小鼠中可逆硅油诱发眼部高血压模型
Summary
在这里，我们提出了一个方案，通过硅胶油的宫内注射和从前腔中取出硅油的程序，诱导小鼠眼睛的眼内高血压和青光眼神经变性， 以返回升高的眼内压力正常。
Abstract
眼内压力升高 （IOP） 是青光眼的一个详细记录的危险因素。在这里，我们描述了一种在小鼠中持续诱导稳定的IOP高程的新方法，该方法模仿了在人类视网膜手术中使用硅油（SO）作为棉布剂的术后并发症。在此协议中，SO被注射到小鼠眼睛的前室，以阻止学生，防止水性幽默的流入。后室积累水性幽默，这反过来又增加了后段的IOP。单次SO注射可产生可靠、充足和稳定的IOP高程，从而诱发显著的青光眼神经退化。此模型是眼科诊所中继发性青光眼的真实复制。为了进一步模拟临床设置，SO 可以从前室中取出，以重开排水通道，并允许水性幽默的流入，水性幽默通过前室的角度通过眼网状工程 （TM） 排出。由于 IOP 很快恢复正常，该模型可用于测试降低 IOP 对青光眼视网膜性结条细胞的影响。该方法简单明了，不需要特殊设备或重复程序，密切模拟临床情况，可适用于多种动物物种。但是，可能需要稍作修改。
Introduction
视网膜结结细胞（RGCs）及其斧头的逐渐丧失是青光眼的标志，青光眼是视网膜1中常见的神经退行性疾病。到2040年，它将影响超过1亿40-80岁的人。IOP仍然是青光眼发展和进展中唯一可改变的风险因素。为了探索青光眼的发病机制、进展和潜在治疗，一种可靠、可重复和诱导的实验性眼高血压/青光眼模型，复制人类患者的关键特征势在必行。
IOP 取决于从后室的纤毛体流入前室的水性幽默，并在前室的角度通过眼网状物 （TM） 流出。达到稳定状态后，IOP 保持不变。当流入超过或小于流出时，IOP 将分别上升或下降。通过通过遮挡前腔室的角度或破坏TM来减少水流出，已经建立了3、4、5、6、7、8、9、10。这些模型通常与不可逆的眼组织损伤相关，前腔的高 IOP 也会导致不必要的并发症，如角膜水肿和眼内炎症，这使得视网膜成像和视觉功能测定难以执行和解释。
为了开发一个克服这些缺点的模型，我们专注于由硅油（SO）引起的二次青光眼，它作为人类视网膜手术的术后并发症发生11，12。SO因其高表面张力而被用作视网膜手术中的棉签。然而，SO可以物理遮挡学生，因为它比水液和vita流体轻，防止水流入前室。由于水性幽默积累，阻碍导致后室的IOP高程。这促使我们开发和描述基于宫内SO注射和小孔块13的新型眼高血压小鼠模型，其关键特征是继发性青光眼：有效的小毛块、在SO去除后可恢复正常的显著IOP高程，以及青光眼神经变性。
在这里，我们提出了一个详细的协议，SO诱导眼高血压在小鼠眼睛，包括SO注射和去除和IOP测量。
Protocol
Representative Results
Discussion
在这里，我们演示了一个简单但有效的程序，通过内部注入SO诱导小鼠眼睛持续IOP升高。在显微镜下有微解剖经验的人可以很快地学习这个程序。失效的主要潜在风险是角膜切口的SO泄漏。然而，使用SO的优点之一是，由于油滴是可见的和可测量的，我们可以很容易地识别接收的液滴太小，在注射后很快诱导稳定的眼高血压的小鼠，并将其排除在后续实验中。我们通常取得了80%的成功率，并排除了?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作由NIH授予EY024932、EY023295和EY028106至YH支持。
Materials
| 0.5% proparacaine hydrochloride | Akorn, Somerset | ||
| 10mL syinge | BD | Luer-Lok Tip | |
| 18G needle | BD | with Regular Bevel, Needle Length:25.4 mm | |
| 2,2,2-Tribromoethanol (Avertin) | Fisher Scientific | CAS# 75-80-9 | 50g |
| 32G nano | BD | 320122 | BD Nano Ultra Fine Pen Needle-32G 4mm |
| 33G ophalmology needle | TSK/ VWR | TSK3313/ 10147-200 | |
| 5mL syinge | BD | Luer-Lok Tip | |
| AnaSed Injection (xylazine) | Butler Schein | 100 mg/ml, 50 ml | |
| artificial tears | Alcon Laboratories | 300651431414 | Systane Ultra Lubricant Eye Drops |
| BSS PLUS Irrigating solution | Alcon Laboratories | 65080050 | |
| Dual-Stage Glass Micropipette Puller | NARISHIGE | PC-10 | |
| EZ-7000 Classic System | EZ system | ||
| Isoflurane | VetOne | 502017 | isoflurane, USP, 250ml/bottle |
| IV Administration sets | EXELint/ Fisher | 29081 | |
| KETAMINE HYDROCHLORIDE INJECTION | VEDCO | 50989-996-06 | KETAVED 100mg/ml * 10ml |
| microgrind bevelling machine | NARISHIGE | EG-401 | |
| Miniature EVA Tubing | McMaster-Carr | 1883T4 | 0.05" ID, 0.09" OD, 10 ft. Length |
| silicon oil (SILIKON) | Alcon Laboratories | 8065601185 | 1,000 mPa.s |
| Standard Glass Capillaries | WPI/ Fisher | 1B150-4 | 4 in. (100mm) OD 1.5mm ID 0.84mm |
| TonoLab tonometer | Colonial Medical Supply, Finland | ||
| veterinary antibiotic ointment | Dechra Veterinary | 1223RX | BNP ophthalmic ointment, Vetropolycin |
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