Extraction de cortisol à partir de matrices de nageoires d'esturgeon et de mâchoires

Jalil Ghassemi Nejad; Mohammad Ataallahi; Mohammad H. Salmanzadeh; Kyung T. Park; Hong G. Lee; Alireza Shoae; Atieh Rahimi; Kyung I. Sung; Kyu H. Park

doi:10.3791/59961

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Article de méthode

Extraction de cortisol à partir de matrices de nageoires d'esturgeon et de mâchoires

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DOI :

10.3791/59961

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10 septembre 2019

Jalil Ghassemi Nejad¹^,² , Mohammad Ataallahi¹ , Mohammad H. Salmanzadeh³ , Kyung T. Park³ , Hong G. Lee²^,⁴ , Alireza Shoae⁵ , Atieh Rahimi⁶ , Kyung I. Sung¹ , Kyu H. Park¹

¹College of Animal Life Sciences, Kangwon National University, ²Team of An Educational Program for Specialists in Global Animal Science, Brain Korea 21 Plus Project, Konkuk University, ³Persian Gesture, ⁴Department of Animal Science and Technology, College of Animal Bioscience and Technology, Konkuk University, ⁵Department of Animal Science, Animal Physiology, AgResearch, ⁶Faculty of Agriculture, Animal Science Department, Ferdowsi University of Mashhad

Dans cet article

Résumé

Dans cette étude, nous présentons un protocole pour l'extraction de cortisol de la nageoire et de la mâchoire des espèces d'esturgeons. Les niveaux de cortisol de fin et de mâchoire ont été plus loin examinés en comparant deux solvants de lavage suivis des essais d'ELISA. Cette étude a mis à l'essai la faisabilité du cortisol de mâchoire comme indicateur de stress nouveau.

Résumé

Les objectifs de cette étude étaient de développer une technique pour l'extraction du cortisol à partir d'ailerons d'esturgeon à l'aide de deux solvants de lavage (eau et isopropanol) et de quantifier les différences dans les niveaux de cortisol des nageoires parmi trois principales espèces d'esturgeons. Les nageoires ont été récoltées à partir de 19 esturgeons sacrifiés, dont sept bélugas (Huso huso), sept Sibériens (Acipenser baerii), et cinq sevruga (A. stellatus). Les esturgeons ont été élevés dans des fermes iraniennes pendant deux ans (2017-2018), et l'analyse de l'extraction du cortisol a été menée en Corée du Sud (janvier-février 2019). Des mâchoires de cinq H. huso ont également été employées pour l'extraction de cortisol. Les données ont été analysées à l'aide de la procédure générale de modèle linéaire (GLM) dans l'environnement SAS. Les coefficients de variation intra- et inter-assay étaient respectivement de 14,15 et 7,70. En bref, la technique d'extraction du cortisol consistait à laver les échantillons (300 à 10 mg) avec 3 ml de solvant (eau ultrapure et isopropanol) deux fois, rotation à 80 tr/min pendant 2,5 min, séchage à l'air des échantillons lavés à température ambiante (22-28 oC) pendant 7 jours, séchage supplémentaire les échantillons à l'aide d'un batteur de perles à 50 Hz pendant 32 min et les broyant en poudre, en appliquant 1,5 ml de méthanol à la poudre séchée (75 à 5 mg), et la rotation lente (40 tr/min) pendant 18 h à température ambiante avec mélange continu. Après extraction, les échantillons ont été centrifuges (9 500 x g pour 10 min), et 1 mL de supernatant a été transféré dans un nouveau tube de microcentrifuge (1,5 mL), incubé à 38 oC pour évaporer le méthanol, et analysé par l'intermédiaire d'un essai immunosorbent lié aux enzymes (ELISA) . Aucune différence n'a été observée dans les niveaux de cortisol des nageoires chez les espèces ou dans les niveaux de cortisol des nageoires et des mâchoires entre les solvants de lavage. Les résultats de cette étude démontrent que la matrice de mâchoire d'esturgeon est un indicateur alternatif prometteur d'effort aux matrices pleines.

Introduction

Le cortisol est un indicateur fiable du stress animal. L'extraction de cortisol fournit un cadre valide pour les chercheurs pour surveiller les niveaux de stress et les modèles généraux dans les facteurs de stress. Par exemple, des études antérieures ont mené la validation méthodologique des mesures de cortisol de cheveux utilisant diverses méthodes chez l'homme¹^,², singes³^,⁴, bovins⁵, moutons⁶, et poisson rouge⁷^,⁸. Chez les espèces de poissons, i....