Создание острого инфаркта понтий в Крысах электрической стимуляцией
Summary
Здесь представлен протокол для установления острого инфаркта понтий в крысиной модели с помощью электрической стимуляции с одним импульсом.
Abstract
Понтийский инфаркт является наиболее распространенным подтипом инсульта в задней циркуляции, в то время как не хватает модели грызунов, имитирующих инфаркт понтий. Здесь предусмотрен протокол для успешного создания крысиной модели острого инфаркта понтий. Крысы весом около 250 г используются, и зонд с изолированной оболочки вводится в понс с помощью стереотаксического аппарата. Поражение производится электрической стимуляции с одним импульсом. Оценка Лонга, оценка Бердерсона, и тест баланса луча используются для оценки неврологических дефицитов. Кроме того, клей-удаление соматосенсорный тест используется для определения функции сенсомотора, и тест размещения конечностей используется для оценки проприоцепции. МРТ затем используются для оценки инфаркта в vivo, и Окрашивание ТТК используется для подтверждения инфаркта in vitro. Здесь выявляются успешные инфаркты, расположенные на атеролатеральной основе ростальных пон. В заключение, новый метод описывается для создания острой модели инфаркта понтий.
Introduction
С 1980-х годов, средняя мозговая артерия окклюзии (MCAO) модель индуцированных силиконовые нити был широко используется в фундаментальных исследований инсульта1. Были также использованы другие методы (т.е. засеивание одной ветви MCA2 и фотохимически индуцированный очаговой инфаркт). Эти модели были названы MCA основе моделей инсульта и в значительной степени способствовали исследованиям патофизиологических механизмов, лежащих в основе инсульта и потенциальных терапевтических средств. Хотя Есть ограничения этих экспериментальных моделей3,4, эти методы были использованы многие лаборатории5,6. Модели штрихов на основе MCA представляют собой штрих в передней циркуляции; однако, несколько рапортов исследовали модели имитируя ход в задней циркуляции7.
Существуют значительные различия между этиологией, механизмами, клиническим проявлением, и прогнозом между передними и задними ходами циркуляции8. Таким образом, результаты, полученные из передней циркуляции образцов инсульта не могут быть применены к задней циркуляции инсульта. Например, время реперфузии для передней циркуляции было расширено до 6 ч, с небольшой частью исследований, простирающихся до 24 ч на основе изображений выводы9. Тем не менее, временное окно для заднего кровообращения может быть больше, чем 24 ч, в соответствии с предыдущими докладами10 и наш собственный клинический опыт. Это удлиненное временное окно реперфузии должно быть дополнительно изучено и подтверждено в экспериментальных моделях.
Что касается задней инсульта циркуляции, понтийского инфаркта является наиболее распространенным подтипом, на долю которого приходится 7% всех случаев ишемического инсульта11,12. Согласно рельефу инфаркта, инфарктные инфаркты делятся на изолированные и неизолированные инфаркты понтийского инфаркта13. Изолированные инфаркты понтийского типа делятся на три типа на основе основных механизмов: крупное заболевание артерий (LAD), заболевания ветротехнотных артерий (BABD) и мелкой болезни артерий (САД). Знание механизмов, проявления и прогноза инфаркта понтийского инфаркта было получено из клинических исследований14случаев. Тем не менее, модель грызунов, имитирующих инфаркт понтийского образца, была менее исследована.
В предыдущих исследованиях, диффузный мозг tegmentum травмы с участием пон была изучена7. Одна группа попыталась создать модель инфаркта понтийки через перевязку базилярной артерии (BA)15. Другая группа использовала 10-0 нейлона монофильтра шов выборочно ligate четыре точки проксимальной BA выборочно16. Эта модель имитирует LAD, но большинство инфарктов понтийов являются результатом BABD и SAD. Кроме того, селективная перевязка БА является сложной операцией и имеет высокий уровень смертности.
Здесь представлен подробный протокол для легкой в исполнении, легко воспроизводится и успешная крысиная модель острого инфаркта понтий с помощью электрической стимуляции.
Protocol
Representative Results
Discussion
Настоящее исследование представляет собой протокол для генерации острой модели инфаркта понтий. Эта модель может быть использована для исследований по прогнозу и реабилитации (в том числе после инсульта хронической боли) у пациентов с понтийным инсультом.
Есть несколь?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Это исследование было финансово поддержано Национальным научным фондом Китая (81471181 и 81870933) И. Цзян и Национальным научным фондом Китая (No 81601011), Фондом естественных наук провинции Цзянсу (Нет. BK20160345) для J. Чжу и научной программы Гуанчжоу муниципальной комиссии по здравоохранению (20191A011083) к З. Цю.
