Um modelo reversível da hipertensão ocular óleo-induzida do silicone nos ratos
Summary
Aqui, apresentamos um protocolo para induzir hipertensão ocular e neurodegeneração glaucomatous nos olhos do rato por injeção intracameral de óleo de silicone e o procedimento para a remoção de óleo de silicone da câmara anterior para retornar pressão intraocular elevada para Normal.
Abstract
A pressão intraocular elevada (OPP) é um fator de risco bem documentado para glaucoma. Aqui descrevemos um novo método eficaz para induzir consistentemente a elevação estável de IOP em camundongos que imita a complicação pós-operatória do uso de óleo de silicone (SO) como um agente de tamponada na cirurgia de vitreoretinal humana. Neste protocolo, SO é injetado na câmara anterior do olho do rato para bloquear a pupila e evitar o fluxo de humor aquoso. A câmara posterior acumula humor aquoso e isso, por sua vez, aumenta o IOP do segmento posterior. Uma única injeção de SO produz elevação de IOP confiável, suficiente e estável, o que induz neurodegeneração glaucomatous significativa. Este modelo é uma verdadeira réplica do glaucoma secundário na clínica oftalmológica. Para imitar ainda mais o ambiente clínico, assim pode ser removido da câmara anterior para reabrir a via de drenagem e permitir o fluxo de humor aquoso, que é drenado através da malha trabecular (TM) no ângulo da câmara anterior. Como o IOP retorna rapidamente ao normal, o modelo pode ser usado para testar o efeito da redução do IOP nas células ganglionares da retina glaucomatous. Este método é simples, não requer equipamentos especiais ou procedimentos de repetição, simula de perto situações clínicas e pode ser aplicável a diversas espécies animais. No entanto, pequenas modificações podem ser necessárias.
Introduction
A perda progressiva de células ganglionares da retina (RGCs) e seus axônios é a marca registrada do glaucoma, uma doença neurodegenerativa comum na retina1. Afetará mais de 100 milhões de indivíduos de 40 a 80 anos até 20402. O IOP continua a ser o único fator de risco modificável no desenvolvimento e progressão do glaucoma. A fim de explorar a patogênese, progressão e tratamentos potenciais de glaucoma, um modelo de hipertensão ocular experimental/glaucoma confiável, reproduzível e indutor que reproduz as principais características dos pacientes humanos é imperativo.
O IOP depende da entrada aquosa do humor à câmara anterior do corpo ciliary na câmara posterior e da saída através do meshwork trabecular (TM) no ângulo da câmara anterior. Ao chegar a um estado estável, o IOP é mantido. Quando o fluxo excede ou é menor do que a saída, o IOP sobe ou cai respectivamente. Ao diminuir a saída aquosa, quer occluding o ângulo da câmara anterior ou por danificar o TM, vários modelos de glaucoma foram estabelecidos3,4,5,6,7,8,9,10. Esses modelos estão normalmente associados a danos irreversíveis do tecido ocular, e o alto OPE na câmara anterior também causa complicações indesejadas, como edema córnea e inflamação intraocular, que dificultam a realização e interpretação da imagem ocular da retina.
Para desenvolver um modelo que supere essas deficiências, nos concentramos no glaucoma secundário bem sudocumenta causado pelo óleo de silicone (SO) que ocorre como uma complicação pós-operatória da cirurgia vitreoretinal humana11,12. Assim é usado como um tamponade em cirurgias da retina por causa de sua tensão de superfície elevada. No entanto, Assim pode fisicamente ocluir a pupila, porque é mais leve do que os fluidos aquosos e vítreos, o que impede o fluxo aquoso para a câmara anterior. A obstrução causa elevação do IOP na câmara posterior devido à acumulação aquosa do humor. Isso nos motivou a desenvolver e caracterizar um novo modelo de camundongo hipertensão ocular baseado na injeção intracameral SO e no bloco pupilar13,com características-chave do glaucoma secundário: bloco pupillar eficaz, elevação significativa do IOP que pode retornar ao normal após a remoção de SO e neurodegeneração glaucomatous.
Aqui apresentamos um protocolo detalhado para hipertensão ocular induzida por SO no olho do rato, incluindo injeção e remoção de SO e medição de IOP.
Protocol
Representative Results
Discussion
Aqui demonstramos um procedimento simples, mas eficaz para induzir a elevação sustentada de OPP no olho do rato por injeção intracameral de SO. Este procedimento pode ser aprendido rapidamente por qualquer pessoa com experiência em microdissecção um microscópio. O principal risco potencial de falha é o vazamento de SO da incisão da córnea. No entanto, uma das vantagens do uso de SO é que, como a gota de óleo é visível e mensurável, podemos facilmente identificar camundongos que receberam gotículas pequen…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho é apoiado por nih concede EY024932, EY023295, e EY028106 para YH.
Materials
| 0.5% proparacaine hydrochloride | Akorn, Somerset | ||
| 10mL syinge | BD | Luer-Lok Tip | |
| 18G needle | BD | with Regular Bevel, Needle Length:25.4 mm | |
| 2,2,2-Tribromoethanol (Avertin) | Fisher Scientific | CAS# 75-80-9 | 50g |
| 32G nano | BD | 320122 | BD Nano Ultra Fine Pen Needle-32G 4mm |
| 33G ophalmology needle | TSK/ VWR | TSK3313/ 10147-200 | |
| 5mL syinge | BD | Luer-Lok Tip | |
| AnaSed Injection (xylazine) | Butler Schein | 100 mg/ml, 50 ml | |
| artificial tears | Alcon Laboratories | 300651431414 | Systane Ultra Lubricant Eye Drops |
| BSS PLUS Irrigating solution | Alcon Laboratories | 65080050 | |
| Dual-Stage Glass Micropipette Puller | NARISHIGE | PC-10 | |
| EZ-7000 Classic System | EZ system | ||
| Isoflurane | VetOne | 502017 | isoflurane, USP, 250ml/bottle |
| IV Administration sets | EXELint/ Fisher | 29081 | |
| KETAMINE HYDROCHLORIDE INJECTION | VEDCO | 50989-996-06 | KETAVED 100mg/ml * 10ml |
| microgrind bevelling machine | NARISHIGE | EG-401 | |
| Miniature EVA Tubing | McMaster-Carr | 1883T4 | 0.05" ID, 0.09" OD, 10 ft. Length |
| silicon oil (SILIKON) | Alcon Laboratories | 8065601185 | 1,000 mPa.s |
| Standard Glass Capillaries | WPI/ Fisher | 1B150-4 | 4 in. (100mm) OD 1.5mm ID 0.84mm |
| TonoLab tonometer | Colonial Medical Supply, Finland | ||
| veterinary antibiotic ointment | Dechra Veterinary | 1223RX | BNP ophthalmic ointment, Vetropolycin |
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