक जिगर ऑर्थोटोपिक विद्वेष माउस मॉडल एक उपयोगी कैंसर अनुसंधान मंच होने की उम्मीद है, जो ट्यूमर जीव विज्ञान और दवा चिकित्सा में अंतर्दृष्टि प्रदान करता है। हालांकि, लिवर ऑर्थोटोपिक ट्यूमर प्रत्यारोपण आम तौर पर जटिल है। यहां हम रोगी-व्युत्पन्न यकृत-मेटास्टैटिक यूवील मेलानोमा ट्यूमर के ऑर्थोटोपिक प्रत्यारोपण के लिए हमारे प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं। हमने मानव यकृत मेटास्टैटिक यूवील मेलानोमा सेल लाइनों को इम्यूनोडिफिजेंट चूहों में सुसंस्कृत किया। प्रोटोकॉल रोगी व्युत्पन्न यूवील मेलानोमा ट्यूमर या सुसंस्कृत मानव सेल लाइन के साथ एक सुई इंजेक्शन तकनीक के हिस्से के साथ या तो एक शल्य चिकित्सा ऑर्थोटोपिक प्रत्यारोपण तकनीक का उपयोग कर लगातार उच्च तकनीकी सफलता दरों में परिणाम कर सकते हैं । हम आंतरिक यकृत ट्यूमर का पता लगाने के लिए सीटी स्कैनिंग के लिए प्रोटोकॉल का भी वर्णन करते हैं और फिर से एनग्राफमेंट प्राप्त करने के लिए क्रायोपआरक्षित ट्यूमर का उपयोग करके पुनः प्रत्यारोपण तकनीकों का वर्णन करते हैं। साथ में, ये प्रोटोकॉल ट्रांसलेशनल रिसर्च में लिवर मेटास्टैटिक यूवील मेलानोमा के लिवर ऑर्थोटोपिक ट्यूमर माउस मॉडल के लिए एक बेहतर मंच प्रदान करते हैं।
Introduction
उवेल मेलानोमा पश्चिमी दुनिया में वयस्कों के बीच सबसे आम इंट्राओकुलर घातक ट्यूमर है। पिछले 50 वर्षों के दौरान, संयुक्त राज्य अमेरिका1,2में यूवील मेलानोमा (प्रति मिलियन 5.1 मामले) की घटनाएं स्थिर बनी हुई हैं। उवील मेलानोमा आईरिस, सिलियरी शरीर या कोरॉयड में मेलानोसाइट्स से उत्पन्न होता है, और यह मेटास्टेसिस विकसित होने पर एक अत्यंत घातक बीमारी है। मेटाटैस के प्रारंभिक निदान के बाद यूवील मेलानोमा मेटास्तासिस के रोगियों की मृत्यु दर 1 वर्ष में 80% और 2 वर्षों में 92% थी। मेटाटैस और मृत्यु के निदान के बीच का समय आम तौर पर कम होता है, 6 महीने से कम, चिकित्सा3,4के संबंध में। कैंसर रक्त के माध्यम से फैलता है और जिगर (89-93%)4,5के लिए मुख्यरूप से मेटास्टेसाइज करने की आदत है । लिवर-मेटास्टैटिक यूवील मेलानोमा की आगे की जांच के लिए एक प्रभावी माउस मॉडल की तत्काल आवश्यकता होती है। ट्रांसलेशनल रिसर्च के लिए लिवर-लोकलाइज्ड मेटास्टैटिक यूवील मेलानोमा माउस मॉडल जेनरेट करने की स्पष्ट मांग है ।
रोगी-व्युत्पन्न ट्यूमर विद्वेष (पीडीएक्स) माउस मॉडल व्यक्तिगत दवा रणनीतियों प्रदान करने की उम्मीद कर रहे हैं। ये मॉडल नैदानिक परिणामों के भविष्य कहनेवाला हो सकते हैं, प्रीक्लिनिकल दवा मूल्यांकन के लिए उपयोगी हो सकते हैं, और ट्यूमर6के जैविक अध्ययन के लिए उपयोग किए जा सकते हैं। प्रतिनिधि पीडीएक्स मॉडल एक्टोपिक रूप से ट्यूमर-प्रत्यारोपित विद्वेष चूहों हैं, जिन्हें चमड़े के नीचे साइटों पर ट्यूमर है। अधिकांश शोधकर्ता 7,8विशेषअभ्यासके बिना चमड़े के प्रत्यारोपण के लिए सर्जरी कर सकते हैं । वे आसानी से चमड़े के नीचे ट्यूमर की निगरानी भी कर सकते हैं। हालांकि चमड़े के नीचे PDX मॉडल अनुसंधान चरण में लोकप्रिय हो गया, वे व्यावहारिक उपयोग करने के लिए जाने में कुछ बाधाएं हैं । चमड़े के प्रत्यारोपण रोगी-व्युत्पन्न ट्यूमर को ट्यूमर की उत्पत्ति से एक अलग माइक्रोएनवायरमेंट पर एनग्राफेट करने के लिए प्रेरित करते हैं, ताकि यह एनाग्राफमेंट विफलता और धीमी ट्यूमर वृद्धि 9,10,11की ओर लेजाए, 12,13,14. ऑर्थोटोपिक एनग्राफमेंट पीडीएक्स मॉडल के लिए अधिक आदर्श और तर्कसंगत दृष्टिकोण हो सकता है क्योंकि यह मूल ट्यूमर15,16के समान अंग का उपयोग करता है .
