신장 피 질 추출 물에서 혈관 내 피 성장 인자와 황 호르몬 사이의 선형 관계를 보여주는
Summary
여기에 제시된 것은 포유류 신장에서 혈관 내피 성장 인자와 황체 형성 호르몬 사이의 상관관계를 입증하기 위해 피질 신장 추출물 제제 및 총 단백질 정규화를 활용하기 위한 프로토콜이다.
Abstract
혈관 내피 성장 인자 (VEGF)는 신장에서 혈관 신생 및 혈관 투과성을 제어하는 데 도움이됩니다. 당뇨병 신증과 같은 신장 장애는 신장의 VEGF dysregulation와 관련이 있습니다. 신장에 있는 생리적인 조건의 밑에 VEGF를 통제하는 요인은 잘 이해되지 않습니다. 황체 형성 호르몬 (LH), 프로 혈관 신생 호르몬, 생식 기관에서 생리 VEGF 발현을 조절 하는 데 도움이. LH 수용체가 신장에서 발견된다는 것을 감안할 때, 우리는 Zietchick 연구소에서 LH가 또한 신장에 있는 VEGF 발현을 통제하는 것을 돕다는 가설을 세워주었습니다. 증거를 제공하기 위해, 우리는 LH 수준이 포유류 신장에서 VEGF 수준을 예측 할 수 있음을 보여주기 위해 목표로. 신장을 관련시키는 대부분의 VEGF 관련 조사는 모형으로 더 낮은 순서 포유동물을 이용했습니다 (즉, 설치류 및 토끼). 이 작업을 인체로 번역하기 위해, VEGF와 LH 사이의 관계를 고차 포유류(즉, 소 및 돼지 모델)에서 조사하기로 결정했다. 이 프로토콜은 신장 피질에서 총 단백질 용해를 사용합니다. 이 방법의 성공의 열쇠는 총 단백질에 의하여 분석물 수준 (신장 추출물에서)의 정상화 뿐만 아니라 죽음 직후에 도축장 동물에게서 신장의 조달을 포함합니다. 이 연구는 소와 돼지 신장 모두에서 LH와 VEGF 사이의 유의한 선형 관계를 성공적으로 보여줍니다. 결과는 두 가지 다른 종에서 재현 할 수 있습니다. 이 연구는 소와 돼지의 신장 추출물 사용이 특히 VEGF와 다른 세포체 간의 상관 관계를 검사하기 위해 신장 생리학 연구를 위한 우수하고 경제적이며 풍부한 자원이라는 증거를 제공합니다.
Introduction
혈관 내피 성장 인자 A(VEGF-A)는 신장 및 다른 장기의 혈관 신생 및 혈관 투과성을 조절하는 데 도움을 주며1,2 (이하, VEGF-A는 VEGF로 지칭될 것이다). 신장에 있는 VEGF 수준은 단단한 적시성 통제의 밑에 있습니다. 신장 VEGF 수준이 상승하거나 우울할 때, 신장은 오작동할 수 있습니다. 예를 들어, 출생 후 3주 이내에, VEGF에 대한 포도극세포 특이적 이종이성 마우스는 내피증및 무혈 사구체(즉, 인간 자간전증에서 보인 신장 병변)를 개발하고, 말기 신부전은 3개월까지 이 헤테로고트에서 발생한다. Podocyte 특정 동형 접합 녹아웃은 출생의 1 일 안에 수소화 및 신부전으로정지합니다3,4.
한편, 신장 VEGF의 과발현은 단백뇨 및 사구체비대3,4를유발한다. 예를 들어, VEGF를 과발현하는 형질전환 토끼는 신병증의 초기 단계에서 증가된 사구체 여과 속도를 가진 진보적인 단백뇨를 나타내고, 그 다음에 는 후기3단계에서사구체 여과 속도 감소하였다. 당뇨병 성 신증, 당뇨병 성인에서 말기 신장 질환의 주요 원인, VEGF dysregulation와 강하게 관련2,5. 병리학적 조건 하에서 VEGF 발현을 유도하는 저산소증의 역할에 많은 주의를 기울였다5. 그러나, 생리적 조건 하에서 VEGF를 지배하는 요인은 (신장및 그밖 기관 둘 다) 잘 이해되지 않습니다2,6. 생리학적 및 병리학적 VEGF 조절에 관여하는 이러한 인자(산소 제외)를 식별하는 것은 중요한 사업이다.
황체 형성 호르몬 (LH), 프로 혈관 신생 호르몬, 난소와 고환 등 생식 기관에서 생리 VEGF 발현을 조절 하는 데 도움이7,8. 이전 연구는 LH가 또한 눈6,9,10과같은 비 생식 기관에서 VEGF를 조절하는 데 도움이 된다는 증거를 제공했다. LH 수용체는신장11,12의수질및 피질에서 발견된다. 참고로, 신장 관상피 세포뿐만 아니라 LH 수용체, VEGF11,12,13,14를발현한다. 이 두 가지 관찰을 함께 복용, 우리는 LH는 또한 신장에서 VEGF 발현을 조절하는 데 도움이 가설13,14. 이 LH/VEGF 관계의 증거를 제공하기 위하여, 제시된 프로토콜은 LH 수준이 신장에 있는 VEGF 수준을 예측할 수 있다는 것을 보여주기 위하여. 신장과 관련된 많은 이전 VEGF 관련 조사는 낮은 순서의 포유동물 모델 (즉, 설치류 및토끼)를 사용했습니다 2. 이 작업을 인체로 번역하기 위해, 연구는 높은 순서의 포유동물 (여기, 소 및 돼지 모델)에서 VEGF와 LH 사이의 관계를 검사합니다. 이 목적을 수행하기 위하여는, 총 단백질 lysate는 소 및 돼지 신장의 피질 지역으로부터 제조되었다.
Protocol
Representative Results
Discussion
동물 사망 직후 abattoir에서 신장을 조달하는 것이이 방법론에서 성공의 열쇠입니다. 이것은 인간의 시체 대신 소와 돼지에서 장기를 활용의 주요 장점입니다. 인간 시체 기관이 조달 될 때까지 일반적으로 죽음의 시간에서 적어도 12-24 시간 지연이 있다. 신체 기관의 화학적 조성이 2시간 이내에 크게 변화하기 때문에15,16,인간 시체 신장에서의 VEGF-연구?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 소와 돼지 신장을 제공 에 대한 Scholl의 도살장 (블리스 필드, MI)에 감사드립니다. 이 연구에는 보조금이 사용되지 않았습니다.
Materials
| Bovine LH ELISA Kit | MyBiosource, San Diego, CA. | MBS700951 | |
| Bovine VEGF-A ELISA Kit | MyBiosource, San Diego, CA. | MBS2887434 | |
| Micro BCA Protein Assay Kit | ThermoFisher Scientific Inc, Columbus, OH. | 23235 | |
| Porcine LH ELISA Kit | MyBiosource, San Diego, CA. | MBS009739 | |
| Porcine VEGF-A ELISA | Ray Biotech, Norcross, GA. | ELP-VEGFA-1 | |
| RIPA Lysis and Extraction Buffer | ThermoFisher Scientific Inc, Columbus, OH. | 89901 |
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