Le protocole présente un modèle murine TNBS-induit complet de Crohn' la maladie de s et des méthodes pour visualiser des récepteurs d’oestrogène par immunohistochemistry utilisant l’immunofluorescence des sections formelles-fixes de colon incorporées dans la paraffine.
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Article de méthode
Visualisation des récepteurs d’oestrogène dans les colons des souris atteints de la maladie de Crohn induite par le TNBS à l’aide de l’immunofluorescence
Dans cet article
Résumé
Résumé
La maladie de Crohn est le type le plus diagnostiqué de maladie inflammatoire de l’intestin. L’inflammation chronique se développant dans l’intestin mène au désordre de périsphyse et aux dommages de la muqueuse intestinale et semble être associée à un risque accru de transformation néoplastique du côlon. L’accumulation de preuves indique que les œstrogènes et les récepteurs d’oestrogène affectent non seulement les tissus hormono-sensibles, mais aussi d’autres tissus non directement liés aux oestrogènes, tels que les poumons ou les colons. Ici, nous décrivons le protocole pour la coloration réussie d’immunofluorescence des récepteurs d’oestrogène dans le côlon obtenu d’un modèle murin de Crohn-induit de TNBS' la maladie de s. Un protocole détaillé pour l’induction de crohn' la maladie de s chez la souris et la préparation d’intestin est fourni aussi bien qu’une procédure immunohistochimique étape par étape utilisant des sections formelles-définies d’intestin paraffin-embedded. Les méthodes décrites sont non seulement utiles pour la détection des récepteurs d’oestrogène et l’étude de signalisation d’oestrogène in vivo mais peuvent également être appliquées pour d’autres protéines qui peuvent être impliquées dans le développement de la colite.
Introduction
Crohn' la maladie de s (CD) est une maladie inflammatoire d’entrailles (IBD) manifestée comme inflammation chronique d’intestin. L’étiologie du CD est mal comprise, mais il ya quelques facteurs majeurs qui semblent être responsables du développement de CD, y compris le microbiote intestinal, et des facteurs génétiques et environnementaux, tels que l’alimentation ou le stress1. Pour une meilleure compréhension de la pathogénie de la maladie de Crohn, plusieurs modèles d’inflammation intestinale ont été utilisés2,3,4,5<....
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Protocole
Des études sur les animaux ont été menées avec le consentement du Comité local d’éthique (28/29/2016) conformément à la directive 2010/63/UE du Parlement européen et du Conseil du 22 septembre 2010, ainsi que des recommandations institutionnelles.
1. Modèle murin induit par TNBS de la maladie de Crohn
REMARQUE : Ce protocole utilise des souris BALB/C mâles pesant 25-28 g. Les animaux sont logés à une température constante (22-24 oC) et, humidité relative 55 à 5%, et maintenus dans un cycle léger/obscurité de 12 h avec un accès gratuit aux granulés standard et à l’eau du robinet ad libitum.
- Plac....
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Résultats
Caractéristiques macroscopiques des colons chez les souris atteintes de la maladie de Crohn induite par TNBS
Des images représentatives des colons prélevés sur le contrôle et des souris traitées par TNBS sont montrées dans la figure 2. Chez les souris avec un modèle TNBS-induit de la maladie de Crohn, la longueur du côlon est réduite tandis que la largeur du côlon est augmentée.
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Discussion
Il existe de nombreux modèles animaux pour l’examen de pathophysiologie des MII, y compris les modèles génétiques, immunologiques ou spontanés, ainsi que les modèles chimiquement induits15. Parmi les plusieurs types de modèles animaux de colite, les modèles induits chimiquement tels que le modèle induit par TNBS décrit dans ce protocole, sont relativement peu coûteux et faciles à obtenir. Le modèle murine TNBS-induit de la colite a plusieurs symptômes cliniques liés à la base pathologique de CD. L.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Les travaux ont été publiés grâce au soutien financier des autorités de l’Université de Lodz : vice-recteur à la recherche scientifique, vice-recteur à la coopération nationale et internationale et doyen de la Faculté de biologie et de protection de l’environnement. Damian Jacenik a été soutenu par des subventions (2017/24/T/NZ5/00045 et 2015/17/N/NZ5/00336) du Centre national des sciences, en Pologne.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Animals | |||
| BALB/C | souris Université de Lodz | NA | |
| strong>Equipment | |||
| Caliper | VWR | 62379-531 | |
| Bloc de carton | NA | NA | |
| Microscope confocal - TCS SP8 | Leica Biosystems | NA | |
| Microtome rotatif entièrement automatisé - RM2255 | Leica Biosystems | NA | |
| Lame de verre | Thermo Scientific | J1800BMNT | |
| Module d’enrobage de paraffine chauffée - EG1150 H | Leica Biosystems | NA | |
| Boîte histologique | Marfour | LN.138747 | |
| Stylo hydrophobe | Sigma-Aldrich | Z377821 | |
| Balance de laboratoire | Radwag | WL-104-0048 | |
| Logiciel LAS X | Leica Biosystems | NA | |
| Moule métallique | Marfour | CP.5105 | |
| Gaze stérile | NA | NA | |
| Ciseaux stériles | NA | NA | |
| Pince à épiler stérile | NA | NA | |
| Processeur de tissus - TP1020 | Leica Biosystems | NA | |
| strong>Reagents | |||
| 2, 4, 6-trinitrobenzène sulfonic | Sigma-Aldrich | 92822 | |
| Albumine sérique bovine | Sigma-Aldrich | A3294 | |
| DiOC6 (3) | Sigma-Aldrich | 318426 | |
| DyLight 650 anticorps secondaire | Abcam | ab96886 | |
| ER&alpha ; anticorps primaire | Abcam | ab75635 | |
| ER&beta ; anticorps primaire | Abcam | ab3576 | |
| Éthanol | Avantor Performance Materials Pologne | 396480111 | |
| Formaldéhyde | Avantor Performance Materials Poland | 432173111 | |
| GPER anticorps primaire | Abcam | ab39742 | |
| Acide chlorhydrique | Avantor Performance Materials Pologne | 575283421 | |
| Hydrogen peroxidase | Avantor Performance Materials Poland | 885193111 | |
| isoflurane (forane) | Baxter | 1001936040 | |
| Sérum de chèvre normal | Gibco | 16210064 | |
| Paraffine | Leica Biosystems | 39602012 | |
| Boîte de Pétrie | Nest | Scientific 705001 | |
| Tampon phosphate salin | Sigma-Aldrich | P3813 | |
| Saline physiologique | Sigma-Aldrich | 7982 | |
| Primocin (antibiotique) | Invitrogen | ant-pm-1 | |
| ProLong Diamond Antifage Mountant avec DAPI (liquide à base de glycérol avec DAPI) | Invitrogen | P36971 | |
| Chlorure de sodium | Chempur | WE/231-598-3 | |
| Citrate de sodium | Avantor Performance Materials Pologne | 795780429 | |
| Tris | Avantor Performance Materials Poland | 853470115 | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8787 | |
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | P9416 | |
| Xylene | Avantor Performance Matériaux Pologne | BA0860119 |
Références
- Zhang, Y. Z., Li, Y. Y. Inflammatory bowel disease: pathogenesis. World Journal of Gastroenterology. 20 (1), 91-99 (2014).
- Morris, G. P., et al. Hapten-induced model of chronic inflammation and ulceration in the rat colon. Gastroenterology. 96<....
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Réimpressions et autorisations