हाल ही में, हमने एनओडी में एक सुसंस्कृत मानव यकृत-मेटास्टैटिक यूवील मेलानोमा सेल लाइन के साथ रोगी-व्युत्पन्न यकृत-मेटास्टैटिक यूवील मेलानोमा ट्यूमर और सुई इंजेक्शन तकनीकों की सर्जिकल ऑर्थोटोपिक इम्प्लांटेशन तकनीकों के लिए प्रोटोकॉल विकसित किए। सीजी-पीआरकेडीसीसिडआईएल2आरजीtm1Wjl/SzJ(NSG) चूहों17,18। प्रोटोकॉल लगातार उच्च तकनीकी सफलता दर ों में परिणाम है । हमने सीटी स्कैनिंग तकनीकों की भी स्थापना की जो आंतरिक यकृत ट्यूमर का पता लगाने के लिए उपयोगी हैं, और हमने पीडीएक्स प्लेटफॉर्म में क्रायोप्आरक्षित ट्यूमर का पुनः प्रत्यारोपण विकसित किया। हमने पाया कि यूवील मेलानोमा ट्यूमर ज़ेनोबेड़ा मॉडल मूल रोगी यकृत ट्यूमर की विशेषताओं को बनाए रखते हैं, जिसमें उनके हिस्टोपैथोलॉजिकल और आणविक विशेषताएं शामिल हैं। साथ में, ये तकनीक ट्रांसलेशनल रिसर्च में यूवील मेलानोमा के लिए लिवर ऑर्थोटोपिक ट्यूमर मॉडल के लिए एक बेहतर मंच प्रदान करती है।
Protocol
Representative Results
Discussion
वर्तमान ऑर्थोटोपिक ज़ेनोबेड़ा मॉडल श्रम-गहन, समय लेने वाले और बनाने के लिए महंगे हैं। लिवर कैंसर के लिए ऑर्थोटोपिक ट्यूमर ज़ेनोबेड़ा माउस मॉडल दो दशक पहले19,20,21से अधि…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
पांडुलिपि की समीक्षा के लिए हम एम ओहारा, के साइको और एम तराई के आभारी हैं। लेखक फॉक्स चेस कैंसर सेंटर में डॉ आर सातो द्वारा इस पांडुलिपि के संपादकीय और अंग्रेजी सहायता के लिए महत्वपूर्ण समीक्षा स्वीकार करते हैं । यहां वर्णित काम बोनी Kroll अनुसंधान कोष, मार्क Weinzierl अनुसंधान कोष, थॉमस जेफरसन विश्वविद्यालय में नेत्र मेलानोमा अनुसंधान कोष, ओसाका समुदाय फाउंडेशन, और JSPS KAKENHI अनुदान संख्या जेपी 18K15596 ओसाका सिटी में द्वारा समर्थित था विश्वविद्यालय. डॉ ए एप्लिन की प्रयोगशाला में अध्ययन ों को एनआईएच ग्रांट आर01 जीएम01 जीएम067893 द्वारा समर्थित किया गया था। इस परियोजना को डीन के परिवर्तनकारी विज्ञान पुरस्कार, थॉमस जेफरसन विश्वविद्यालय प्रोग्रामेटिक इनिशिएटिव अवार्ड द्वारा भी वित्त पोषित किया गया था।
Materials
| Materials, tissues and animals | |||
| Buprenorphine | |||
| CO2 tank | |||
| Cryomedium | |||
| Exitron nano 12000 (Alkaline earth metal-based nanoparticle contrast agent) | Miltenyl Biotec | 130-095-700 | |
| HBSS 1X, with calcium & magnesium | Corning | 21-020-CM | |
| Human liver metastatic uveal melanoma cell line | |||
