Modifiye Dikişsiz Manşet Tekniği Kullanılarak Murine Servikal Aort Transplantasyon Modeli
Summary
Burada servikal mürin modelinde sütür olmayan manşet tekniği ni kullanarak farelerde heterotopik aort transplantasyonu protokolünü salıyoruz. Bu model kronik allogreft vaskülopatinin (CAV) altta yatan patolojisini incelemek için kullanılabilir ve oluşumunu önlemek için yeni terapötik ajanların değerlendirilmesine yardımcı olabilir.
Abstract
Güçlü immünsupresif protokollerin devreye girmesiyle akut ret ataklarının önlenmesi ve tedavisinde belirgin ilerlemeler mümkündür. Ancak, nakledilen katı organların uzun vadeli sonuçlarında son on yıllarda sadece küçük bir iyileşme gözlemlenebilir. Bu bağlamda kronik allogreft vaskülopati (CAV) kardiyak, renal ve pulmoner transplantasyonda geç organ yetmezliğinin en önemli nedenidir.
Şimdiye kadar, CAV gelişiminin altında yatan patogenezi belirsizliğini koruyor, etkili tedavi stratejilerinin neden şu anda eksik olduğunu açıklamak ta ve altta yatan patofizyolojiyi incelemek için ilgili deneysel modellere ihtiyaç duyulduğunu vurgulamak CAV oluşumu. Aşağıdaki protokol, modifiye edilmiş dikişsiz manşet tekniği kullanılarak bir murine heterotopik servikal aort transplantasyon modelini tanımlamaktadır. Bu teknikte, torasik aort bir segment sağ ortak karotis arter interpositioned. Dikişsiz manşet tekniğinin kullanımı ile, kolay öğrenilebilir ve tekrarlanabilir bir model oluşturulabilir, dikişli vasküler mikro anastomozların olası heterojenliği en aza indirerek.
Introduction
Son 60 yılda, katı organ nakli deneysel bir prosedürden son dönem organyetmezliğinin tedavisi için bir bakım standardına evrilmiştir 1. Antimikrobiyal ajanların iyileştirilmesi, cerrahi teknikler ve immünsupresif alaylarda ilerleme nedeniyle, katı organ naklinin erken başarı oranı son yıllarda önemli ölçüde artmıştır2.
Ancak, uzun vadeli greft sağkalım oranları önemli ölçüde aynı şekilde iyileşmemiştir3. CAV gelişimi uzun süreli sağkalım sınırlayan önemlifaktördür 4,5,6. Bu patoloji, düz kas hücrelerinden oluşan konsantrik bir neointimal tabaka oluşumu ile karakterizedir, damar ın ilerleyici daralma ve nakledilen katı organın ardışık malperfüzyonyol. Kalp nakli alıcılarında, TRANSPLANTASYONdan 3 yıl sonra hastaların %75’inde CAV lezyonları teşhis edilebilir7.
CAV patofizyolojisi henüz tam olarak anlaşılamamıştır. Bu çok sayıda immünolojik ve immünolojik olmayan faktörler ile ilgili gibi görünüyor, sonraki endotel aktivasyonu ve disfonksiyon ile endotel hasarına yol açan8. Cav’ın oluşumunu ve potansiyel tedavisini incelemek için tekrarlanabilir küçük hayvan modeline ihtiyaç duyulduğunu vurgulayarak, CAV’nin önlenmesi için şimdiye kadar nedensel tedavi seçeneği bulunmamaktadır.
Murine aort transplantasyon modellerinin kullanımı ile transplantasyondan 4 hafta sonra cav benzeri lezyonlar görülebilir. Bu lezyonlar esas olarak vasküler düz kas hücrelerinden oluşur, bu nedenle, insan patolojisini andıran. Çok çeşitli transgenik ve nakavt fareler nedeniyle, nakil ile ilişkili patolojilerde fare modellerinin kullanımı yeni tedavi seçeneklerini belirlemek ve gelişimlerini anlamak için eşsiz bir fırsat sunar. Ancak nakledilen damarların küçük çapı nedeniyle, fare modellerinin kullanımı genellikle uzun öğrenme eğrileri ve ilk yüksek komplikasyon oranı ile ilişkilidir9. Dikişsiz manşet tekniğinin devreye girmesiyle operasyonun bu en zorlu kısmı kolaylaşabilir ve anastomozun çapı10,11sabit tutulur.
Protocol
Representative Results
Discussion
Kronik allogreft vaskülopati kalp ve muhtemel böbrek ve akciğer allogreftlerinin solid organ nakli sonrası geç greft kaybının başlıca nedenidir8. Cav oluşumunu önlemek için şimdiye kadar nedensel terapötik rejim geliştirilememiştir.
CAV patofizyolojisi multifaktöriyel ve immünolojik ve immünolojik olmayan yönleri içerir16. Transplantasyonda kemirgen modellerinin kullanımı, solid organ naklinde allogreft ret süreçlerinin a…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Hiçbiri.
