Estabelecimento de Infarto Agudo de Pontina em Ratos por Estimulação Elétrica

Summary

Apresentado aqui é um protocolo para estabelecer infarto agudo de pontina em um modelo de rato através de estimulação elétrica com um único pulso.

Abstract

O infarto de pontina é o subtipo de derrame mais comum na circulação posterior, enquanto falta um modelo de roedor imitando infarto de pontina. Desde que aqui esteja um protocolo para estabelecer com sucesso um modelo de rato de infarto agudo de pontina. Ratos pesando cerca de 250 g são usados, e uma sonda com baia isolada é injetada nos pons usando um aparelho estereotaxico. Uma lesão é produzida pela estimulação elétrica com um único pulso. A pontuação de Longa, a pontuação de Berderson e o teste de equilíbrio do feixe são usados para avaliar déficits neurológicos. Além disso, o teste somatossensorial de remoção adesiva é usado para determinar a função sensorial, e o teste de colocação do membro é usado para avaliar propriocepção. As ressonâncias magnéticas são então usadas para avaliar o infarto in vivo, e a coloração TTC é usada para confirmar o infarto in vitro. Aqui, é identificado um infarto bem sucedido que está localizado na base anterolateral dos pons rostral. Em conclusão, um novo método é descrito para estabelecer um modelo agudo de infarto de pontina.

Introduction

Desde a década de 1980, o modelo de oclusão da artéria cerebral média (MCAO) induzido por filamentos de silicone tem sido amplamente utilizado na pesquisa básica de derrame¹. Outros métodos (ou seja, a sutura de um ramo do MCA² e infarto focal induzido fotoquimicamente) também foram utilizados. Esses modelos têm sido denominados modelos de AVC baseados em MCA e têm contribuído muito para investigações dos mecanismos fisiodológicos subjacentes ao AVC e potenciais terapêuticos. Embora existam limitações desses modelos experimentais^3,4, esses métodos têm sido utilizados muitos laboratórios^5,6. Os modelos de avc baseados em MCA representam um derrame na circulação anterior; no entanto, poucos relatos têm investigado modelos que imitam o AVC na circulação posterior⁷.

Há diferenças significativas entre a etiologia, mecanismos, manifestação clínica e prognóstico entre os traços de circulação anterior e posterior⁸. Portanto, os resultados derivados de modelos de traçado de circulação anterior não podem ser aplicados ao curso de circulação posterior. Por exemplo, a janela de tempo de reperfusão para circulação anterior foi estendida para 6h, com uma pequena parcela de estudos estendendo-se para 24 h com base em achados de imagem⁹. No entanto, a janela de tempo para circulação posterior pode ser maior que 24 h, de acordo com relatórios anteriores¹⁰ e nossas próprias experiências clínicas. Esta janela de tempo de reperfusão alongada deve ser mais estudada e confirmada em modelos experimentais.

Em relação aos acidentes vasculares cerebrais de circulação posterior, o infarto de pontina é o subtipo mais comum, representando 7% de todos os casos isquêmicos de AVC^11,12. De acordo com a topografia do infarto, os infartos pontinos são divididos em infartos pontinos isolados e não isolados¹³. Os infartos isolados de pontina são categorizados em três tipos com base nos mecanismos subjacentes: doença arterial grande (LAD), doença do ramo da artéria basilar (BABD) e doença arterial pequena (SAD). O conhecimento dos mecanismos, manifestação e prognóstico do infarto do pontino tem sido derivado de investigações clínicas dos casos¹⁴. No entanto, um modelo de roedor imitando o infarto pontino tem sido menos investigado.

Em estudos anteriores, a lesão difusa do tronco tegmentum envolvendo os pons foi explorada⁷. Um grupo tentou criar um modelo de infarto pontino através da ligadura da artéria basilar (BA)¹⁵. Outro grupo usou uma sutura de monofilamento de nyfilament 10-0 para ligar seletivamente quatro pontos da BA proximal seletivamente¹⁶. Este modelo imita LAD, mas a maioria dos infartos pontinos resultam de BABD e SAD. Além disso, a ligadura seletiva da BA é uma cirurgia complicada e tem uma alta taxa de mortalidade.

Fornecido aqui é um protocolo detalhado para um modelo de rato fácil de executar, facilmente reproduzido e bem sucedido de infarto agudo de pontina por estimulação elétrica.

Protocol

O protocolo foi revisado e aprovado pelo Comitê de Uso e Cuidados Com Animais da Instituição de Cuidados e Uso de Animais do Segundo Hospital Afiliado da Universidade Médica de Guangzhou, uma instituição credenciada pela AAALACi. Os ratos foram fornecidos pelo Centro Animal da Universidade Médica do Sul. 1. Animal Use ratos adultos machos Sprague-Dawley pesando 250 ± 10 g. Após o transporte, abriga os ratos por pelo menos 1 semana antes da cirurgia sob condições …

Representative Results

Seis animais foram submetidos ao protocolo cirúrgico descrito acima. O grupo controle, como mostrado na Figura 4, consistia de seis ratos. As fatias cerebrais mostradas na Figura 4 foram derivadas de um rato por grupo. A ressonância magnética mostrou que o infarto estava localizado na base dos pons(Figura 4A). Uma vez que a sonda foi injetada 2 mm à esquerda da linha média, o infarto foi localizado l…

Discussion

O presente estudo fornece um protocolo para a geração de um modelo agudo de infarto de pontina. Este modelo pode ser usado para pesquisas sobre prognóstico e reabilitação (incluindo dor crônica pós-acidente vascular cerebral) em pacientes com avc pontino.

Há vários pontos fortes deste método. Primeiro, fornece um modelo de rato de infarto agudo de pontina para estudos futuros. Como mencionado acima, o infarto de pontina é um subtipo comum de derrame que tem recebido menos atenção….

Materials

4-0 sucture	Shanghai Jinzhong		Surgical instruments
Adhesive tape	Shanghai Jinzhong		Surgical instruments
Animal anesthesia system	RWD		Wear mask when using the system
Bone cement	Shanghai Jinzhong		Surgical instrument
Cured clamp	Shanghai Jinzhong		Surgical instrument
General tissue scissors	Shanghai Jinzhong		Surgical instrument
IndoPhors	Guoyao of China		Sterilization
Isoflurane	RWD	217181101
Lesion Making Device	Shanghai Yuyan		Making a lesion
MRI system	Bruker Biospin		Confirmation of infarction in vivo
Needle holder	Shanghai Jinzhong		Surgical instrument
Penicilin	Guoyao of China		Infection Prevention
Probe	Anke		Need some modification
Q-tips	Shanghai Jinzhong		Surgical instrument
Shearing scissors	Shanghai Jinzhong		Surgical instrument
Stereotaxic apparatus	RWD
Suture needle	Shanghai Jinzhong		Surgical instrument
Tissue holding forcepts	Shanghai Jinzhong		Surgical instrument
TTC	Sigma-Aldrich	BCBW5177	For infarction confirmation in vitro