Представлен протокол для использования корковой подготовки экстракта почки и полной нормализации белка, чтобы продемонстрировать корреляцию между сосудистым эндотелиальным фактором роста и лютеинизирующим гормоном в почках млекопитающих.
Сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF) помогает контролировать ангиогенез и проницаемость сосудов в почках. Почечные расстройства, такие как диабетическая нефропатия, связаны с дисрегуляцией VEGF в почках. Факторы, которые регулируют VEGF в физиологических условиях в почках, не очень хорошо поняты. Лютеинизирующий гормон (ЛГ), проангиогенный гормон, помогает регулировать физиологическое экспрессию VEGF в репродуктивных органах. Учитывая, что LH-рецепторы находятся в почках, мы, в научно-исследовательском институте Зичика, предположили здесь, что LH также помогает регулировать экспрессию VEGF в почках, а также. Чтобы представить доказательства, мы стремились показать, что уровни ЛГ способны предсказать уровень VEGF в почках млекопитающих. Большинство исследований, связанных с VEGF, связанных с почками, использовали млекопитающих более низкого порядка в качестве моделей (т.е. грызунов и кроликов). Чтобы перевести эту работу на человеческое тело, было решено изучить взаимосвязь между VEGF и LH в более высоком порядке млекопитающих (т.е. бычьих и свиных моделей). Этот протокол использует общий лизат белка из коры почек. Ключи к успеху этого метода включают закупку почек у скотобойни животных сразу после смерти, а также нормализацию уровня анализов (в экстракте почек) по общему белку. Это исследование успешно демонстрирует значительную линейную связь между LH и VEGF как в бычьих, так и в свиных почках. Результаты воспроизводимы в двух различных видах. Исследование предоставляет подтверждающие доказательства того, что использование экстрактов почек из коров и свиней являются отличным, экономичным и обильным ресурсом для изучения почечной физиологии, особенно для изучения корреляции между VEGF и другими анализами.
Сосудистый эндотелиальный фактор роста А (VEGF-A), помогает регулировать ангиогенез и проницаемость сосудов в почках и других органах1,2 (далее, VEGF-A будет называться VEGF). Уровни VEGF в почках находятся под жестким гомеостатическим контролем. Когда почечные уровни VEGF повышены или подавлены, почка может выйти из строя. Например, в течение 3 недель после рождения у мышей с подоцит-специфической гетерозиготностью для VEGF развивается эндотелиоз и бескровные гломерули (т.е. поражения почек, наблюдаемые в преэклампсии человека), а конечная стадия почечной недостаточности возникает в этих гетерозиготах к 3 месяцам возраста. Подоцит-специфические гомозиготические нокауты умирают от гидропов и почечной недостаточности в течение 1 дня после рождения3,4.
С другой стороны, переэкспрессия почечной VEGF вызывает протеинурию и гломерулярную гипертрофию3,4. Например, трансгенные кролики, которые переэкспрессveve VEGF экспонат прогрессивной протеинурии с повышенной гломерулярной фильтрации ставки на ранних стадиях нефропатии, а затем снижение гломерулярной фильтрации ставки на более поздних стадиях3. Диабетическая нефропатия, основная причина почечной болезни конечной стадии у взрослых диабетиков, тесно связана с VEGF дисрегуляции2,5. Большое внимание было уделено роли гипоксии в индуцировании экспрессии VEGF при патологических условиях5. Тем не менее, факторы, регулирующие VEGF в физиологических условиях (как в почках и других органах) не очень хорошопонимали2,6. Выявление этих факторов (кроме кислорода), которые участвуют в физиологической и патологической регуляции VEGF является важным мероприятием.
Лютеинизирующий гормон (ЛГ), проангиогенный гормон, помогает регулировать физиологическое экспрессию VEGF в репродуктивных органах, таких как яичники и яички7,8. Предыдущие исследования показали, что LH также помогает регулировать VEGF в невоспроизводственных органов, таких как глаза6,9,10. LH-рецепторы находятся в медулле и коре почек11,12. Следует отметить, что почечные трубчатые эпителиальные клетки, а также lH-рецептор, выражают VEGF11,12,13,14. Принимая эти два наблюдения вместе, мы предположили, что LH также помогает регулировать экспрессию VEGF в почках13,14. Чтобы представить доказательства этой взаимосвязи LH/VEGF, представленный протокол призван показать, что уровни ЛГ способны предсказывать уровни VEGF в почках. Многие предыдущие исследования, связанные с VEGF, связанные с почками, использовали модели млекопитающих более низкого порядка (т.е. грызуны и кролики)2. Для перевода этой работы на человеческое тело, исследование рассматривает связь между VEGF и LH в более высоком порядке млекопитающих (здесь, бычьих и свиных моделей). Для достижения этой цели из области коры бычьего и свиного почек был приготовлен тотальный белковый лизат.
Приобретение почек из скотобойни сразу после смерти животного является ключом к успеху в этой методологии. Это главное преимущество использования органов коров и свиней вместо человеческих трупов. Существует, как правило, по крайней мере 12-24 ч задержки с момента смерти, пока человечес?…
The authors have nothing to disclose.
Авторы благодарят Бойню Шолля (Blissfield, MI) за предоставление бычьих и свиных почек. Для этого исследования не было использовано грантового финансирования.
Bovine LH ELISA Kit | MyBiosource, San Diego, CA. | MBS700951 | |
Bovine VEGF-A ELISA Kit | MyBiosource, San Diego, CA. | MBS2887434 | |
Micro BCA Protein Assay Kit | ThermoFisher Scientific Inc, Columbus, OH. | 23235 | |
Porcine LH ELISA Kit | MyBiosource, San Diego, CA. | MBS009739 | |
Porcine VEGF-A ELISA | Ray Biotech, Norcross, GA. | ELP-VEGFA-1 | |
RIPA Lysis and Extraction Buffer | ThermoFisher Scientific Inc, Columbus, OH. | 89901 |