Materials
| 4-0 sucture | Shanghai Jinzhong | Surgical instruments | |
| Adhesive tape | Shanghai Jinzhong | Surgical instruments | |
| Animal anesthesia system | RWD | Wear mask when using the system | |
| Bone cement | Shanghai Jinzhong | Surgical instrument | |
| Cured clamp | Shanghai Jinzhong | Surgical instrument | |
| General tissue scissors | Shanghai Jinzhong | Surgical instrument | |
| IndoPhors | Guoyao of China | Sterilization | |
| Isoflurane | RWD | 217181101 | |
| Lesion Making Device | Shanghai Yuyan | Making a lesion | |
| MRI system | Bruker Biospin | Confirmation of infarction in vivo | |
| Needle holder | Shanghai Jinzhong | Surgical instrument | |
| Penicilin | Guoyao of China | Infection Prevention | |
| Probe | Anke | Need some modification | |
| Q-tips | Shanghai Jinzhong | Surgical instrument | |
| Shearing scissors | Shanghai Jinzhong | Surgical instrument | |
| Stereotaxic apparatus | RWD | ||
| Suture needle | Shanghai Jinzhong | Surgical instrument | |
| Tissue holding forcepts | Shanghai Jinzhong | Surgical instrument | |
| TTC | Sigma-Aldrich | BCBW5177 | For infarction confirmation in vitro |
References
- Zhu, J., et al. Suppression of local inflammation contributes to the neuroprotective effect of ginsenoside Rb1 in rats with cerebral ischemia. Neurosciences. 202, 342-351 (2012).
- Xu, X., et al. MicroRNA-1906, a Novel Regulator of Toll-Like Receptor 4, Ameliorates Ischemic Injury after Experimental Stroke in Mice. Journal of Neuroscience. 37, 10498-10515 (2017).
- McBride, D. W., Zhang, J. H. Precision Stroke Animal Models: the Permanent MCAO Model Should Be the Primary Model, Not Transient MCAO. Translational Stroke Research. , (2017).
- Liu, F., McCullough, L. D. Middle cerebral artery occlusion model in rodents: methods and potential pitfalls. Journal of Biomedicine & Biotechnology. 2011, 464701 (2011).
- Jiang, Y., et al. A new approach with less damage: intranasal delivery of tetracycline-inducible replication-defective herpes simplex virus type-1 vector to brain. Neurosciences. 201, 96-104 (2012).
- Lopez, M. S., Vemuganti, R. Modeling Transient Focal Ischemic Stroke in Rodents by Intraluminal Filament Method of Middle Cerebral Artery Occlusion. Methods in Molecular Biology. 1717, 101-113 (2018).
- Pais-Roldan, P., et al. Multimodal assessment of recovery from coma in a rat model of diffuse brainstem tegmentum injury. NeuroImage. 189, 615-630 (2019).
- Merwick, A., Werring, D. Posterior circulation ischaemic stroke. The British Medical Journal. 348, 3175 (2014).
- Nogueira, R. G., et al. Thrombectomy 6 to 24 Hours after Stroke with a Mismatch between Deficit and Infarct. The New England Journal of Medicine. 378, 11-21 (2018).
- Wilkinson, D. A., et al. Late recanalization of basilar artery occlusion in a previously healthy 17-month-old child. Journal of Neurointerventional Surgery. 10, 17 (2018).
- Huang, R., et al. Stroke Subtypes and Topographic Locations Associated with Neurological Deterioration in Acute Isolated Pontine Infarction. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases: The Official Journal of National Stroke Association. 25, 206-213 (2016).
- Jiang, Y., et al. In-stent restenosis after vertebral artery stenting. International Journal of Cardiology. 187, 430-433 (2015).
- Huang, J., et al. Topographic location of unisolated pontine infarction. BMC Neurology. 19, 186 (2019).
- Banerjee, G., Stone, S. P., Werring, D. J. Posterior circulation ischaemic stroke. The British Medical Journal. 361, 1185 (2018).
- Wojak, J. C., DeCrescito, V., Young, W. Basilar artery occlusion in rats. Stroke: A Journal of Cerebral Circulation. 22, 247-252 (1991).
- Namioka, A., et al. Intravenous infusion of mesenchymal stem cells for protection against brainstem infarction in a persistent basilar artery occlusion model in the adult rat. Journal of Neurosurgery. , 1-9 (2018).
- Jiang, Y., et al. Intranasal brain-derived neurotrophic factor protects brain from ischemic insult via modulating local inflammation in rats. Neurosciences. 172, 398-405 (2011).
- Schaar, K. L., Brenneman, M. M., Savitz, S. I. Functional assessments in the rodent stroke model. Experiments in Translational and Stroke. 2, 13 (2010).
- Wu, L., et al. Keep warm and get success: The role of postischemic temperature in the mouse middle cerebral artery occlusion model. Brain Research Bulletin. 101, 12-17 (2014).
- Wen, Z., et al. Optimization of behavioural tests for the prediction of outcomes in mouse models of focal middle cerebral artery occlusion. Brain Research. 1665, 88-94 (2017).