| Human uveal melanoma tissue in the liver | All tissue handling should be done in a Biosafety Level 2 hood. Be careful when working with human tissue; always use gloves and avoid direct skin contact. Assume patients may have been infected with HIV or other highly transmissible organisms. Do not process samples known to carry infections. | ||
| Iodine | |||
| Isoflurane | Purdue Products | 67618-150-17 | |
| Isopropanol | Fisher scientific | A416-1 | Avoid direct contact to skin and eye and inhalation of anesthetic agent. |
| Liquid nitrogen | |||
| Matrigel HC | BD | 354248 | |
| NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) mice | Jackson Lab | 5557 | 4 to 8 weeks old |
| PBS 1X, without calcium and magnesium | Corning | 21-031-CM | |
| RPMI 1640 | Corning | 10-013-CV | |
| Sterile alcohol prep pad (70% isopropyl alcohol) | Nice-Pak products | B603 | |
| 4% paraformaldehyde phosphate buffer solution | Wako | 163-20145 | |
| 70% Ethyl alcohol solution | Fisher Scientific | 04-355-122 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipments | |||
| Absorbable hemostat | Johnson and Johnson | 63713-0019-61 | |
| Autoclave | |||
| Body weight measure | |||
| Cautery | Bovie Medical | MC-23009 | |
| Cell counter | |||
| Centrifuzer | |||
| Cotton swab | |||
| Cryo freezing container | NALGENE | 5100-0001 | |
| Cryotube | SARSTEDT | 72.379 | |
| Curved scissors | World Precision Instruments | 503247 | |
| Curved ultrafine forceps | World Precision Instruments | 501302 | |
| Fabric sheet | |||
| Freezer | |||
| F/AIR Filter Canister | Harvard Apparatus | 600979 | |
| Heating pad | |||
| Isoflurane vaporizer | Artisan Scientific | 66317-1 | |
| Liquid nitrogen | |||
| Liquid nitrogen jar | Thermo Fisher Scientific | 2123 | |
| Micro-CT scan | Siemens | ||
| Needle holder | World Precision Instruments | 501246 | |
| Petri dishes | Fisher Scientific | FB0875713 | |
| Pipette | |||
| Spray bottle | |||
| Sterile hood | Biosafety level 2 cabinet | ||
| Sterile No.11 scalpel | AD Surgical | A300-11-0 | |
| Straight forceps | World Precision Instruments | 14226 | |
| Surgical drape | |||
| Tail vein restrainer | Braintree Scientific | TV-150-STD | |
| Water bath | |||
| 1 ml TB syringe with 27-gauge needle | BD | 309623 | |
| 1.7 ml tube | Bioexpress | C-3260-1 | |
| 5-0 PDO Suture | AD Surgical | S-D518R13 | |
| 15 mL conical tubes | AZER SCIENTIFIC | ES-9152N | |
| 27-gauge needle | BD | 780301 | |
| 27-gauge needle | Hamilton | 7803-01 | |
| 50 mL conical tubes | AZER SCIENTIFIC | ES-9502N | |
| 50 µl micro syringe | BD | 80630 | |
| 50 µl micro syringe | Hamilton | 7655-01 | |
| 100 mL container | Fisher Scientific | 12594997 | |
| 200μl tip |
References
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