Murine Modelo de Transplante de Aorta Cervical usando uma técnica de manguito não sutura modificada
Summary
Aqui, apresentamos um protocolo de transplante heterotópico da aorta em camundongos usando a técnica de manguito não sutura em um modelo de urina cervical. Este modelo pode ser usado para estudar a patologia subjacente da vasculopatia aloenxerto crônica (CAV) e pode ajudar a avaliar novos agentes terapêuticos, a fim de evitar a sua formação.
Abstract
Com a introdução de poderosos protocolos imunossupressores, avanços distintos são possíveis na prevenção e terapia de episódios de rejeição aguda. No entanto, apenas pequenas melhorias nos resultados a longo prazo de órgãos sólidos transplantados puderam ser observadas nas últimas décadas. Nesse contexto, a vasculopatia crônica do aloenxerto (CAV) ainda representa a principal causa de insuficiência de órgãos tardia em transplante cardíaco, renal e pulmonar.
Até agora, a patogênese subjacente do desenvolvimento da CAV permanece obscura, explicando por que as estratégias de tratamento eficazes estão atualmente ausentes e enfatizando a necessidade de modelos experimentais relevantes, a fim de estudar a fisiopatologia subjacente Formação CAV. O seguinte protocolo descreve um modelo heterotópico da transplantação do aortic do heterotópico do murine usando uma técnica modificada do punho da não-sutura. Nesta técnica, um segmento da aorta torácica é interposicionado na artéria carótida comum direita. Com o uso da técnica de manguito não sutura, um modelo fácil de aprender e reproduzível pode ser estabelecido, minimizando a possível heterogeneidade do micro anastomoses vascular suturado.
Introduction
Ao longo das últimas seis décadas, o transplante de órgãos sólidos evoluiu de um procedimento experimental para um padrão de atendimento para o tratamento da falência de órgãos em estágio final1. Devido à melhoria dos agentes antimicrobianos, técnicas cirúrgicas e avanço em regimentos imunossupressores, a taxa de sucesso precoce do transplante de órgãos sólidos aumentou significativamente nas últimas décadas2.
No entanto, as taxas de sobrevivência a longo prazo do enxerto não melhoraram significativamente da mesma forma3. O desenvolvimento da CAV é o principal fator que limita a sobrevivência a longo prazo4,5,6. Esta patologia é caracterizada pela formação de uma camada neointimal concêntrica composta por células musculares lisas, levando ao estreitamento progressivo do vaso e à malperfusão consecutiva do órgão sólido transplantado. Em receptores de transplante cardíaco, lesões CAV podem ser diagnosticadas em até 75% dos pacientes 3 anos após o transplante7.
A fisiopatologia da CAV ainda não é totalmente compreendida. Parece estar relacionado a inúmeros fatores imunológicos e não imunológicos, levando a danos endotélios com posterior ativação endotelial e disfunção8. Até agora, não existe opção de tratamento causal para a prevenção da CAV, enfatizando a necessidade de um modelo animal pequeno reproduzível, a fim de estudar a formação e potencial terapia da CAV.
Com o uso de modelos de transplante de aorta murine, CAV como lesões podem ser vistos 4 semanas após o transplante. Essas lesões consistem principalmente de células musculares lisas vasculares, assim, assemelhando-se à patologia humana. Devido a uma grande variedade de camundongos transgênicos e nocauteados, o uso de modelos de camundongos em patologias associadas ao transplante oferece uma oportunidade única para identificar novas opções terapêuticas e entender seu desenvolvimento. Devido ao pequeno diâmetro dos vasos transplantados no entanto, o uso de modelos de camundongos é comumente associado a curvas de aprendizagem longas e uma alta taxa de complicação inicial9. Com a introdução da técnica de manguito não sutura, esta parte mais desafiadora da operação pode ser facilitada e o diâmetro da anastomose é mantido constante10,11.
Protocol
Representative Results
Discussion
A vasculopatia aloenxerto crônica é a principal causa de perda tardia do enxerto após o transplante de órgãos sólidos do coração e provável renal e pulmão aloenxertos8. Até agora, nenhum regime terapêutico causal poderia ser desenvolvido a fim impedir a formação de CAV.
A fisiopatologia da CAV é multifatorial e envolve aspectos imunológicos e não imunológicos16. O uso de modelos de roedores no transplante tem sido essencial para…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nenhum.
Materials
| Balb-c Mice (H2-d) | Charles River | Strain# 028 | Donor animal |
| Bipolar cautery system | ERBE | ICC 50 / 20195-023 | Bipolar cautery |
| C57BL/6J (H-2b) | Charles River | Strain# 027 | Recipient animal |
| Halsey Needle Holders | FST | 12501-12 | Needle Holder |
| Halsted-Mosquito Forceps | AESCULAP | BH111R | Curved Clamp |
| Medical Polyimide Tubing | Nordson MEDICAL | 141-0031 | Cuff-Material |
| Micro Serrefines | FST | 18055-04 | Micro Vessel Clip |
| Micro-Adson Forceps (serrated) | FST | 11018-12 | Standard Forceps |
| Micro-Serrefine Clamp Applying Forceps | FST | 18057-14 | Clipapplicator |
| S&T Forceps – SuperGrip Tips (Angled 45°) | S&T | 00649-11 | Fine Forceps |
| S&T Vessel Dilating Forceps – Angled 10° (Tip diameter 0.2 mm) | S&T | 00125-11 | Vesseldilatator |
| Schott VisiLED Set | Schott | MC 1500 / S80-55 | Light |
| Stereoscopic microscope | ZEISS | SteREO Discovery.V8 | Microscope |
| Student Fine Scissors / Surgical Scissors – Sharp-Blunt | FST | 91460-11 / 14001-12 | Standard Sissors |
| Vannas-Tübingen Spring Scissors (curved, 8.5 cm) | FST | 15004-08 | Microsissors (curved) |
| Vannas-Tübingen Spring Scissors (straight, 8.5 cm) | FST | 15003-08 | Microsissors (straight) |
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