Materials
| Balb-c Mice (H2-d) | Charles River | Strain# 028 | Donor animal |
| Bipolar cautery system | ERBE | ICC 50 / 20195-023 | Bipolar cautery |
| C57BL/6J (H-2b) | Charles River | Strain# 027 | Recipient animal |
| Halsey Needle Holders | FST | 12501-12 | Needle Holder |
| Halsted-Mosquito Forceps | AESCULAP | BH111R | Curved Clamp |
| Medical Polyimide Tubing | Nordson MEDICAL | 141-0031 | Cuff-Material |
| Micro Serrefines | FST | 18055-04 | Micro Vessel Clip |
| Micro-Adson Forceps (serrated) | FST | 11018-12 | Standard Forceps |
| Micro-Serrefine Clamp Applying Forceps | FST | 18057-14 | Clipapplicator |
| S&T Forceps – SuperGrip Tips (Angled 45°) | S&T | 00649-11 | Fine Forceps |
| S&T Vessel Dilating Forceps – Angled 10° (Tip diameter 0.2 mm) | S&T | 00125-11 | Vesseldilatator |
| Schott VisiLED Set | Schott | MC 1500 / S80-55 | Light |
| Stereoscopic microscope | ZEISS | SteREO Discovery.V8 | Microscope |
| Student Fine Scissors / Surgical Scissors – Sharp-Blunt | FST | 91460-11 / 14001-12 | Standard Sissors |
| Vannas-Tübingen Spring Scissors (curved, 8.5 cm) | FST | 15004-08 | Microsissors (curved) |
| Vannas-Tübingen Spring Scissors (straight, 8.5 cm) | FST | 15003-08 | Microsissors (straight) |
References
- Rana, A., et al. Survival benefit of solid-organ transplant in the United States. JAMA Surgery. 150 (3), 252-259 (2015).
- Rana, A., Godfrey, E. L. Outcomes in Solid-Organ Transplantation: Success and Stagnation. Texas Heart Institute Journal. 46 (1), 75-76 (2019).
- Meier-Kriesche, H. U., Schold, J. D., Srinivas, T. R., Kaplan, B. Lack of improvement in renal allograft survival despite a marked decrease in acute rejection rates over the most recent era. American Journal of Transplantation. 4 (3), 378-383 (2004).
- Bagnasco, S. M., Kraus, E. S. Intimal arteritis in renal allografts: new takes on an old lesion. Current Opinion in Organ Transplantation. 20 (3), 343-347 (2015).
- Hollis, I. B., Reed, B. N., Moranville, M. P. Medication management of cardiac allograft vasculopathy after heart transplantation. Pharmacotherapy. 35 (5), 489-501 (2015).
- Verleden, G. M., Raghu, G., Meyer, K. C., Glanville, A. R., Corris, P. A new classification system for chronic lung allograft dysfunction. The Journal of Heart and Lung Transplantation. 33 (2), 127-133 (2014).
- Ramzy, D., et al. Cardiac allograft vasculopathy: a review. Canadian Journal of Surgery. 48 (4), 319-327 (2005).
- Skoric, B., et al. Cardiac allograft vasculopathy: diagnosis, therapy, and prognosis. Croatian Medical Journal. 55 (6), 562-576 (2014).
- Koulack, J., et al. Development of a mouse aortic transplant model of chronic rejection. Microsurgery. 16 (2), 110-113 (1995).
- Rowinska, Z., et al. Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation – An Instructional Video. Journal of Visualized Experiments. (128), (2017).
- Dietrich, H., et al. Mouse model of transplant arteriosclerosis: role of intercellular adhesion molecule-1. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 20 (2), 343-352 (2000).
- Mähler Convenor, M., et al. FELASA recommendations for the health monitoring of mouse, rat, hamster, guinea pig and rabbit colonies in breeding and experimental units. Laboratory Animals. 48 (3), 178-192 (2014).
- Ollinger, R., et al. Blockade of p38 MAPK inhibits chronic allograft vasculopathy. Transplantation. 85 (2), 293-297 (2008).
- Thomas, M. N., et al. SDF-1/CXCR4/CXCR7 is pivotal for vascular smooth muscle cell proliferation and chronic allograft vasculopathy. Transplant International. 28 (12), 1426-1435 (2015).
- Ollinger, R., et al. Bilirubin: a natural inhibitor of vascular smooth muscle cell proliferation. Circulation. 112 (7), 1030-1039 (2005).
- Segura, A. M., Buja, L. M. Cardiac allograft vasculopathy: a complex multifactorial sequela of heart transplantation. Texas Heart Institute Journal. 40 (4), 400-402 (2013).
- McDaid, J., Scott, C. J., Kissenpfennig, A., Chen, H., Martins, P. N. The utility of animal models in developing immunosuppressive agents. European Journal of Pharmacology. 759, 295-302 (2015).
- Shi, C., Russell, M. E., Bianchi, C., Newell, J. B., Haber, E. Murine model of accelerated transplant arteriosclerosis. Circulation Research. 75 (2), 199-207 (1994).
- Koulack, J., et al. Importance of minor histocompatibility antigens in the development of allograft arteriosclerosis. Clinical Immunology and Immunopathology. 80 (3 Pt 1), 273-277 (1996).
- Maglione, M., et al. A novel technique for heterotopic vascularized pancreas transplantation in mice to assess ischemia reperfusion injury and graft pancreatitis. Surgery. 141 (5), 682-689 (2007).
- Oberhuber, R., et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. Journal of Visualized Experiments. (92), e50753 (2014).
- Nakao, A., Ogino, Y., Tahara, K., Uchida, H., Kobayashi, E. Orthotopic intestinal transplantation using the cuff method in rats: a histopathological evaluation of the anastomosis. Microsurgery. 21 (1), 12-15 (2001).
